摘要
以暗纹东方鲀基因组DNA为材料,利用正交设计L16(45)对影响暗纹东方鲀SRAP-PCR反应的5个因素(Mg2+、Taq酶、dNTPs、模板DNA、引物)在4个水平上进行正交组合,确立了暗纹东方鲀SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+1.5 mmol·L-1、Taq酶0.5 U、模板DNA 75 ng、dNTPs 0.15 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1。利用30个暗纹东方鲀样本对该体系进行验证,结果表明该体系稳定可靠。
Using genomic DNA of Takifugu obscurus,SRAP-PCR amplification system of Takifugu obscurus was optimized using orthogonal design based on five influencing factors of the amplification efficiency（Mg2＋,Taq DNA polymerase,dNTPs,DNA template,primer） at four levels.The results showed that the optimal 20 μL SRAP-PCR reaction system contained Mg2＋ 1.5mmol·L-1,TaqDNA polymerase 0.5 U,dNTPs 0.15 mmol·L-1,template DNA 75 ng and primer 0.2 μmol·L-1.The optimized SRAP-PCR system was tested for 30 Takifugu obscurus germplasms and proved to be stable and reliable.
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2011年第6期1084-1089,共6页
Acta Agriculturae Zhejiangensis
基金
公益性行业(农业)科研专项/长江下游水生生物增殖放流研究及数字化平台开发(20090304803)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院淡水渔业研究中心)(2011JBFA052011JBFA06)
关键词
暗纹东方鲀
SRAP
正交设计
优化
Takifugu obscurus
SRAP
orthogonal design
optimization
