热激诱导Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子基因和人白细胞抗原的表达

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作者 晏丽 程谟斌 +1 位作者 张业 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期746-750,共5页

目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Wester... 目的检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的表达,及其对下游人类白细胞抗原(HLA-DR)表达的影响。方法采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Western blot检测热激和IFN-γ作用前后Jurkat细胞中CⅡTA蛋白的表达变化。采用流式细胞仪荧光分析热激前后Jurkat细胞表面HLA-DR的表达。结果在Jurkat细胞中,热激可诱导CⅡTAmRNA和蛋白的表达,而IFN-γ处理后无明显变化。与正常Jurkat细胞相比,热激后HLA-DR在Jurkat细胞表面的抗原浓度明显增加(P<0.01)。结论热诱导Jurkat细胞中CⅡTA和HLA-DR先后表达增高。提示热激可能在免疫基因表达缺陷的细胞中,重建相关基因的功能,为肿瘤热疗提供新的依据。 展开更多

关键词 热激 JURKAT细胞 主要组织相容性复合物ⅱ类转录激活因子 人白细胞抗原

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主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子在五种人类恶性血液病细胞系中的表达

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作者 游泳 邹萍 郭荣 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期288-291,共4页

目的　探讨 5种血液病细胞株的主要组织相容性复合物 (MHC) Ⅱ类抗原表达及对干扰素 (IFN) γ诱导MHC分子表达的反应性与MHCⅡ类分子转录激活因子 (CⅡTA)表达的关系。方法　采用Westernblot、免疫组化和 (或 )流式细胞术检测肿瘤细胞... 目的　探讨 5种血液病细胞株的主要组织相容性复合物 (MHC) Ⅱ类抗原表达及对干扰素 (IFN) γ诱导MHC分子表达的反应性与MHCⅡ类分子转录激活因子 (CⅡTA)表达的关系。方法　采用Westernblot、免疫组化和 (或 )流式细胞术检测肿瘤细胞CⅡTA蛋白及MHC分子表达 ,逆转录PCR检测肿瘤细胞CⅡTA基因表达。混合淋巴细胞反应检测肿瘤细胞刺激外周血T细胞反应的能力。结果　肿瘤细胞MHCⅡ类分子表达与CⅡTA表达一致 ;诱导型表达CⅡTA的Jurkat细胞 ,经IFN γ作用后其MHCⅠ、Ⅱ类抗原表达增高 (分别为 2 0 %、4 2 % ) ;IFN γ诱导后仍不表达CⅡTA的肿瘤细胞 ,其对IFN γ促MHCⅡ表达的作用不反应。Jurkat诱导后刺激T细胞表达高水平的白细胞介素 2mRNA(是未诱导时的 5 1倍 )。结论　某些恶性血液病细胞株对IFN γ不能诱导MHC分子表达与CⅡTA诱导性表达缺陷有关 ,表明CⅡTA参与调控肿瘤细胞MHCⅠ、Ⅱ类抗原表达 ,可能在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合物 ⅱ类转录激活因子 恶性血液病 干扰素 检测 肿瘤细胞

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MHCⅡ类分子转录激活因子锤头状核酶的生物学活性 被引量：1

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作者 郭荣 蒋海玉 +5 位作者 张敏 邹萍 杜欣 陆泽生 林伟 黄梓伦 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期294-297,共4页

目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入... 目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)锤头状核酶抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。方法设计并克隆针对CⅡTA第464位点的锤头状核酶(Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性鉴定,进一步将Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464),并稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR-、DP-、DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTA mRNA水平。结果细胞外活性鉴定表明,Rz464具有明显的切割活性。细胞内切割实验显示:pRz464阳性Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低了75.93%、64.14%、78.32%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论抗CⅡTA锤头状核酶Rz464可有效抑制MHCⅡ类抗原的表达。 展开更多

关键词 MHCⅱ类分子转录激活因子 核酶 自身免疫性疾病 基因疗法

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CⅡTA基因在5种人类细胞系中的表达及意义 被引量：1

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作者 左文丽 宋永平 郭荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1158-1161,共4页

