摘要
以核酸酶P1酶解RNA产物为材料,对离子交换树脂分离混合5’-核苷酸的工艺条件进行研究,并通过建立的RP-HPLC检测方法鉴定单核苷酸分离效果。结果表明,阳离子交换树脂NH-1可使4种单核苷酸有效分离,洗脱顺序依次为UMP→GMP→CMP→AMP;最佳分离条件为:色谱柱径高比=1∶20,RNA酶解液上样浓度20g/L,吸附时间8h,洗脱流速0.5mL/min。确定RP-HPLC C18反相柱的色谱条件为:流动相KH2PO4-甲醇,在30mmol/L KH2PO4(pH 5.5)以及0.5mL/min流速条件下,按照KH2PO4∶甲醇=100∶0→97∶3,15min,97∶3→95∶5,1min进行梯度洗脱。通过外标法对混合单核苷酸的分离效果进行检测,证明增加吸附时间是改善分离效果的重要因素。
出处
《中国医药指南》
2010年第21期45-48,共4页
Guide of China Medicine
