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云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施 被引量：20
1
作者 杨仕标 信爱国 +4 位作者 赵文华 王金萍 李富祥 胡骑 苗海生 《中国奶牛》 2011年第24期42-44,共3页
本文报告了云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果,并在此基础上提出了相应的防控措施。2011年度,云南省现代农业(奶牛)产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和养... 本文报告了云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果,并在此基础上提出了相应的防控措施。2011年度,云南省现代农业(奶牛)产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。应用口蹄疫A型、亚洲Ⅰ型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法,检出口蹄疫O型抗体阳性数253份,阳性率81.35%;亚洲Ⅰ型抗体阳性数278份,阳性率89.39%;A型抗体阳性数110份,阳性率35.37%。应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检出抗体阳性样品7份,阳性率2.25%。应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检出布氏杆菌抗体阳性样品2份,阳性率0.64%。针对本次获得的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果,提出了相应的防控措施,强化奶牛和奶水牛犊牛免疫、跟踪监测和完善生物安全措施。 展开更多
关键词 奶(水)牛 监测 口蹄疫 布氏杆菌 防控措施
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云南鸡源大肠杆菌特性及血清型分布研究 被引量：2
2
作者 杨仕标 许琳 +2 位作者 姚艳 常志顺 王云良 《云南畜牧兽医》 1996年第1期5-7,共3页
对从疑似大肠杆菌病鸡体分离的３５株菌，进行生化、抗药性、毒性和血清型分布研究结果，为大肠杆菌Ｏ抗原Ｏ＿（２４）、Ｏ＿（７８）的３１株，未定４株。
关键词 鸡病 大肠杆菌病 血清型分布
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小反刍兽疫血清学监测研究 被引量：1
3
作者 杨仕标 赵文华 蒋梅 《中国动物保健》 2008年第11期63-65,共3页
本文报告对我国西藏自治区阿里发生小反刍兽疫情血清学监测研究结果,从小反刍兽疫确诊病例采集羊血清24份、接触牦牛血清9份和疑似病例羊血清25份,经应用国际标准化c-ELISA方法检测,小反刍兽疫感染羊血清学阳性率达阳性率91.67%,接触牦... 本文报告对我国西藏自治区阿里发生小反刍兽疫情血清学监测研究结果,从小反刍兽疫确诊病例采集羊血清24份、接触牦牛血清9份和疑似病例羊血清25份,经应用国际标准化c-ELISA方法检测,小反刍兽疫感染羊血清学阳性率达阳性率91.67%,接触牦牛血清学阳性率11.11%,表明本病群感染的倾向性以及接触牦牛可能呈隐性感染。流行病学调查表明,本次疫情系输入性的,通过寄养、共享草地和水源、活畜作为礼品赠送、或者活畜非法贸易等方式传入。国内受威胁地区需要加强监测,实施有效的防疫措施,防范本病的再次入侵。 展开更多
关键词 血清学监测 小反刍兽疫 ELISA方法 隐性感染 疑似病例 西藏自治区 国际标准化 羊血清
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猪细小病毒生物学特性研究 被引量：2
4
作者 杨仕标 《云南畜牧兽医》 1995年第2期2-3,共2页
应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０￣（－７．９）／ｍｌ和１０￣（－６．８）／ｍｌ，经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密... 应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０￣（－７．９）／ｍｌ和１０￣（－６．８）／ｍｌ，经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ￣３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量分别为８．３ＫＤａ和６５～６８ＫＤａ，中和试验表明，两株病毒结构蛋白均具中和抗原性。琼脂凝胶电泳分析显示，感染的ＰＫ－１５细胞内含大小为５０００～５５００ｂＰ（碱基对）的病毒原性ＤＮＡ，在特定条件下能感染ＰＫ－１５细胞。 展开更多
关键词 猪病 细小病毒病 生物学特性
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进口禽大肠杆菌灭活苗免疫效力和安全性研究
5
作者 杨仕标 廖启顺 +2 位作者 常志顺 覃袖伟 唐桂运 《云南畜牧兽医》 2002年第3期5-5,共1页
对梅里亚动物保健公司生产提供的二种禽大肠杆菌灭活疫苗的免疫效力和安全性进行了试验研究。将二种禽大肠杆菌灭活疫苗各2倍剂量,经肌肉注射免疫12日龄雏鸡,试验鸡表现正常,局部疫苗吸收良好。在试验条件下,免疫鸡经5个分离株(O2、O83... 对梅里亚动物保健公司生产提供的二种禽大肠杆菌灭活疫苗的免疫效力和安全性进行了试验研究。将二种禽大肠杆菌灭活疫苗各2倍剂量,经肌肉注射免疫12日龄雏鸡,试验鸡表现正常,局部疫苗吸收良好。在试验条件下,免疫鸡经5个分离株(O2、O83、O138、O78、O1)及其混合物攻击,二种疫苗的平均免疫保护率分别为76.85%和75.74%,而相同条件的非免疫对照组的平均免疫保护率为22.22%。 展开更多
