摘要
利用正交设计L9（3^4），对瓠瓜ISSR—PCR反应体系的4因素（dNTP、71物、Mg^2＋、Taq酶）在3水平上进行优化试验，建立适合瓠瓜ISSR—PCR反应体系，结果表明，在25μL反应体系中，含1×PCRbuffer、200μmol·L^-1dNTP、0．5μmol·L^-1引物、2．5mmol·L^-1MgCl2、30ng模板DNA、0．75U的Taq酶为最佳处理；通过PCR梯度测验，瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2～6℃。
The ISSR - PCR amplification system in Lagenaria siceraria （Molina） Stand was optimized by using orthogonal design with 3 levels of 4 factors （i. e. , dNTP,primer,Mg^2＋ and Taq DNA polymerase）. The optimal reaction conditions of ISSR - PCR were： 1 ×PCR buffer, 200 μmol · L^-1 dNTP, 0.5 μmol · L^-1 primer, 2.5 mmol · L^-1 MgCl2,30 ng template DNA and 0.75 U Taq DNA polymerase in 25 μL reaction volume. The optimized annealing temperature was 2-6℃ higher than the Tm of the corresponding primer by gradient PCR.
出处
《福建农业学报》
CAS
2008年第2期182-185,共4页
Fujian Journal of Agricultural Sciences
基金
福州市科技星火项目(2005-03)
关键词
瓠瓜
ISSR
正交设计
梯度PCR
Lagenariasiceraria （Mol.）Standl.
ISSR
orthogonal design
gradient PCR
