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NGAL蛋白Ni^(2+)-金属鏊合层析纯化及其鉴定 被引量：3
1
作者 王朝阳 许丽艳 +2 位作者 荣举 李劲涛 李恩民 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2004年第2期74-77,共4页
背景与目的 :通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 +_金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定 ,最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白。 材料与方法 :将 pDsbA2.0 -NGAL融合表达载体转化大肠杆菌 ,进行IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE分... 背景与目的 :通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 +_金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定 ,最后获得一定丰度与纯度的NGAL蛋白。 材料与方法 :将 pDsbA2.0 -NGAL融合表达载体转化大肠杆菌 ,进行IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE分析表达产物的产量与可溶性 ,然后将表达产物进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定。 结果 :将 pDs bA2.0 -NGAL融合表达载体进行IPTG诱导表达 ,SDS-PAGE分析显示表达的NGAL融合蛋白产量高、可溶性好 ;对表达的NGAL蛋白进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化后其纯度>95 %,MALDI-TOF-MS鉴定结果提示纯化后NGAL蛋白分子量与其理论分子量的误差仅为0.91‰。结论 :通过对新癌基因NGAL的原核融合表达产物进行Ni2 + _金属鏊合层析纯化及其MALDI-TOF-MS鉴定 ,最后确切获得了一定丰度电泳纯的NGAL蛋白 。 展开更多
关键词 NGAL ni^2+-金属鏊合层析 6×His MALDI-TOF-MS
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Ni^(2+)亲和胶的制备及其对带His_6标签融合蛋白的纯化 被引量：3
2
作者 江红 郑晓飞 +3 位作者 罗瑛 朱捷 付汉江 孙志贤 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第1期47-48,53,共3页
目的 :制备Ni2 + 亲和胶 ,并检测其纯化带His6 标签融合蛋白的效果。方法 :在强碱条件下 ,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后 ,接上多个IDA臂 ,将Ni2 + 连接在IDA臂上 ,即为亲和胶成品。用亲和胶分别在变性和非变性的条件下 ,纯化包涵体... 目的 :制备Ni2 + 亲和胶 ,并检测其纯化带His6 标签融合蛋白的效果。方法 :在强碱条件下 ,用环氧氯丙烷活化Sepharose 4B后 ,接上多个IDA臂 ,将Ni2 + 连接在IDA臂上 ,即为亲和胶成品。用亲和胶分别在变性和非变性的条件下 ,纯化包涵体和可溶性表达的带His6 标签的人TRF1和人tankyrase的PARP结构域 ,并通过Western印迹鉴定纯化的靶蛋白。结果 :用自制的Ni2 + 亲和胶可以获得SDS_PAGE单一条带的目的蛋白 ,并得到Western印迹的鉴定。结论 :自制的Ni2 + 亲和胶对带His6 标签融合蛋白的纯化能力与商品胶完全等同 ,但价格低廉。 展开更多
关键词 色谱法 亲和 印迹法 蛋白质 ni^2+ IDA TRF1 TANKYRASE
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C端带多聚组氨酸标签的重组小鼠基质细胞衍生因子-1α原核系统的表达及分离纯化
3
作者 蔡绍晖 杜军 +2 位作者 任先达 谭毅 李新平 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期47-52,共6页
在构建SDF-1原核表达系统的基础上,探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1α成熟肽基因插入原核表达质粒pET101/D-TOPO,用以转化大肠杆菌BL21Star^(TM)菌株,经IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western B... 在构建SDF-1原核表达系统的基础上,探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1α成熟肽基因插入原核表达质粒pET101/D-TOPO,用以转化大肠杆菌BL21Star^(TM)菌株,经IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测证实:其表达产物在约11.6kD处有明显条带显示,其大小与预测的重组SDF-1α/His分子量一致。采用Ni^2+-Resin固相亲和层析法对由该系统表达的C端带6Xhis标签的重组SDF-1α/His进行分离纯化,纯度达92％。体外活性检测结果表明:重组小鼠SDF-1α/His对T细胞有明显趋化和促生存作用;能有效诱导Jurkat细胞ERK磷酸化。 展开更多
关键词 多聚组氨酸 基质细胞衍生因子-1Α 原核系统 表达 分离 纯化 趋化因子 基因重组 固相亲和层析 基因转染
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重组羧肽酶原B的复性方法研究
4
作者 张晓彦 刘海峰 袁勤生 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期39-44,共6页
构建的羧肽酶原B表达质粒在大肠杆菌中获得高表达。但目的蛋白是以包涵体的形式存在。为了获得活性羧肽酶B,必须对其包涵体进行变复性。首先利用稀释复性确定了羧肽酶原B复性的最佳缓冲液;在凝胶过滤复性中,研究了柱长和洗脱流速对羧肽... 构建的羧肽酶原B表达质粒在大肠杆菌中获得高表达。但目的蛋白是以包涵体的形式存在。为了获得活性羧肽酶B,必须对其包涵体进行变复性。首先利用稀释复性确定了羧肽酶原B复性的最佳缓冲液;在凝胶过滤复性中,研究了柱长和洗脱流速对羧肽酶原B复性效率的影响;另外对比了稀释复性、透析复性、凝胶层析复性和Ni2+亲合层析法等四种方法对羧肽酶原B的复性效果。结果发现,这4种方法的复性效果有以下顺序:凝胶过滤复性>稀释复性>Ni2+亲合层析>透析复性。 展开更多
关键词 羧肽酶原B 包涵体 凝胶过滤 稀释 透析 ni^2+亲合层析
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