关键词 禽 大肠杆菌 灭活苗 免疫效力 安全性 进口贸易
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HVT-IBDS_(706)双价冻干苗效力试验
6
作者 杨仕标 姚艳 +1 位作者 王云良 覃袖伟 《云南畜牧兽医》 1999年第1期6-6,12,共2页
为了解引进的法国某公司生产的ＨＶＴ－ＩＢＤＳ７０６（马立克氏病火鸡疱疹病毒与传染性法氏囊病）双价冻干苗（以下简称双价苗），对抵抗中国云南强毒ＭＤＶＪ－１株（马立克氏病）和ＩＢＤＶＡＮ株（传染性法氏囊病毒云南株）的免疫... 为了解引进的法国某公司生产的ＨＶＴ－ＩＢＤＳ７０６（马立克氏病火鸡疱疹病毒与传染性法氏囊病）双价冻干苗（以下简称双价苗），对抵抗中国云南强毒ＭＤＶＪ－１株（马立克氏病）和ＩＢＤＶＡＮ株（传染性法氏囊病毒云南株）的免疫效力，特作该双价苗同ＨＶＴ（马立克... 展开更多
关键词 HVT-IBDS106 火鸡 疱疹病毒 双价苗
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云南鸡源大肠杆菌免疫试验
7
作者 杨仕标 常志顺 +2 位作者 王云良 张刚 王锐丽 《云南畜牧兽医》 1996年第4期15-15,共1页
云南鸡源大肠杆菌免疫试验云南省畜牧兽医科学研究所杨仕标，常志顺，王云良，张刚，王锐丽用已鉴定过的４株鸡源大肠杆菌制成０．４％甲醛灭活油佐剂疫苗（含苗量为２．５亿／０．５ｍｌ），分别免疫１０日龄雏鸡，测定免疫保护率、免... 云南鸡源大肠杆菌免疫试验云南省畜牧兽医科学研究所杨仕标，常志顺，王云良，张刚，王锐丽用已鉴定过的４株鸡源大肠杆菌制成０．４％甲醛灭活油佐剂疫苗（含苗量为２．５亿／０．５ｍｌ），分别免疫１０日龄雏鸡，测定免疫保护率、免疫力产生时间、产生免疫应答的最小日... 展开更多
关键词 鸡病 大肠杆菌病 疫苗 免疫试验
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禽传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研究
8
作者 杨仕标 常志顺 +2 位作者 许琳 王云良 王锐丽 《云南畜牧兽医》 1998年第3期7-7,共1页
禽传染性支气管炎云南分离株，经鸡胚增殖、密度梯度离心提纯后，制成佐剂抗原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用ＥＬＩＳＡ监测小鼠对ＩＢＶ的抗体应答能力，在ＰＥＧ－６０００（聚乙二醇）的作用下，小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。对分泌... 禽传染性支气管炎云南分离株，经鸡胚增殖、密度梯度离心提纯后，制成佐剂抗原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用ＥＬＩＳＡ监测小鼠对ＩＢＶ的抗体应答能力，在ＰＥＧ－６０００（聚乙二醇）的作用下，小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。对分泌抗体阳性较强的杂交瘤细胞，应用有限稀释法克隆３次以上，获得９株抗ＩＢＶ阳性杂交瘤细胞，其中７株能稳定分泌抗ＩＢＶ单克隆抗体。初步应用研究表明，该７株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体，不但能区分ＩＢＶ和其它禽源病毒，而且能鉴别ＩＢＶＴ株、Ｗ９３株、Ｈ１２０株等传染性支气管炎各型毒株。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 病毒 单克隆抗体
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鸡新城疫新威灵(AVINEW)疫苗田间免疫试验
9
作者 杨仕标 常志顺 +4 位作者 王云良 宋健领 从佩清 唐桂云 李海燕 《云南畜牧兽医》 1999年第4期11-12,共2页
关键词 鸡新城疫病 新威灵疫苗 田间免疫试验
全文增补中
副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析 被引量：11
10
作者 李富祥 李华春 +5 位作者 宋建领 杨仕标 朱建波 廖德芳 姚俊 高华峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期68-72,共5页
从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟... 从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%～99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 16S RRNA 序列分析
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小反刍兽疫病毒的N、M、F及H基因的序列测定和分析 被引量：8
11
作者 赵文华 杨仕标 +4 位作者 蒋梅 朱建波 李华春 肖雷 张念祖 《动物医学进展》 CSCD 2007年第11期8-11,共4页
小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF... 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 N M F及H基因 逆转录-聚合酶链反应 同源性 疫苗株
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一株尿素酶阴性产气巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性分析 被引量：5
