1585名医学专业女生原发性痛经影响因素调查 被引量：44

1

作者 张洪 朱美玉 +3 位作者 严冰华 严靖雯 蔡晓旋 伍建敏 《中国校医》 2008年第3期287-288,290,共3页

目的探讨青年期女性痛经发生情况及其影响因素,以便为女性开展身心保健采取有效对策。方法采取随机抽样的方法,对广东医学院的1 585名女学生进行调查。结果①青年期女性痛经的发生率为74.03%(1 205/1 585),其中轻度为64.40%(776/1 585)... 目的探讨青年期女性痛经发生情况及其影响因素,以便为女性开展身心保健采取有效对策。方法采取随机抽样的方法,对广东医学院的1 585名女学生进行调查。结果①青年期女性痛经的发生率为74.03%(1 205/1 585),其中轻度为64.40%(776/1 585),中度为27.22%(328/1 585),重度为8.38%(101/1 585)。②单因素分析有统计学意义的有:吃生冷食物、受冷、营养状况、饮料选择、睡眠体位。结论原发性痛经在青年女性中具有较高的发生率,不良的生物因素、社会因素等可诱发痛经的发生。 展开更多

关键词 痛经 学生 医学

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伪狂犬病病毒GD1406变异株的抗原性分析 被引量：3

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作者 侯文凤 林辉 +5 位作者 王凤求 赵玉林 伍建敏 王衡 李中圣 远立国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期621-625,共5页

为了解近年来广东省伪狂犬病病毒(PRV)变异情况,本研究从猪场收集Bartha-K61活疫苗免疫后的猪血清559份,经ELISA筛选出326份gB抗体阳性且gE抗体阴性的猪血清,进行中和试验,分析血清中的疫苗抗体对Bartha-K61株和临床分离到的PRV GD1406... 为了解近年来广东省伪狂犬病病毒(PRV)变异情况,本研究从猪场收集Bartha-K61活疫苗免疫后的猪血清559份,经ELISA筛选出326份gB抗体阳性且gE抗体阴性的猪血清,进行中和试验,分析血清中的疫苗抗体对Bartha-K61株和临床分离到的PRV GD1406野毒株的中和能力。进一步应用小鼠进行交叉免疫保护性试验。结果显示,187份gB阳性且gE阴性的猪血清样品对Bartha-K61株和PRV GD1406野毒株的平均中和抗体滴度分别为1:57和1:13,并且免疫Bartha-K61株使小鼠免受PRV GD1406野毒株致死性攻击的保护率仅为20%,而免疫PRV GD1406野毒株使小鼠免受Bartha-K61株致死性攻击的保护率为100%,免疫灭活PRV GD1406野毒株使小鼠免受PRV GD1406野毒株致死性攻击的保护率为40%。根据试验结果推测,PRV GD1406野毒株与Batha-K61株之间存在抗原差异性,现用疫苗不能有效抵抗PRV变异株攻击。本研究结果将为PRV的防控提供实验依据,为研制PRV新疫苗提供新的思路。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒变异株 ELISA 中和试验

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伪狂犬病病毒FS-2015株gE和gB基因序列分析 被引量：5

3

作者 庞旋飞 练斯南 +4 位作者 伍建敏 万曾培 王征帆 李中圣 白挨泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3524-3534,共11页

为了解猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus,PRV)gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用"蚀斑法"对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对... 为了解猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus,PRV)gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用"蚀斑法"对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,PRV FS-2015株的gB、gE基因与国内外PRV参考毒株的核苷酸同源性分别为97.0%～100.0%和97.5%～99.7%,氨基酸同源性分别为96.4%～100.0%和95.3%～99.7%。氨基酸变异位点分析表明,FS-2015株的gB和gE基因均有位点突变和缺失。遗传进化分析表明,FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ01、HB1201、HN1201、JS2012、BJ-YT和BP属于同一分支,同源性较高,亲缘关系较近;与PRV经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha和Yangsan株属于不同分支,同源性较低,亲缘关系较远。从PRV FS-2015毒株与国内外经典毒株和当前国内流行的变异毒株的分析结果可知,PRV FS-2015毒株发生了一定的变异,属于当前国内流行变异毒株。本研究结果为广东省伪狂犬病分子流行病学调查、伪狂犬病的防控和疫苗株挑选工作提供参考数据。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒(PRV) FS-2015株 GB基因 GE基因 序列分析

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PEDV和TGEV双重TaqMan荧光定量一步法RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：13

