将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle p...将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle probe,RCP),其中捕获探针、检测探针与待检测致病菌基因组序互补,RCP不含任何待检菌基因组DNA序列,CP的5′末端修饰氨基,将其点样制备成CP微阵列,DP、RCP与待检菌gDNA混合后变性,将其与CP微阵列杂交并连接, RCA扩增反应体系中加入链亲和素进行在片扩增反应,分析检测结果.研究表明,该方法能灵敏、特异性地检测单一和混合靶标分子,以金黄色葡萄球菌为检测对象,其最低检测限可到达50 fg/μL,其线性范围是400 ~50 fg/μL, R 2 达到0.97,证实了该方法的可行性和可靠性,为食源性致病菌检测提供了新的技术方法.展开更多
针对珠江口藻类生长受泥沙遮光限制明显的问题,对RCA(row and column of Aesop)三维水质模型进行改进,加入泥沙模块及悬沙遮光对藻类生长的限制作用。应用改进的RCA水质模型,对珠江口的营养盐、浮游植物及溶解氧进行模拟研究,结果显示,...针对珠江口藻类生长受泥沙遮光限制明显的问题,对RCA(row and column of Aesop)三维水质模型进行改进,加入泥沙模块及悬沙遮光对藻类生长的限制作用。应用改进的RCA水质模型,对珠江口的营养盐、浮游植物及溶解氧进行模拟研究,结果显示,改进的RCA水质模型较好地再现了洪季珠江口营养盐、浮游植物和溶解氧在水平及垂向上的空间分布,这表明该水质模型能较好地反映珠江河口中生态因子的关键过程。珠江口的缺氧现象在物理和生化过程的共同作用下,被限制在伶仃洋的西滩和中滩及磨刀门海域。在洪季,大量冲淡水进入珠江口形成锋面,颗粒态有机物(particulate organic matter,POM)在锋面的影响下,大量集中沉降在伶仃洋的西滩及中滩特定区域及磨刀门外,产生较高的底泥耗氧率(sediment oxygen demand,SOD)。而在高SOD的区域,水体分层通常也较明显,因而产生缺氧现象。另一方面,伶仃洋水体中磷的限制作用明显,加上悬浮泥沙的遮光作用,不利于浮游植物生长,使得初级生产力低;而在陆架上,悬沙浓度减少使初级生产力增加,但由于海源颗粒有机碳(particulate organic carbon,POC)的沉积分散于整个陆架上,无法产生伶仃洋内的高SOD区域,加上水体分层不明显,并没有产生缺氧现象。展开更多
文摘将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle probe,RCP),其中捕获探针、检测探针与待检测致病菌基因组序互补,RCP不含任何待检菌基因组DNA序列,CP的5′末端修饰氨基,将其点样制备成CP微阵列,DP、RCP与待检菌gDNA混合后变性,将其与CP微阵列杂交并连接, RCA扩增反应体系中加入链亲和素进行在片扩增反应,分析检测结果.研究表明,该方法能灵敏、特异性地检测单一和混合靶标分子,以金黄色葡萄球菌为检测对象,其最低检测限可到达50 fg/μL,其线性范围是400 ~50 fg/μL, R 2 达到0.97,证实了该方法的可行性和可靠性,为食源性致病菌检测提供了新的技术方法.