12
作者 李富祥 李华春 +3 位作者 杨仕标 宋建领 朱建波 廖德芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期240-243,共4页
本研究从猪流产胎儿中分离到一株形似产气巴氏杆菌菌株并命名为ZY14013,对其进行生化鉴定、16S rDNA序列分析和药物敏感性分析。生化鉴定结果表明,ZY14013除尿素酶阴性外,其它生化特征与产气巴氏杆菌模式菌株ATCC 27883以及其它分离株... 本研究从猪流产胎儿中分离到一株形似产气巴氏杆菌菌株并命名为ZY14013,对其进行生化鉴定、16S rDNA序列分析和药物敏感性分析。生化鉴定结果表明,ZY14013除尿素酶阴性外,其它生化特征与产气巴氏杆菌模式菌株ATCC 27883以及其它分离株具有相似生化特征。遗传进化分析表明ZY14013与ATCC 2788以及16株现存分离株16S rDNA核苷酸同源性分别为99.2%和99.6%~99.9%,在进化树中形成同一个群。药敏试验表明,分离株ZY14013对青霉素、氟苯尼考和头孢类抗生素敏感,对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、氯霉素和氧氟沙星耐药。本研究首次证实了猪产气巴氏杆菌感染在中国大陆的存在,同时,本研究在世界首次分离到尿素酶阴性产气巴氏杆菌,丰富了产气巴氏杆菌的生化特征,为研究尿素酶在产气巴氏杆菌致病性中的作用提供了自然突变体。 展开更多
关键词 产气巴氏杆菌 尿素酶阴性 分离 16S RDNA 生化特征
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副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及16SrRNA序列分析 被引量：12
13
作者 李富祥 李华春 +3 位作者 许琳 覃袖伟 杨仕标 朱建波 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第4期32-38,共7页
从云南省和四川省规模化养鸡场鸡传染性鼻炎疑似病例鸡鼻窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,并对其进行生化鉴定、PCR鉴定和16SrRNA序列比对鉴定。16SrRNA分析表明两分离株与GenBank中的其他副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum,HPg）... 从云南省和四川省规模化养鸡场鸡传染性鼻炎疑似病例鸡鼻窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,并对其进行生化鉴定、PCR鉴定和16SrRNA序列比对鉴定。16SrRNA分析表明两分离株与GenBank中的其他副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum,HPg）参考株核苷酸同源性为94.2%~99.2%。两分离菌株鉴定为副鸡嗜血杆菌,分别命名为YNAN20120110和SCPZH20120120株。16SrRNA遗传进化关系表明：分离株与NAD非依赖型副鸡嗜血杆菌血清A型代表株GU951543（HP105strain）的16SrRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性为99.2%;与副鸡嗜血杆菌血清A型参考株AY498867（0083株）核苷酸同源性为96.9%。致病性实验表明分离菌株对成年产蛋鸡有强致病性。抗生素药物敏感试验表明：分离菌株对头孢吡肟、头孢噻吩、氯霉素、卡那霉素和氧氟沙星高敏,对四环素中敏,对磺胺甲唑耐药。 展开更多
关键词 副鸡嗜血杆菌 分离 鉴定 16SrRNA 序列分析
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小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14
14
作者 赵文华 杨仕标 +1 位作者 高华峰 王金萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期65-71,共7页
为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测... 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示,所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV,产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPVITR的pMD18-T载体质粒为标准品,构建了二联标准曲线,N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达102和103拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 山羊痘病毒 二联实时荧光定量RT—PCR 探针
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曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)的分离鉴定及基因组序列分析 被引量：5
15
作者 李富祥 喻永福 +4 位作者 杨金丽 朱沛 杨仕标 宋建领 高华峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期698-703,共6页