4

作者 侯月娥 伍建敏 李中圣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第1期19-25,共7页

本文通过对猪腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)基因组生物信息学分析,分别在两种病毒基因保守区设计特异性探针和Real-Time PCR引物,并建立了检测PEDV和... 本文通过对猪腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)基因组生物信息学分析,分别在两种病毒基因保守区设计特异性探针和Real-Time PCR引物,并建立了检测PEDV和TGEV的双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,本研究建立的方法对其他常见病毒无交叉检出,具有较强的特异性;应用本方法对PEDV和TGEV检测灵敏度均可达101个拷贝。应用本法组装PEDV和TGEV双重实时荧光定量PCR试剂盒,该试剂盒批次内、批次间的变异系数CV(coefficient of variation,CV)分别低于0.58%和3.7%。应用该试剂盒对97份病例进行检测,阳性率提高了14.93%。本研究建立的一步法荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异性好、灵敏度高、定量且重复性和稳定性好等优点,在PEDV和TGEV感染的快速鉴别诊断,以及流行病学调查方面都有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 双重TaqMan实时荧光定量RT-PCR

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全预混冻干PCR试剂检测草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的研究 被引量：7

5

作者 侯月娥 伍建敏 +4 位作者 王凤求 赵玉林 张杰 王贵平 李中圣 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期80-85,共6页

草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一,目前在我国广泛流行。本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列,设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧... 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型是导致草鱼出血病的主要病原体之一,目前在我国广泛流行。本研究根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型基因序列,设计了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。试验对反转录和PCR反应体系进行摸索,通过优化的冻干工艺制备出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型全预混RT-PCR试剂,在荧光定量PCR中,冻干试剂的检测灵敏度可达10个模板,是普通PCR的100倍。批次间变异系数小于4%。特异性试验结果表明,该方法可特异性地检出草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型,而对鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死症病毒无检测信号。该冻干试剂4℃保存12个月,室温25℃保存3个月,37℃保存15d,敏感性仍为10个,与第1d相同;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42min内完成核酸诊断。本试验基于荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的全预混草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型RT-PCR试剂具有耐保存便于运输、准确性高、仪器拓展性好的特点,对草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型快速诊断有重要意义。 展开更多

关键词 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型 冻干试剂 TaqMan荧光定量RT-PCR

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猪PRRSV和PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：7

6

作者 侯月娥 伍建敏 +1 位作者 何永龙 李中圣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期221-225,共5页

为快速及定量的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2),本研究根据GenBank中登录的PRRSV和PCV2基因组确定了其基因保守序列,分别设计其特异性探针和引物,建立了PRRSV-PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性试... 为快速及定量的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2),本研究根据GenBank中登录的PRRSV和PCV2基因组确定了其基因保守序列,分别设计其特异性探针和引物,建立了PRRSV-PCV2双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。特异性试验显示该方法对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒及猪瘟病毒的检测结果均为阴性。对PRRSV和PCV2的检测灵敏度均达10拷贝/μl。重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于4%。应用该方法对60份已知临床病料进行检测,结果检出PRRSV和PCV2阳性感染率分别为30.67%和35%,混合感染率为11.67%,与已知结果的符合率为100%。该方法具有敏感、快速、特异、定量、重复性、稳定性好等优点,在用于PRRSV和PCV2感染的快速鉴别诊断的同时,在细胞培养特性以及疫苗生产检测中也具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒II型 双重Man荧光定量PCR

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广东一株猪伪狂犬病毒野毒的分离鉴定和致病性初步研究 被引量：7

7

作者 王凤求 何永龙 +3 位作者 侯月娥 伍建敏 李中圣 王贵平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第1期144-147,254,共5页

为了证实广东阳江某猪场存在猪伪狂犬病毒(PRV)强毒力野毒感染,试验采用病毒分离鉴定及仔猪攻毒试验的方法,对该猪场保育猪群病料中存在的病毒进行分离鉴定,以及用15日龄含有母源抗体(中和效价水平为1∶16)的仔猪进行毒株致病性的初步... 为了证实广东阳江某猪场存在猪伪狂犬病毒(PRV)强毒力野毒感染,试验采用病毒分离鉴定及仔猪攻毒试验的方法,对该猪场保育猪群病料中存在的病毒进行分离鉴定,以及用15日龄含有母源抗体(中和效价水平为1∶16)的仔猪进行毒株致病性的初步研究。结果表明:从病料中成功分离出1株PRV野毒株GD-1406株;经滴鼻攻毒,试验Ⅰ组(病毒攻毒效价为1×106TCID50/m L)仔猪攻毒后第5天全部死亡,试验Ⅱ组(病毒攻毒效价为1×104TCID50/m L)仔猪攻毒后第4天死亡率达80%,第6天全部死亡;病理剖检显示,分离的PRV对试验组仔猪的多种组织器官造成肉眼可见的损伤,对照组正常。说明该猪场保育猪群中有PRV野毒强毒株存在。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒(PRV) 野毒株 分离 鉴定 致病性

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猪伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其冻干检测试剂的制备 被引量：7

8

作者 侯月娥 叶平 +4 位作者 伍建敏 王凤求 赵玉林 王贵平 李中圣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期19-24,共6页

