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以变色酸2R为底物测定辣根过氧化物酶的研究 被引量:10

Determination of Horseradish Peroxidase Based on Enzymatic Reaction Using Chromotrope 2R as Substrate
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摘要 变色酸 2R(CT2R)是一种具有电化学活性的物质 ,在碱性条件下 ,该物质在滴汞电极上 - 6 6 0mV(vs.SCE)左右产生还原波 ,加入H2 O2 和辣根过氧化物酶 (HRP)后 ,该物质被氧化生成具有非电化学活性的物质 ,导致溶液中游离的CT2R浓度降低 ,相应还原波波高降低 ,HRP在一定含量范围内与伏安峰的降低值具有良好的线性关系。通过测定波高的降低值可测定HRP ,测定游离HRP的线性范围是 4 .0× 10 -5~ 4 .0× 10 -3 g/L。对酶促反应的动力学进行了研究 ,反应的米氏常数Km =1.38mmol/L ,最大反应速率Vmax=5 3.9nA/min。 A new voltammetric enzyme-linked immunoassay system based on chromotrope 2R(CT2R) as substrate has been developed. In pH 10.0 Britton-Robinson ( B-R) buffer solution, CT2R produces a sensitive voltammetric peak at the potential of -660 mV (vs. SCE). Horseradish peroxidase (HRP) catalyzes the oxidation reaction of CT2R by H2O2, and the peak current of CT2R decreases in a certain concentration range of HRP. The decrease of the peak current is directly proportional to the concentration of HRP in a range of 4.0 x 10(-5) similar to4.0 x 10(-3) g/L with a detection limit of 2.0 x 10(-5) g/L. The kinetic constant of the enzyme-catalyzed reaction K-m is 1.38 x 10(-3) mol/L, and the maximum reaction rate V-max is 53.9 nA/min.
出处 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期593-597,共5页 Chinese Journal of Analytical Chemistry
基金 国家自然科学基金资助项目 (No .2 0 0 75 0 13)
关键词 变色酸2R 底物 辣根过氧化物酶 酶联免疫分析 伏安法 电化学活性 反应速率 chromotrope 2R horseradish peroxidase electrochemical enzyme-linked inummoassay voltammetry
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