本研究探讨5种细胞株中MHC-Ⅱ类抗原(HLA-DR、DP、DQ)表达及IFN-γ诱导后MHC分子与CⅡTA表达的关系。采用Western blot、免疫组织化学和流式细胞术检测5种细胞株中CⅡTA蛋白及MHC分子的表达,用RT-PCR检测细胞株中CⅡTA基因表达。结果表... 本研究探讨5种细胞株中MHC-Ⅱ类抗原(HLA-DR、DP、DQ)表达及IFN-γ诱导后MHC分子与CⅡTA表达的关系。采用Western blot、免疫组织化学和流式细胞术检测5种细胞株中CⅡTA蛋白及MHC分子的表达,用RT-PCR检测细胞株中CⅡTA基因表达。结果表明:5种细胞株中MHC-Ⅱ类分子与CⅡTA的表达一致;组成型表达CⅡTA的细胞株亦表达MHC-Ⅱ类分子,经IFN-γ诱导后表达CⅡTA的细胞株表达MHC-Ⅱ类分子亦恢复;IFN-γ诱导后仍不表达CⅡTA的细胞株,对IFN-γ促MHC-Ⅱ类分子表达的作用亦无反应。结论:某些肿瘤细胞株不能表达MHC-Ⅱ分子与CⅡTA表达缺陷有关,这表明CⅡTA参与调控细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达,它可能在肿瘤免疫逃逸中起一定作用。 展开更多

关键词 CⅱTA基因 MHC-ⅱ类分子转录激活因子 MHC-ⅱ类分子 干扰素-γ

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抗CⅡTA核糖核酸酶P抑制Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类抗原的表达

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作者 何飞 吴书林 +1 位作者 孙明 郭荣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期405-409,共5页

探讨抗MHC-Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)的核糖核酸酶P对Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用.M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位.以pTK117质粒为模板,PCR扩增带有抗CⅡTA第452及629位点的引导序列的M1-RNA(M1-452-GS及M1-629-GS)... 探讨抗MHC-Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)的核糖核酸酶P对Daudi细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用.M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位.以pTK117质粒为模板,PCR扩增带有抗CⅡTA第452及629位点的引导序列的M1-RNA(M1-452-GS及M1-629-GS),再分别插入pUC19载体(pUC19-M1-452-GS和pUC19-M1-629-GS).从Raji细胞中克隆CⅡTA基因DNA片段(114～800)后插入pGEM-7zf(+)质粒.将重组M1-RNA与靶基因的mRNA进行细胞外共孵育,显示仅pUC19-M1-629-GS可特异性地切割靶基因mRNA.再将M1-629-GS克隆入psNAV载体(pA629)并稳定转染Daudi细胞株,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平,流式细胞术检测其HLA-DR、DP、DQ抗原表达.与对照组比较,M1-629-GS阳性Daudi细胞的CⅡTAmRNA含量减少90.19%(P<0·05),其HLA-DR、DP、DQ抗原表达分别降低91.97%、90.19%、92.36%(P<0·05).研究表明,抗CⅡTA的核糖核酸酶P可通过抑制CⅡTA的转录而降低Daudi细胞表面的MHC-Ⅱ类分子的表达. 展开更多

关键词 MHC-ⅱ类分子转录激活因子(CⅱTA) 核糖核酸酶P(M1-RNA) 移植免疫

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抗CⅡTA的核糖核酸酶P对Jurkat细胞MHCⅡ类分子表达的抑制作用

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作者 何飞 吴书林 +1 位作者 孙明 郭荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期607-611,共5页

本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC1... 本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-3408-GS亚克隆入psNAV载体并稳定转染Jurkat细胞株,采用流式细胞术检测该细胞表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平。结果表明:在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,M1-3408-GS阳性Jurkat细胞株与对照组比较,其表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ抗原诱导型表达分别降低了83.17%、94.12%及84.31%;同时CⅡTA的mRNA含量明显降低(P<0.05,t=4.89)。结论:抗CⅡTA的M1-RNA(M1-3408-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。 展开更多

