目的研究诺如病毒的基因特征和变化规律,预测诺如病毒的进化方向及流行趋势,为预防诺如病毒病的暴发打下良好基础。方法采用RNA提取试剂Trizol提取诺如病毒毒株RNA,采用试剂盒TaKaRa Ex TAP进行PCR扩增,利用Bioedit软件对基因序列进行拼...目的研究诺如病毒的基因特征和变化规律,预测诺如病毒的进化方向及流行趋势,为预防诺如病毒病的暴发打下良好基础。方法采用RNA提取试剂Trizol提取诺如病毒毒株RNA,采用试剂盒TaKaRa Ex TAP进行PCR扩增,利用Bioedit软件对基因序列进行拼接,然后对基因序列分析。将PCR扩增出的P区域克隆到表达载体,构建原核表达质粒。在大肠埃希菌中表达P蛋白,重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测。以ABO血型健康人唾液为受体研究P粒子与唾液HBGA结合能力,检测方法采用间接ELISA法。结果实验用诺如病毒毒株与GⅡ.4流行株在RdRp区的核苷酸序列同源性达到94%以上,其中US95/96株94%,Farmington Hills株94.2%,Hunter株94.7%,DenHaag2006b株95.8%,Osaka2007株96.5%,NewOrleans2009株97.2%,Sydney2012株98.4%。实验株与GⅡ.4流行株在衣壳蛋白区的核苷酸序列同源性达到94%以上,其中US95/96株94.3%,Farmington Hills株94.1%,Hunter株95.2%,DenHaag2006b株96.3%,Osaka2007株96.8%,NewOrleans2009株97.8%,Sydney2012株98.6%；氨基酸同源性达到96%以上,其中US95/96株为96.1%,Farmington Hills株96.3%,Hunter株97.1%,DenHaag2006b株96.8%,Osaka2007株97.3%,NewOrleans2009株97.8%,Sydney2012株98.9%。实验株在RdRp区核糖核苷酸序列的与Neworleans2009和Sydney2012同源性较高,实验株中P2区氨基酸位点发生多点位定向突变,如P2区第95位由天冬酰胺（N）突变为组氨酸（H）。重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测产物大小为35ku的目的蛋白表达。检测P粒子与唾液HBGA结合能力（A450值）血型A为3.815.12；血型B为3.124.05；血型O为2.853.51。结论诺如病毒在遗传上具有多样性,变异快的特点,因而很难有疫苗对它长期安全有效。通过对GII.4型基因序列的研究,有助于寻找其关键位点变化规律和流行株进化机理,有助于预测诺如病毒的进化方向及流行趋势。展开更多
