人nov基因全长cDNA克隆、测序及其组织表达谱分析 被引量：2

1

作者 蒋达和 苟德明 +3 位作者 毛歆 朱帆 刘辉 李文鑫 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期745-750,共6页

采用特异性mRNA富集技术,从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆,序列分析表明,该基因cDNA序列由2389个碱基对组成,包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF),3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴.Northern杂交显示,在Hela细胞和肾上... 采用特异性mRNA富集技术,从人早期胚胎中得到人nov基因(novH)的cDNA克隆,序列分析表明,该基因cDNA序列由2389个碱基对组成,包含一段长1071bp的开放阅读框(ORF),3′端含有加尾信号AATAAA和ply(A)尾巴.Northern杂交显示,在Hela细胞和肾上腺组织中有表达的novHmRNA,大小约为2.5kb;多组织RNA点杂交分析结果进一步表明,novH基因在肾上腺和主动脉中的表达水平相对较高,在成人肾、肝、肺和小肠组织中亦有少量的表达. 展开更多

关键词 novH CDNA克隆 表达谱 序列分析 基因工程

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动物细胞DNA聚合酶的研究新进展 被引量：2

2

作者 蒋达和 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第5期339-343,共5页

本文主要介绍动物细胞中四种依赖于DNA的DNA聚合酶(简称DNA聚合酶)的结构、功能及其在DNA复制和修复作用中的研究现状。

关键词 DNA聚合酶 DNA复制 DNA修复

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叶绿体基因组的结构研究进展 被引量：1

3

作者 蒋达和 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第1期10-14,共5页

本文根据最近由两组日本科学家首次测定出来的两种植物(地钱和烟草)叶绿体基因组的完整序列,通过此较孢子植物(地钱)和被子植物(烟草)的叶绿体基因组,主要介绍叶绿体基因组中的基因表达系统、能量系统、代谢物质输运系统和RNA加工系统... 本文根据最近由两组日本科学家首次测定出来的两种植物(地钱和烟草)叶绿体基因组的完整序列,通过此较孢子植物(地钱)和被子植物(烟草)的叶绿体基因组,主要介绍叶绿体基因组中的基因表达系统、能量系统、代谢物质输运系统和RNA加工系统的基因及其研究近况。 展开更多

关键词 叶绿体 基因组 结构 DNA序列

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真核翻译因子与蛋白质生物合成 被引量：1

4

作者 蒋达和 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第6期422-427,共6页

真核mRNA在80S核糖体上翻译成蛋白质是一个复杂的过程,需要多步反应及多种因子参与,文章就真核蛋白质的生物合成机制简要综述翻译起始、延伸和终止因子的结构、功能和性质及其在肽链合成过程中的作用研究新进展.

关键词 真核蛋白质 蛋白 生物合成

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鸡肾癌nov基因亚克隆及其表达

5

作者 蒋达和 李文鑫 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1994年第6期99-103,共5页

采用ＤＮＡ重组技术将鸡肾癌ｎｏｖ基因的外显子４和部分外显子３、５的ｃＤＮＡ亚克隆于表达载体ｐＥＴ－３ｄ质粒中，并在大肠杆菌ＢＬ２１中诱导表达，免疫沉淀法和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，ｎｏｖ基因表达的ＮＯＶ融合... 采用ＤＮＡ重组技术将鸡肾癌ｎｏｖ基因的外显子４和部分外显子３、５的ｃＤＮＡ亚克隆于表达载体ｐＥＴ－３ｄ质粒中，并在大肠杆菌ＢＬ２１中诱导表达，免疫沉淀法和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，ｎｏｖ基因表达的ＮＯＶ融合蛋白分量约２．５×１０＾４，与序列推测的分子量基本相符。 展开更多

关键词 NOV基因 基因表达 融合蛋白 免疫沉积 肾肿瘤 癌

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蛋白质生物合成中核糖体延伸循环的变构三位点模型

6

作者 蒋达和 《生命的化学》 CAS CSCD 1991年第4期3-5,共3页

自60年代提出了蛋白质生物合成中核糖体延伸循环的tRNA与核糖体结合的两位点模型以来,迄今国内外各种生化教科书都一直采用这一模型[见图1A]。现在,已有许多证据表明大肠杆菌的70s核糖体上除了A和P位外。