关键词 MHCⅱ类分子转录激活因子(CⅱTA) 核糖核酸酶P(M1-RNA) 移植免疫

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抗内皮细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类分子转录激活因子锤头状核酶的克隆及活性表达

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作者 何飞 孙明 +2 位作者 党瑜华 董建增 周宏研 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期364-366,共3页

目的 :拟克隆抗内皮细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类分子转录激活因子 (CⅡTA)锤头状核酶 ,抑制血管内皮细胞表面主要组织相容性复合物 (MHC Ⅱ )分子的表达。方法 :设计并合成针对人类CⅡTA第 134、2 18、4 6 4位点的一组锤头状核酶 ... 目的 :拟克隆抗内皮细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类分子转录激活因子 (CⅡTA)锤头状核酶 ,抑制血管内皮细胞表面主要组织相容性复合物 (MHC Ⅱ )分子的表达。方法 :设计并合成针对人类CⅡTA第 134、2 18、4 6 4位点的一组锤头状核酶 (Rz134、Rz2 18、Rz4 6 4 ) ,及其对应的CⅡTA靶基因m5 2 3。核酶体外切割实验鉴定Rz4 6 4活性最高 ,将Rz4 6 4克隆到真核表达载体pIRES2 EGFP(pIRES2 Rz4 6 4 ) ,并通过纳米载体介导其稳定转染人类脐静脉内皮细胞系 ,流式细胞术检测HLA DR、DP、DQ类抗原表达 ,RT PCR检测CⅡTAmRNA水平。结果 :pIRES2 Rz4 6 4阳性内皮细胞与对照组比较 ,HLA DR、DP、DQ抗原表达分别降低了 76 .2 6 %、87.75 %及 78.99% ,同时CⅡTAmRNA含量亦下降了 6 9%。结论 :Rz4 6 4抑制了CⅡTAmRNA含量 。 展开更多

关键词 心脏移植 MHCⅱ类分子转录激活因子 核酶 移植血管病

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血管内皮细胞主要组织相容性复合物-Ⅱ类分子转录激活因子小干扰RNA的抑制作用

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作者 何飞 郭荣 +2 位作者 杜欣 翁建宇 陆泽生 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期857-860,共4页

目的:探讨主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的小干扰RNA(siRNA),对血管内皮细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用。方法:设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siRNA2、siRNA3)。通过... 目的:探讨主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的小干扰RNA(siRNA),对血管内皮细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达的抑制作用。方法:设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siRNA2、siRNA3)。通过纳米载体介导siRNA稳定转染脐静脉血管内皮细胞系,流式细胞术检测经典的MHC-Ⅱ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及其调控的MHC-Ⅱ类及Ii分子的mRNA水平。结果:siRNA3组内皮细胞系表面HLA-DR、-DP、-DQ抗原表达分别降低了91.97%、96.65%及89.67%,同时CⅡTA、MHC-Ⅱ类及Ii分子的mRNA含量明显减少。结论:siRNA3抑制了CⅡTA的mRNA含量,并阻止其调控的MHC-Ⅱ类分子的表达。 展开更多

关键词 心脏移植 RNA 干扰 MHCⅱ类分子转录激活因子 移植物闭塞 血管

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CIITA M1-RNA抑制HeLa细胞表面MHC II类抗原的表达

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作者 郭荣 杜欣 +3 位作者 翁建宇 吴穗晶 陆泽生 林伟 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期453-457,共5页

探讨MHC II类转录激活因子(CIITA)的M1-RNA对细胞表面MHC II类分子表达的抑制。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CIITA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CIITA靶基因,分别插入pUC19、pGEM... 探讨MHC II类转录激活因子(CIITA)的M1-RNA对细胞表面MHC II类分子表达的抑制。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CIITA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CIITA靶基因,分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-629-GS亚克隆入psNAV载体(psNAV-M1-629-GS,pA629)并稳定转染HeLa细胞株,流式细胞术检测经典的MHC II类抗原(HLA-DR、-DP、-DQ)的表达,RT-PCR检测CIITA的mRNA水平。在重组人γ干扰素诱导下,pA629阳性HeLa细胞株表面HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了83.03%及89.91%;同时CIITA的mRNA含量明显减少(P<0.05)。CIITA的M1-RNA抑制了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHC II类分子的表达,为移植物抗宿主病的研究提供了一种新方法。 展开更多