为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传... 为了对云南3起奶牛和山羊呼吸道疾病进行病原检测,本研究在5%CO_(2)的培养条件下从呼吸道疾病奶牛和山羊的肺脏中分离到3株革兰阴性嗜二氧化碳小杆菌YN21118、YN22011和ZY171111,对3株分离株进行16S r DNA基因的PCR扩增及同源性和遗传进化分析,结果显示3株分离株与曼氏杆菌(Mannheimia pernigra)模式菌株CCUG 74657T及其它M.pernigra分离株的16S r DNA基因序列的同源性达99.6%以上,且3株分离株与M.pernigra参考株形成同一个进化分支,表明3株分离株均为M.pernigra。采用琼脂扩散法检测3株分离株对10类32种抗菌药物的敏感性,结果显示3株分离株对青霉素类的阿莫西林克拉维酸、头孢菌素类的头孢噻吩、喹诺酮类的氧氟沙星等29种抗菌药物敏感。将3株分离株感染小鼠进行致病性试验,结果显示3株分离株均能引起小鼠呼吸道疾病。采用Illumina Miseq和PacBio高通量测序平台对分离株ZY171111进行全基因组高通量测序并预测其毒力基因和耐药基因,基因组序列分析结果显示,分离株ZY171111基因组全长2 197 384 bp,G+C摩尔含量为39.1%,基因组携带1 978个蛋白编码基因,其中包括溶血素基因hlyB、黏附相关基因htpB、生存胁迫相关基因clpP和katA等32个毒力基因和磺胺类耐药基因folP、氨基糖苷类耐药基因StrA、喹诺酮类耐药基因gyr A和parC、甲氧苄啶耐药基因dfr A3等39个耐药相关基因。本研究在我国首次分离到M.pernigra,证实我国存在奶牛和山羊M.pernigra感染,并于国内外首次报道M.pernigra的耐药性、耐药基因及其对小鼠的致病性,上述结果为深入研究M.pernigra的致病性和耐药性提供菌种资源和基因组数据。 展开更多
关键词 曼氏杆菌 奶牛 山羊 分离 致病性
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文化和管理因素对动物传染病发现、识别和监测的影响——英国、中国和非洲撒哈拉次区域的比较评估
16
作者 杨仕标 李雪霞 《中国动物保健》 2008年第5期15-18,共4页
动物卫生对社会的一个重要影响是人类健康,这种影响已远超过传统的人兽共患病如狂犬病、炭疽和布氏杆菌病的范畴。据估算,约75%人类新生疫病是动物源性的,这种人类和动物新生疫病所造成的危险需要人类健康和动物健康机构更有效地联合起... 动物卫生对社会的一个重要影响是人类健康,这种影响已远超过传统的人兽共患病如狂犬病、炭疽和布氏杆菌病的范畴。据估算,约75%人类新生疫病是动物源性的,这种人类和动物新生疫病所造成的危险需要人类健康和动物健康机构更有效地联合起来,建立合作研究、跨学科中心、联合监测体系、以及应激体系等发展战略。英国政府展望项目—传染病的预防与控制:防患于未然,其目的是评估在未来的10年～25年内,疫病威胁将如何发展,科学将如何帮助我们应对这种威胁,以及疫病发现、识别和监测系统的作用。"文化和管理因素对动物传染病发现、识别和监测的影响"作为总项目的一个重要组成部分,对从宏观上认识动物疫病发生的根源、传播模式的改变、国际大流行的形成,以及疫病控制和根除将具有一定的指导作用。本文作者为原文作者之一,参与了多项国际合作项目的研究,在与各级兽医管理人员和同行专家交流过程中,意识到本项目研究的意义,对原文作了编译,以供我国广大兽医管理人员和研究工作者参考。 展开更多
关键词 动物传染病 监测体系 管理因素 英国政府 识别 文化 评估 次区域
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非洲马瘟病毒可视化RT-LAMP现场检测方法的建立 被引量：7
17
作者 李富祥 赵文华 杨仕标 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期579-583,共5页
为建立非洲马瘟病毒(AHSV)可视化RT-LAMP检测方法,本研究根据AHSV外衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化建立了AHSV可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h;利用该... 为建立非洲马瘟病毒(AHSV)可视化RT-LAMP检测方法,本研究根据AHSV外衣壳蛋白(VP7)基因保守序列设计2对特异性引物,通过反应条件优化建立了AHSV可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,本实验所建立RT-LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h;利用该方法检测进口灭活冻干疫苗中的9个血清型AHSV以及马流感病毒、马传贫病毒、马动脉炎病毒和蓝舌病病毒的RNA,结果显示所有血清型AHSV RNA检测均为阳性,其它病毒RNA检测为阴性,该方法特异性较强;该方法最低可检测到3.2×10-9 ng/μL的RNA,敏感性是普通RT-PCR方法的1000倍。利用建立的RT-LAMP方法和普通RT-PCR方法对35份马血和5份驴血样品同时进行检测,结果显示二者阳性和阴性符合率均为100%。本研究在国内外首次建立了AHSV 9种血清型的可视化RT-LAMP检测方法,其具有特异性强、敏感性高、快速和高通量检测的优点,为非洲马瘟(AHS)快速的可视化现场诊断提供可行方法。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 反转录环介等温扩增 可视化现场检测
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山羊痘和小反刍兽疫病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：6
18
作者 赵文华 杨仕标 高华峰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期9-14,共6页