关键词 蛋白 合成 核糖体 延伸循环 变构

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病毒——基因工程的重要工具

7

作者 蒋达和 《生物学杂志》 CAS CSCD 1990年第2期6-9,共4页

长期以来,病毒一直被人们视为恶魔,这是因为病毒作为一种传染因子对生物有极大的危害:它可以使家畜大批致病死亡,使农作物大幅度减产,使人类患各种严重疾病,如肝炎、脑炎、恶性癌肿及艾滋病等,有的目前还是不治之症.其实,自然界也有许... 长期以来,病毒一直被人们视为恶魔,这是因为病毒作为一种传染因子对生物有极大的危害:它可以使家畜大批致病死亡,使农作物大幅度减产,使人类患各种严重疾病,如肝炎、脑炎、恶性癌肿及艾滋病等,有的目前还是不治之症.其实,自然界也有许多病毒不致病甚至可以造福于人类,如现在全世界已基本上消灭了烈性病毒病天花就是痘苗病毒的功劳.还有昆虫核型多角体病毒是当代生物防治害虫的有效杀虫剂,已广泛大面积应用于农林业生产中.由于现代病毒学和分子生物学及其技术的发展。 展开更多

关键词 病毒 基因工程

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叶绿体基因组结构研究新进展

8

作者 蒋达和 《自然杂志》 1989年第10期762-765,780,共5页

众所周知,叶绿体是重要的光能转换、光合作用细胞器,它能将光能转换成化学能、生物能,用于固定空气中的二氧化碳,合成各种有机物。以前我们对叶绿体的遗传控制、进化历史及其与核基因的关系都了解不多,关键的问题就是不了解叶绿体的基... 众所周知,叶绿体是重要的光能转换、光合作用细胞器,它能将光能转换成化学能、生物能,用于固定空气中的二氧化碳,合成各种有机物。以前我们对叶绿体的遗传控制、进化历史及其与核基因的关系都了解不多,关键的问题就是不了解叶绿体的基因组。最近,两组日本科学家分别测定了两种叶绿体基因组的完整DNA序列,这一工作无疑是叶绿体生物学的重大进展。所测出的DNA完整序列。 展开更多

关键词 叶绿体基因组 完整序列 进化历史 光能转换 植物叶绿体 核糖体蛋白 遗传控制 核基因编码 日本科学家 单拷贝

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东亚钳蝎氯毒素BmKCT的表达和功能鉴定(英文) 被引量：10

9

作者 杨锐 彭方 +4 位作者 刘辉 曹志贱 李文鑫 毛歆 蒋达和 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期19-23,共5页

从中国东亚钳蝎ButhusmartensiiKarsch的毒腺cDNA文库中分离得到了一个编码毒素蛋白多肽 (命名为BmKCT)前体的全长cDNA序列 .该毒素多肽与已报道的氯毒素 (chlorotoxin)高度同源 ,其蛋白质一级序列有 6 8%的同源性 .为了鉴定BmKCT的生... 从中国东亚钳蝎ButhusmartensiiKarsch的毒腺cDNA文库中分离得到了一个编码毒素蛋白多肽 (命名为BmKCT)前体的全长cDNA序列 .该毒素多肽与已报道的氯毒素 (chlorotoxin)高度同源 ,其蛋白质一级序列有 6 8%的同源性 .为了鉴定BmKCT的生物学功能 ,通过pGEX系统成功地表达了BmKCT ,并用GST亲和层析和凝胶过滤的方法获得了纯化的重组BmKCT毒素蛋白 (rBmKCT) .通过膜片钳实验 ,记录了rBmKCT对人脑星型胶质瘤细胞 (gliomascell)表面的氯离子通道电流的作用 .结果显示 ,BmKCT可以显著抑制人脑星型胶质瘤细胞表面的氯离子通道电流 ,并且这种抑制作用在一定程度上是可逆的 .实验证明 ,在细胞水平上 ,BmKCT是一种新的短链氯离子通道抑制剂 . 展开更多