关键词 MHC ⅱ类转录激活因子(CIITA) M1-RNA 移植物抗宿主病

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抗自身免疫的新途径-CⅡTA siRNA的体外筛选及活性

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作者 郭荣 何飞 +5 位作者 杜欣 罗成伟 陆泽生 翁建宇 吴穗晶 林伟 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期264-267,共4页

目的探讨主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的siRNA对软骨细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的抑制。方法设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siR-NA2、siRNA3)。通过纳米载... 目的探讨主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子(CⅡTA)的siRNA对软骨细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的抑制。方法设计并合成针对CⅡTA编码区第176、741及3061位点的siRNA(分别为siRNA1、siR-NA2、siRNA3)。通过纳米载体介导siRNA稳定转染原代软骨细胞,流式细胞术检测经典的MHC-Ⅱ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及其调控的MHC-Ⅱ类分子的mRNA水平。结果在重组人干扰素(interferon,IFN)-γ诱导下,siRNA3阳性软骨细胞表面HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了93.36%、94.16%,同时CⅡTA的mRNA含量明显减少。结论siRNA3抑制了CⅡTA的mRNA含量,并阻止其调控的MHC-Ⅱ类分子的表达。 展开更多

关键词 小干扰RNA MHCⅱ类分子转录激活因子 自身免疫性疾病

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应用RNA干扰阻抑小鼠L929细胞MHCⅡ类基因表达及功能的研究 被引量：1

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作者 路丽明 丁庆 +3 位作者 杨能 周晓荣 周芸 周光炎 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期464-469,共6页

为了探讨RNA干扰技术对小鼠CⅡTA(II类反式激活因子)以及MHC Ⅱ类基因表达和功能的影响。我们首先设计并合成4条小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4)序列,在阳离子脂质体的介导下转染小鼠L929... 为了探讨RNA干扰技术对小鼠CⅡTA(II类反式激活因子)以及MHC Ⅱ类基因表达和功能的影响。我们首先设计并合成4条小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4)序列,在阳离子脂质体的介导下转染小鼠L929细胞。48h后,用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测CⅡTA mRNA的变化;流式细胞仪检测I-Ab分子表达的变化。接着构建了CIITA特异的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,通过在靶细胞内转录形成具有特异干扰作用的shRNA,高效、特异的阻断CⅡTA基因的表达,形成Ⅱ类基因功能缺陷或使其表达降低。进一步混合淋巴细胞反应观察同种异基因CD4+T细胞对稳定转入RAN干扰载体的L929细胞的免疫应答强度,结果证实该L929细胞对不同受者CD4+T细胞的刺激能力分别下降73.90%和76.34%。以上结果为减低同种异体/异种器官细胞性排斥提供了新的思路和手段。 展开更多

关键词 MHCⅱ类转录激活因子 SIRNA Ⅰ-A MHCⅱ类基因

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CⅡTA M1-RNA对MHCⅡ类分子表达的抑制作用

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作者 郭荣 何飞 +3 位作者 杜欣 翁建宇 陆泽生 林伟 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1071-1075,共5页

目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制。方法M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入p... 目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制。方法M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pUC19、pGEM-7zf (+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-629-GS亚克隆入psNAV载体(psNAV-M1-629-GS,pA629)并稳定转染ECV304细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA的mRNA水平。结果pA629阳性ECV304细胞株与对照组比较,HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了89.21%及92.31%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论CⅡTA的M1-RNA(M1-629-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。 展开更多

关键词 MHC ⅱ类分子转录激活因子(CⅱTA) M1-RNA 移植免疫

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