摘要
建立并优化了石蒜属Lycoris植物的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)反应体系,为研究石蒜属种质资源的遗传多样性、亲缘关系及遗传改良提供新的思路。采用L25(56)正交试验和单因素试验2种方法优化石蒜属植物SCoT-PCR体系。得出石蒜属植物SCoT-PCR最佳反应体系:DNA模板2.0 mg.L-1,引物0.125μmol.L-1,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)0.2 mmol.L-1,镁离子(Mg2+)3.0 mmol.L-1,Taq DNA聚合酶1.0×16.67nkat。对优化的反应体系进行通用性、稳定性及可靠性检测,结果均能获得丰富、稳定、清晰的DNA谱带。最后可知SCoT新型标记在石蒜属植物中应用效果良好,可为石蒜属植物以后的研究提供基础条件。
An optimal SCoT （start condon tagreted polymorphism）-PCR （polymerase chain reaction） amplification system was established to provide a new way of studying genetic diversity and genetic improvement in Lycoris. This system was optimized based on the L25（56）orthogonal experiment and single factor experiment. Results showed that the optimal reaction system （20 μL）contained 2.0 mg-Lq DNA template, 0.125 μmol.L-1 primers, 0.2 mmol.L-1 dNTPs, 3.0 mmol.L-1 Mg2＋, and 1.0 ×16.67 nkat Taq DNA polymerase. 34 materials of Lycoris were randomly selected and the test was repeated 3 times. Using this optimal reaction system, stable and clear polymorphic bands were acquired. These favorable results could provide a scientific basis for further study ofLycoris.[Ch, 7 fig. 6 tab. 25 ref.]
出处
《浙江农林大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期444-452,共9页
Journal of Zhejiang A&F University
基金
国家自然科学基金资助项目(30600484)
浙江省自然科学基金资助项目(Y3100406
Y305349)
关键词
植物学
石蒜属
目标起始密码子多态性
PCR反应体系
正交设计
单因素试验
botany
Lycoris
SCoT （start condon tagreted polymorphism）
PCR （polymerase chain reaction）
orthogonal design
single factor experiment