为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针;探针分别用5′-FAM-TAMRA-3′及5′-JOE-Eclipse-3′标记物进行标记以实现同步检测。结果显示,所建... 为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针;探针分别用5′-FAM-TAMRA-3′及5′-JOE-Eclipse-3′标记物进行标记以实现同步检测。结果显示,所建立的ITR-M二联探针荧光定量RT-PCR方法可同时特异性检测GTPV和PPRV产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒、犬瘟热病毒等相关病毒无荧光信号可检出。以GTPV-ITR和PPRV-M的pMD-18T载体质粒为标准品,构建了双重标准曲线,ITR-M探针的检测敏感度可分别达103拷贝/μL及101.2拷贝/μL cDNA。本研究初步建立了可同步快速检测GTPV和PPRV的二联实时荧光定量RT-PCR法。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 小反刍兽疫病毒 实时荧光定量RT-PCR 探针
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非洲马瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：4
19
作者 赵文华 杨仕标 李富祥 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期11-16,共6页
非洲马瘟病毒(AHSV)为双股RNA病毒,能感染所有马科动物。为建立一种AHSV快速检测方法,根据GenBank及作者所测AHSV 9个血清型VP7-ORF全长核苷酸序列,设计一对位于AHSV基因组S7片段的特异引物,然后进行荧光定量检测。经试验,证实该对引物... 非洲马瘟病毒(AHSV)为双股RNA病毒,能感染所有马科动物。为建立一种AHSV快速检测方法,根据GenBank及作者所测AHSV 9个血清型VP7-ORF全长核苷酸序列,设计一对位于AHSV基因组S7片段的特异引物,然后进行荧光定量检测。经试验,证实该对引物对9种血清型的AHSV RNA均有特异性扩增,能检出特异荧光信号,而对与AHSV同属的蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血症病毒(EHDV)及正常马淋巴组织和阴性对照均无扩增,无有效荧光信号可检出。以国家外来动物疫病诊断实验室已构建好的AHSV 9型pMD18-T-VP7质粒为标准品可建立良好的标准曲线,实现对检测样本的实时定量。本研究建立了模板预变性结合"三步"法敏感特异的AHSV实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,检测灵敏度可达102拷贝/μL。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 血清型 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量RT-PCR
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牛源副猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析 被引量：4
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作者 李富祥 赵文华 杨仕标 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期558-562,571,共6页
为了对两起牛呼吸道疾病病原进行细菌学诊断,本研究分别从出血性肺炎病死牛的肺脏和流涎病牛的唾液中分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN180721和ZY200425。生理生化试验结果显示2株分离株生化特征与副猪链球菌(Streptococcus parasuis)模... 为了对两起牛呼吸道疾病病原进行细菌学诊断,本研究分别从出血性肺炎病死牛的肺脏和流涎病牛的唾液中分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN180721和ZY200425。生理生化试验结果显示2株分离株生化特征与副猪链球菌(Streptococcus parasuis)模式菌株JCM 30273T相符;通过对16S rDNA基因扩增测序、分析结果显示,2株分离株与19株S.parasuis参考株形成第一个进化分支,全部13株猪链球菌(Streptococcus suis)参考株形成第二个进化分支;16S rDNA基因同源性分析结果显示,2分离株与S.parasuis参考株之间的同源性为98.8%~100%,与JCM 30273T株之间的同源性分别为98.9%和100%。以上结果表明2株分离株均为S.parasuis。进一步对16S rDNA基因分析结果显示,2株分离株和S.parasuis参考株存在两个独特相邻的核苷酸插入片段ATGA和CATT,这两个核苷酸插入片段可作为鉴别S.parasuis和S.suis的遗传标记。药敏试验结果显示,2株分离菌株对青霉素、阿莫西林、头孢噻吩等多种抗生物敏感,对磺胺甲恶唑耐药。将两株分离菌悬液分别以1×10^(8)cfu/只腹腔接种小鼠,进行致病性试验,结果显示,2株分离株对小鼠均具有较强致病性。本研究在国内首次分离到牛源S.parasuis,证实牛S.parasuis感染在我国的存在,对了解S.parasuis的生物学特性和牛S.parasuis感染的预防和控制具有重要指导意义。 展开更多
关键词 副猪链球菌 牛 分离 生物学特性
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