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猫杯状病毒VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立
1
作者 姬晶晶 王彬 +3 位作者 何昭群 李嘉豪 单衍可 刘斐 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第3期87-94,共8页
旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证... 旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件,在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白,对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性,通过SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白;以重组VP1蛋白为包被抗原建立检测FCV抗体的间接ELISA方法,通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,优化抗原包被条件、样品孵育时间、封闭液种类等条件,并对其性能进行验证。结果:表达的目的蛋白条带清晰、大小正确,与FCV阳性血清具有良好的反应性,建立的间接ELISA方法检测6份FCV阴性血清,猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)阳性血清,猫疱疹病毒(feline herpesvirus, FHV)阳性血清均为阴性,对FCV阳性血清的最低检出效价可达1∶10 240,组间与组内变异系数均小于10%,与商品化试剂盒相比符合率达100%。综上,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、重复性和符合率,与其他猫常见病毒阳性血清不发生交叉反应,可以用于临床样品的检测,为FCV感染的诊断、防控、疫苗免疫效力评价提供了技术手段。 展开更多
关键词 猫杯状病毒VP1蛋白 原核表达 间接ELISA
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基于量子点微球和RPA技术的ASFV抗体-核酸快速现场联检方法的建立
2
作者 赵伊然 单衍可 +7 位作者 李嘉豪 何昭群 王欣艺 温墩 王米拉 储蕊 赵东明 刘斐 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期4990-5002,共13页
【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为世界动物卫生组织(world organization for animal health,WOAH)规定必须通报的疫病之一,同时也是我国一类动物疫病,因缺乏有效疫苗和治疗方法,早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至... 【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为世界动物卫生组织(world organization for animal health,WOAH)规定必须通报的疫病之一,同时也是我国一类动物疫病,因缺乏有效疫苗和治疗方法,早期、有效、快速和敏感的检测对防控ASF至关重要。目前,非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)常用临床检测方法主要包括荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)、酶联免疫吸附测定试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)等,但这些技术均需要复杂的操作、昂贵的仪器以及较长的检测时间,不适用于现场快速检测。此外,ASFV感染后宿主体内的抗体和核酸含量在不同时间段有明显的差异,因此单独检测ASFV核酸或抗体可能会导致假阴性的存在。【目的】通过研发一种基于量子点微球和重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的ASFV抗体-核酸联检试纸条,实现ASFV抗体和核酸的现场同时检测,以提高检测的灵敏度、特异性,降低检测成本,节约检测时间。【方法】通过结合量子点荧光免疫层析技术及RPA技术建立了同时检测ASFV抗体及核酸的侧向流层析试纸条,配套便携式荧光分析仪可实现ASFV抗体-核酸的快速现场联检。本研究优化了量子点偶联蛋白量及检测线包被浓度等条件。在此基础上,确定了该检测方法的cutoff值、敏感性、特异性及重复性,并将所建立的ASFV联检试纸条与市售ELISA试剂盒、qPCR检测试剂盒对临床样品进行检测,比较检测结果,验证该方法的符合率,评价该试纸条的实用性。【结果】联检试纸条使用方便、快速,整个检测过程可在30 min内完成。且与其他6种常见猪传染性病毒之间不存在交叉反应,特异性良好。核酸检测灵敏度可达10 copies/μL,抗体检测灵敏度可达1:3 200。抗体和核酸检测批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,重复性良好。经市售ELISA试剂盒、qPCR试剂盒分别验证,符合率均为100%。除此之外,在临床样品检测中发现,有2份抗体检测阳性的样品其对应的猪只核酸检测为阴性,且这2头猪无明显临床症状,该结果进一步证明了通过抗体和核酸联检能够提高检测的准确性,减少假阴性的存在。【结论】核酸-抗体联检单次试验成本与病原核酸抗体分别检测总成本相比有所降低,节约了检测成本和时间,对于ASF急性发作、慢性感染检测均敏感,避免了仅检测单个核酸或单个抗体的局限性。此方法对操作环境要求低,使用的荧光分析仪便于携带,易于操作,整个操作过程无需过多昂贵的实验仪器和专业技术人员,降低了对检测设备的精密要求,适用在偏远地区以及基层中开展ASFV检测工作。因此,该方法有望成为未来猪场ASFV即时检测的可靠方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 核酸检测 抗体检测 侧向流免疫试纸条
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融安县超级稻“3416”肥料效应试验研究
3
作者 何昭群 吴莉莉 +1 位作者 彭恩明 钟腾宽 《现代农业科技》 2014年第11期12-13,共2页
利用超级稻氮、磷、钾"3416"回归设计田间试验的结果,获得肥料效应函数方程及有关施肥参数。分别建立以产量为目标函数的氮、磷、钾的三元二次、氮磷、氮钾、磷钾的二元二次、氮、磷、钾的一元二次和的一元线性加平台4类10种... 利用超级稻氮、磷、钾"3416"回归设计田间试验的结果,获得肥料效应函数方程及有关施肥参数。分别建立以产量为目标函数的氮、磷、钾的三元二次、氮磷、氮钾、磷钾的二元二次、氮、磷、钾的一元二次和的一元线性加平台4类10种肥效模型,其中三元二次、氮钾的二元二次、氮的一元二次和氮的一元线性平台模型可作为推荐施肥参考模型。取这3种模型最佳经济施肥量的平均值作为当地推荐施肥量,即施氮(纯N)218.38 kg/hm2、磷(P2O5)76.80 kg/hm2、钾(K2O)182.60 kg/hm2。 展开更多
关键词 超级稻 “3416” 肥效模型 推荐施肥量 广西融安
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融安县早稻“3414”肥料效应研究 被引量：1
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作者 张薇薇 钟腾宽 +1 位作者 何昭群 韦庆先 《现代农业科技》 2012年第13期18-19,共2页
采用"3414"二次回归方案设计早稻田间试验,建立产量为目标函数的氮、磷、钾肥效的三元二次、二元二次和一元二次回归模型。结果表明,根据5种模型提供的施肥参数及产量期望进行分析比较,选出融安县旱稻的最优施肥方案:纯氮159.... 采用"3414"二次回归方案设计早稻田间试验,建立产量为目标函数的氮、磷、钾肥效的三元二次、二元二次和一元二次回归模型。结果表明,根据5种模型提供的施肥参数及产量期望进行分析比较,选出融安县旱稻的最优施肥方案:纯氮159.0 kg/hm2、五氧化二磷61.4 kg/hm2、氧化钾112.4 kg/hm2。 展开更多
关键词 早稻 “3414”试验 肥料效应 最优施肥方案 广西融安
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水稻测土配方施肥试验研究 被引量：1
5
作者 钟腾宽 何昭群 彭恩明 《现代农业科技》 2014年第10期20-20,24,共2页
在融安县沙子乡进行水稻主推配方试验,结果表明:三系杂交稻配方施肥区比常规施肥区增产8.13%,增收500元/hm2;超级稻配方施肥区比常规施肥区增产11.03%,纯收入增加2 113元/hm2。
关键词 水稻 测土配方施肥 校验
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