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高致病性猪蓝耳病病毒GST-N融合蛋白的原核表达及纯化
1
作者 李晓辉 何建斌 +1 位作者 刘金玲 罗芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期30-32,共3页
为了构建高致病性猪蓝耳病病毒(HPPRRSV)GST-N融合蛋白,试验采用RT-PCR技术扩增ORF7基因片段,对其胶回收产物进行测序分析,再将目的片段连接到质粒PGEX-6P-1上,得到重组质粒PGEX-6P-1-N,并转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌... 为了构建高致病性猪蓝耳病病毒(HPPRRSV)GST-N融合蛋白,试验采用RT-PCR技术扩增ORF7基因片段,对其胶回收产物进行测序分析,再将目的片段连接到质粒PGEX-6P-1上,得到重组质粒PGEX-6P-1-N,并转化到E.coliBL21(DE3)感受态细胞中,筛选阳性菌落,并用IPTG进行诱导表达,应用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行检测与鉴定。结果表明:该序列与GenBank公布的HN2007的同源性为97%;重组质粒在大肠杆菌中获得了表达,表达产物为42ku的GST-N融合蛋白。 展开更多
关键词 ORF7基因 原核表达 纯化 gst—n融合蛋白
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多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的原核表达、纯化及酶活检测
2
作者 贾伟 杭赛宇 +2 位作者 史宁 周迎会 吴士良 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第2期93-96,共4页
目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E.Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T... 目的:以人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)为研究对象,利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌(E.Coli)BL21中原核表达其编码序列,并对表达产物进行纯化、复性及酶活检测。方法:首先利用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,形成重组表达质粒pGEX-5X-3/T2。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,测序鉴定后转化BL21,异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导后,表达产物为主要以包涵体形式存在的融合蛋白。对其复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(G lutath ione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化。然后根据ppGalNAc-T2的催化功能,设计底物,建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活分析。结果:成功构建了原核表达重组载体pGEX-5X-3/T2,通过蛋白质电泳检测到分子量约为90 kD的融合蛋白的表达,利用亲和层析得到纯化的酶蛋白,并经W estern印迹得以验证。反应后体系上柱洗脱后出现酶促反应的产物洗脱峰。结论:成功构建了重组表达载体pGEX-5X-3/T2,ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达、纯化及复性,检测到具有酶活性。 展开更多
关键词 多肽:n-乙酰氨基半乳糖转移酶2 原核表达 gst融合蛋白 谷胱甘肽-琼脂糖米和层析 酶活检测
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SARS病毒N蛋白的原核重组载体的构建和表达
3
作者 罗凤玲 章晓联 +2 位作者 冯勇 吴建国 朱应 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期40-43,共4页
将SARS病毒N蛋白的基因克隆到原核表达载体 pGEX KG上 ,使其在大肠杆菌DH5α菌株中以与GST蛋白融合的形式表达。采用GluthathionSepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,并用SDS PAGE和WesternBlot对表达的融合蛋白进行分析鉴定。... 将SARS病毒N蛋白的基因克隆到原核表达载体 pGEX KG上 ,使其在大肠杆菌DH5α菌株中以与GST蛋白融合的形式表达。采用GluthathionSepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,并用SDS PAGE和WesternBlot对表达的融合蛋白进行分析鉴定。结果表明 ,本实验成功地构建了高效表达SARS病毒N蛋白的重组表达载体 ,所获得的融合蛋白可以直接用于SARS抗体的检测 ,可用于SARS的早期诊断及SARS疫苗的研究。 展开更多
关键词 SARS病毒 n蛋白 原棱表达 gst融合蛋白
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重组C8orf32蛋白的表达、纯化及抗体制备 被引量：1
4
作者 朱镭 张政希 +3 位作者 倪国新 徐学敏 林标扬 李伟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期1-5,共5页
C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,... C8orf32是一种功能未知基因,其mRNA含量在乳腺癌组织中显著高于正常乳腺组织。将其开放式阅读框插入pGEX-6P1原核表达载体T7启动子控制下的GST编码基因下游,构建了C8orf32蛋白表达质粒pGEX-6P-C8。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达了GST-C8orf32融合蛋白。经带有GST标签的位点特异性蛋白酶切割除去GST-C8orf32融合蛋白的GST标签,获得了N端带有8个多余氨基酸残基的C8orf32蛋白,蛋白纯度为95%左右。N端氨基酸序列分析表明该蛋白N端氨基酸序列正确,质谱鉴定进一步证明所表达C8orf32蛋白的正确性。用制备的C8orf32蛋白免疫新西兰白兔,获得了能够正确识别C8orf32蛋白的抗血清。该蛋白及其抗体的成功制备,为进一步研究C8orf32蛋白的结构功能和体内分布打下了基础。 展开更多
关键词 C8orf32 gst融合蛋白 位点特异性蛋白酶 n端氨基酸序列分析 质谱鉴定
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