摘要
目的建立扩增孕妇血浆中游离胎儿DNA(cff DNA)的方法,并对该方法在21-三体综合征产前诊断中的应用价值进行分析,以期提高21-三体综合征产前检出率,提高优生率。方法选择2014年10月~2017年4月本院行产前优生优育检查的60例高危21-三体综合征胎儿孕妇作为研究对象,取所有孕妇的空腹肘静脉血进行PCR扩增血浆中游离胎儿DNA的方法构建研究,提取血浆中胎儿游离DNA,分别在76~83℃温度条件下对不同长度的DNA模板进行扩增,分别在76.6~86.6℃温度条件下对连接DNA进行整体扩增,分别在80~86.9℃温度条件下对整体扩增的影响,在81.4~86.9℃温度对整体扩增效率的影响。总结不同温度对cff DNA监测时PCR扩增的效果影响,根据上述结果构建扩增片段长度多态性(AFLP)方法检测cff DNA的方法。对60例孕妇cff DNA按照传统和新构建的AFLP方法对不同的模板进行扩增,比较两种ALFP对不同长度目的产物片段的整体效率并比较。分别进行60例孕妇中49例行羊膜腔穿刺取羊水行胎儿DNA检测,11例孕妇流产,孕妇流产过程中取羊水进行DNA检测。对60例孕妇cff DNA按照传统和新构建的AFLP方法分别进行21-三体综合征检测。以羊膜腔穿刺DNA检测和流产胎儿组织DNA检测结果为金标准,计算传统和新构建AFLP方法检测的cff DNA中21-单体综合征的敏感度、特异度、准确度。结果 79.9~82.4℃温度范围可有效提高<300bp片段的cff DNA小片段扩增,而>300bp片段扩增效果差,这一温度范围可有效分离母体DNA与胎儿游离DNA。80.4℃-82.4℃可有效区分链接后cff DNA模板扩增图像,82.6℃-84.2℃变性温度可有效区分片段长度500bp目标片段,选择80-83℃扩增温度条件是适合cff DNA扩增效果的变性温度。新构建AFLP扩增法可有效提升产前诊断21-三体综合征的诊断特异度度和准确度。结论在一定范围内降低PCR反应的变性温度能够引起cf DNA连接接头后整体扩增中大片段模板不能有效扩增,同时不影响小片段模板的扩增。可达到和有效区分母源性和胎源性DNA的效果,提升诊断的准确率,提升产前遗传优生指导正确性。
出处
《中国优生与遗传杂志》
2017年第12期30-32,57,共4页
Chinese Journal of Birth Health & Heredity