关键词 胶质瘤细胞 氯离子通道 表达 人脑 膜片钳 GST 抑制作用 东亚钳蝎 毒腺 功能鉴定

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人绒毛膜促性腺激素α、β亚基cDNA的筛选与序列分析 被引量：8

10

作者 苟德明 李文鑫 +3 位作者 黄健 夏总平 李治 蒋达和 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期899-902,共4页

构建３周龄人胚ｃＤＮＡ 文库，用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ标记的一链ｃＤＮＡ 为探针从中筛选高度表达的克隆子并测序，得到人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）的α和β亚基ｃＤＮＡ 克隆，序列同源性分析表明：α亚基编码区的ｃＤＮＡ 序列... 构建３周龄人胚ｃＤＮＡ 文库，用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ标记的一链ｃＤＮＡ 为探针从中筛选高度表达的克隆子并测序，得到人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）的α和β亚基ｃＤＮＡ 克隆，序列同源性分析表明：α亚基编码区的ｃＤＮＡ 序列与已报道的完全同源，β亚基编码区第３０位碱基Ｇ→Ａ，该碱基的改变不引起氨基酸的改变．另外，在α和β亚基非编码区发现有多处碱基的改变． 展开更多

关键词 CDNA克隆 序列分析 HCG 妇产科药物 Α亚基 β亚

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用改进的DDRT-PCR技术进行人胚差异基因筛选 被引量：7

11

作者 苟德明 李文鑫 +1 位作者 蒋达和 黄健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期205-209,共5页

介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速高效mRNA差异显示技术 ,其特点是利用Ready To GoRT PCR反应珠和Ready To GoRAPD分析珠进行mRNA差异显示分析 ,使取样步骤降至最低程度 ,减少了潜在的取样误差和外源... 介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速高效mRNA差异显示技术 ,其特点是利用Ready To GoRT PCR反应珠和Ready To GoRAPD分析珠进行mRNA差异显示分析 ,使取样步骤降至最低程度 ,减少了潜在的取样误差和外源DNA污染 ,并确保每次反应的高度重复性 .通过银染测序胶分析差异显示的cDNA带 ,便于DNA回收和进一步克隆 .用此方法分析人胚发育早期不同阶段基因的差异表达 ,选用6条随机引物对 3、 4和 5周龄人胚进行mRNA差异显示分析 ,从 2 0 0 0多条带中共分离出 14个差异产物 ,经二次扩增及反向RNA印迹确证其中 展开更多

关键词 MRNA差异显示 人胚发育 DDRT-PCR 基因分离

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人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究 被引量：3

12

作者 徐莉 赵舟宙 +2 位作者 刘辉 蒋达和 李文鑫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期220-225,共6页

利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异... 利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR和Western blot印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子DAF和MCP在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP结果表明人DAF和MCP基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-DAFMCP-DP转染细胞系由于DAF和MCP的共表达获得较DAF或MCP单一表达时更强的保护能力,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,DAF和MCP双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,为获得表达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的DAF和MCP具有协同效应,能更有效地阻止补体激活造成的细胞损伤,在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。 展开更多

关键词 人补体调节蛋白 双基因重组表达载体 共表达 协同作用 超急性排斥反应

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作用于钾离子通道蝎毒素的结构特征及活性表面研究进展 被引量：4

13

作者 吴英亮 曹志贱 +2 位作者 蒋达和 毛歆 李文鑫 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期96-102,共7页

对作用于钾离子通道的蝎毒素的空间结构特点进行了简要归纳,发现高含量碱性残基在不同结构单元广泛分布而少量酸性残基特征性分布等新特点。蝎毒素活性表面研究进展表明,利用空间结构的分子模建结合残基突变是确定活性表面的有效方法。... 对作用于钾离子通道的蝎毒素的空间结构特点进行了简要归纳,发现高含量碱性残基在不同结构单元广泛分布而少量酸性残基特征性分布等新特点。蝎毒素活性表面研究进展表明,利用空间结构的分子模建结合残基突变是确定活性表面的有效方法。基于少量酸性残基特征分布与活性表面取向的相关性,提出酸性残基为活性调节残基的新观点和简单的“拇指”规则预测钾毒素活性表面的方法,从而可望加速蝎毒素的结构与功能关系研究。 展开更多