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基... 猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染,而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号;对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,室温25℃保存3个月或37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42 min时间内完成核酸诊断。本研究基于TaqMan荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存,便于运输,准确性高等特性,对快速诊断PRV和病毒定量检测具有重要意义。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 冻干检测试剂 TaqMan荧光定量PCR

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猪圆环病毒2型Cap蛋白毕赤酵母分泌表达及发酵条件优化 被引量：2

9

作者 李中圣 伍建敏 +3 位作者 王凤求 侯月娥 张杰 王贵平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期697-700,706,共5页

为实现猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白在酵母中的高效表达,本研究将去除信号肽并经序列优化后的PCV2 ORF2片段插入pPICZαA表达载体,将重组表达质粒克隆转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X33感受态细胞中,应用Zeocin抗性和PCR法对转化... 为实现猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白在酵母中的高效表达,本研究将去除信号肽并经序列优化后的PCV2 ORF2片段插入pPICZαA表达载体,将重组表达质粒克隆转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)X33感受态细胞中,应用Zeocin抗性和PCR法对转化子进行初步筛选和表型鉴定,利用"双膜法"筛选出PCV2 Cap表达量相对较高的酵母。采用正交试验对优选的酵母进行发酵试验,分析培养基pH、甲醇诱导时间、甲醇诱导浓度和诱导时酵母浓度对PCV2重组Cap蛋白(rCap)分泌表达的影响。结果显示酵母分泌表达PCV2 rCap的优化条件为:培养基pH为5.0,发酵液OD600nm至1.0,加入终浓度1.0%甲醇诱导96 h。优化后的PCV2 rCap分泌量可达207.58μg/m L。中和试验结果显示,发酵产物PCV2 rCap免疫小鼠产生的抗体可有效中和PCV2。本研究为利用酵母表达PCV2 Cap进行疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 PCV2 毕赤酵母 表达 发酵

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猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用

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作者 何嘉敏 庞旋飞 +6 位作者 罗律 杨佳臻 张宝真 伍建敏 刘文娜 李中圣 白挨泉 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期2316-2323,共8页

为研制一种可以应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)核酸检测的阳性质控品,本研究使用MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)技术制备PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品。将扩增的PRRSV-1和PRRSV-2 M基因进行纯化回收... 为研制一种可以应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)核酸检测的阳性质控品,本研究使用MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)技术制备PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品。将扩增的PRRSV-1和PRRSV-2 M基因进行纯化回收,连接到内含MS2成熟酶蛋白基因与衣壳蛋白的pET28b载体,通过转化至BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达,利用PEG6000沉淀法纯化,制备出内含PRRSV M基因装甲RNA病毒样颗粒(AR-PRRSV)。后续进行性能评估,作为PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品,AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M使用YY/T 1652-2019标准进行计算,数据表明均匀性良好,-20、4、25℃能稳定保存60 d,37℃能稳定保存30 d。使用RT-qPCR进行初步定量后,利用数字定量PCR(ddPCR)对制备的装甲病毒样颗粒AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M进行定值,结果10^(4)拷贝/μL的AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M ddPCR定值均为(1.33±0.50)×10^(4)拷贝/μL。本研究结果表明,应用定值后的AR-PRRSVM,能够实现对检测全过程(核酸提取、反转录和RT-qPCR)的质量控制。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 装甲RNA 核酸检测 质控品

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1株变异伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE和TK基因序列分析 被引量：3

11

作者 万曾培 庞旋飞 +4 位作者 王征帆 伍建敏 李中圣 王贵平 白挨泉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期695-701,共7页

为了探索伪狂犬病病毒(PRV)流行株的基因变异及遗传演变规律,本试验对福建福州疑似发生猪伪狂犬病的猪场病料,首先选用PCR技术、小鼠接种试验、细胞接种试验及间接免疫荧光鉴定等方法分离鉴定病原,再对病原进行毒价测定、TK和gE基因克... 为了探索伪狂犬病病毒(PRV)流行株的基因变异及遗传演变规律,本试验对福建福州疑似发生猪伪狂犬病的猪场病料,首先选用PCR技术、小鼠接种试验、细胞接种试验及间接免疫荧光鉴定等方法分离鉴定病原,再对病原进行毒价测定、TK和gE基因克隆及序列比对分析。结果显示,病原为PRV野毒,命名为PRV-FJFZ株;PRV-FJFZ株TCID50为10-7.2/0.1 mL,LD50为10-3.56/0.1 mL,对比分析PRV-FJFZ与国外PRV参考毒株的TK和gE基因序列同源性发现,核苷酸的同源性分别为99.5%~100.0%和99.8%~99.9%。TK和gE基因遗传进化树表明,PRV-FJFZ株与当前国内流行的变异PRV毒株在同一分支上,PRV-FJFZ株与国外PRV参考毒株在不同的分支上。本研究结果可为我国PRV的防控净化工作和疫苗株的筛选提供理论依据。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 分离鉴定 序列分析 GE基因 TK基因 遗传变异

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