关键词 钾离子通道 蝎毒素 空间结构 碱性残基 活性表面

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细胞对诱变剂/诱裂剂适应作用的现状

14

作者 蒋达和 《核农学通报》 1989年第6期283-287,共5页

本文综述了动物、植物和微生物细胞对各种物理、化学诱变剂/诱裂刺(重点是烷化剂)适应作用及其机制的研究现状。

关键词 细胞 诱变剂 诱裂剂

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人MCP cDNA的克隆、序列分析及同种型的比较 被引量：2

15

作者 黄健 李文鑫 +1 位作者 苟德明 蒋达和 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期355-358,共4页

以人胚胎ｍ Ｒ Ｎ Ａ 为模板， 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 法得到了人补体调节蛋白膜辅蛋白（ Ｍ Ｃ Ｐ） 的一种ｃ Ｄ Ｎ Ａ 全基因，序列分析结果表明， 所获得的 Ｍ Ｃ Ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ 为文献报道中１０ 种同种型中的一种， 属 Ｍ Ｃ ... 以人胚胎ｍ Ｒ Ｎ Ａ 为模板， 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 法得到了人补体调节蛋白膜辅蛋白（ Ｍ Ｃ Ｐ） 的一种ｃ Ｄ Ｎ Ａ 全基因，序列分析结果表明， 所获得的 Ｍ Ｃ Ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ 为文献报道中１０ 种同种型中的一种， 属 Ｍ Ｃ Ｐ Ｃ２ 型， 该ｃ Ｄ Ｎ Ａ 含一编码３６９ 个氨基酸的阅读框架， 其中的 Ｓ Ｔ Ｐ 区含１４ 个氨基酸， 由 Ｓ Ｔ Ｐ Ｃ 编码， 胞浆尾区含２３ 个氨基酸， 为 Ｃ Ｙ Ｔ２ 。 展开更多

关键词 膜辅蛋白 MCP CDNA 序列分析 同种型

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农杆菌介导外源基因进入油菜的研究 被引量：2

16

作者 周延清 张根发 +1 位作者 蒋达和 张进忠 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第3期65-69,共5页

用甘蓝型油菜子叶为外植体，以农杆菌共培养法将苏云金杆菌δ－内毒素基因和ＮＰＴＩ基因导入油菜．所用的农杆菌为ＬＢＡ４４０４－δ（ｄｉｓａｒｍｅｄｐＡＬ４４０４，ｐＧＡ６４３－δ）．ＰＧＡ６４３－δ为表达载体，其中克隆有... 用甘蓝型油菜子叶为外植体，以农杆菌共培养法将苏云金杆菌δ－内毒素基因和ＮＰＴＩ基因导入油菜．所用的农杆菌为ＬＢＡ４４０４－δ（ｄｉｓａｒｍｅｄｐＡＬ４４０４，ｐＧＡ６４３－δ）．ＰＧＡ６４３－δ为表达载体，其中克隆有ＮＰＴＩ基因和δ－内毒素基因．共培养４ｄ后，转化的子叶被转入含有卡那霉素（Ｋｍ）的分化培养基［１］上，分化出芽．被切下的芽在含有Ｋｍ的生根培养基［２］上生根，移栽后成活的小抗Ｋｍ油菜苗生长良好．用ＤＮＡ分子杂交、ＥＬＩＳＡ分析和生物测定等方法证明外源基因被转移到油菜中． 展开更多

关键词 油菜 农杆菌 基因导入 抗虫油菜 转基因油菜

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两个东亚钳蝎神经毒素cDNA的克隆和序列分析 被引量：3

17

作者 朱顺义 李文鑫 +2 位作者 曾宪春 蒋达和 毛歆 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 2000年第4期458-462,共5页

构建了东亚钳蝎毒腺组织 c DNA文库 ,用 PCR筛选到两个新的神经毒素全长 c DNA,其开放阅读框(ORF)包括 :信号肽、成熟毒素和 /或额外氨基酸序列 ,它们编码的成熟毒素分别命名为 BmαTX9和 Bm IT( cp) 2 .序列分析表明 ,BmαTX9为抗哺乳... 构建了东亚钳蝎毒腺组织 c DNA文库 ,用 PCR筛选到两个新的神经毒素全长 c DNA,其开放阅读框(ORF)包括 :信号肽、成熟毒素和 /或额外氨基酸序列 ,它们编码的成熟毒素分别命名为 BmαTX9和 Bm IT( cp) 2 .序列分析表明 ,BmαTX9为抗哺乳动物神经毒素 ;Bm IT( cp) 2为痉挛型昆虫毒素 .文章还对东亚钳蝎神经毒素的命名 ,分类以及进化等问题进行了初步的探讨 . 展开更多

关键词 东亚钳蝎 神经毒素 CDNA序列 克隆 PCR

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农杆菌介导的苏云金杆菌毒蛋白基因转基因油菜的初报 被引量：4

18

作者 周延清 蒋达和 +1 位作者 蔡毓能 吴柏桦 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1993年第1期116-116,共1页

油菜(Brassica.L)是具有重要经济价值的油料作物,生产上经常采用的传统杂交育种极大地改良了作物,但是,油菜种属间不亲和性和萌发后幼苗早期夭亡等原因给常规育种带来很大困难。为了克服了此类困难,自1985年开始有科技工作者利用植物基... 油菜(Brassica.L)是具有重要经济价值的油料作物,生产上经常采用的传统杂交育种极大地改良了作物,但是,油菜种属间不亲和性和萌发后幼苗早期夭亡等原因给常规育种带来很大困难。为了克服了此类困难,自1985年开始有科技工作者利用植物基因工程技术改良油莱品种,并且成功地获得了转基因油菜植株,只是表型(皱叶)异常。 展开更多

关键词 转基因油菜 苏云金杆菌 毒蛋白基因

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蝎氯毒素结构、功能与应用研究 被引量：4

19

作者 许均华 吴英亮 +1 位作者 罗锋 蒋达和 《氨基酸和生物资源》 CAS 2005年第4期13-16,共4页

蝎氯毒素是一类能特异阻断神经胶质瘤氯电流的短链蝎毒素。它们具有高度的同源性、保守的基因序列与相似的3-D结构。根据其结构与功能的关系,推测它们可能有相似的药理功能。其中,Chlorotoxin(Cltx)能与神经胶质瘤细胞特异相互作用,并... 蝎氯毒素是一类能特异阻断神经胶质瘤氯电流的短链蝎毒素。它们具有高度的同源性、保守的基因序列与相似的3-D结构。根据其结构与功能的关系,推测它们可能有相似的药理功能。其中,Chlorotoxin(Cltx)能与神经胶质瘤细胞特异相互作用,并抑制其侵袭与转移。 展开更多

关键词 氯离子通道蝎毒素 CHLOROTOXIN 神经胶质瘤

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乌鸡酶解技术研究 被引量：3

20

作者 曾宪春 蒋达和 +1 位作者 李文鑫 王三霞 《氨基酸和生物资源》 CAS 1998年第2期14-16,共3页

采用猪胰脏作为胰酶的主要来源，对乌鸡的酶解工艺进行了研究。实验结果表明：酶反应的最适温度为４５℃，胰酶混合物的合适用量为乌鸡鲜肉重量的５％，反应１８小时达反应平衡，反应浓度以１ｋｇ鲜乌鸡２０００ｍｌ水为宜，反应过程中... 采用猪胰脏作为胰酶的主要来源，对乌鸡的酶解工艺进行了研究。实验结果表明：酶反应的最适温度为４５℃，胰酶混合物的合适用量为乌鸡鲜肉重量的５％，反应１８小时达反应平衡，反应浓度以１ｋｇ鲜乌鸡２０００ｍｌ水为宜，反应过程中维持ｐＨ７．３即可，酶解产物经测定：氨基酸及可溶性短肽总含量高达１６．６１％，其中必须氨基酸含量占氨基酸总含量的５３％。 展开更多

关键词 乌鸡 猪胰 酶解 氨基酸 生物液化

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