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交叉引物恒温扩增技术检测创伤弧菌的应用研究 被引量：4
1
作者 张晶 吴新伟 +3 位作者 陈惠玲 陈佳璇 狄飚 白志军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期711-714,共4页
目的建立一种快速检测创伤弧菌( Vibrio vulnificus )的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术。方法 针对创伤弧菌vvhA基因序列保守区域设计CPA引物和探针,并优化反应体系和反应条件,同时验证方法的灵敏度和特异性。... 目的建立一种快速检测创伤弧菌( Vibrio vulnificus )的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术。方法 针对创伤弧菌vvhA基因序列保守区域设计CPA引物和探针,并优化反应体系和反应条件,同时验证方法的灵敏度和特异性。结果 对创伤弧菌的检测具有高度特异性;对创伤弧菌菌液检测的灵敏度达到了1.28×10^3 CFU /mL,此法 40~60 min 内即可完成检测。利用CPA法针对本实验室前期研究的CB型、EA型、CAB型、CA型和EB型等亚型创伤弧菌毒株计算特异性和敏感性,5种亚型中除了CB亚型特异性和敏感性为95.65%和100%,其余亚型特异性和敏感性均为100%。结论 本研究建立的CPA法具有较高的特异性和灵敏性,可有效缩短检验时间提高检验效率。 展开更多
关键词 创伤弧菌 交叉引物恒温扩增 vvhA基因
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二代交叉引物恒温扩增技术对结核分枝杆菌检测的应用价值
2
作者 王燕 欧维正 +1 位作者 杨秀章 杨毅 《贵州医药》 CAS 2023年第11期1786-1787,共2页
目的 评估二代交叉引物恒温扩增技术(CPA)对结核分枝杆菌(MTB)检测的应用价值。方法 选取我院收治患者送检的各类标本235例,其中痰液98例、肺泡灌洗液76例、胸(腹)水37例、其它标本(穿刺液及分泌物等)24例。对每份送检标本应用多色巢式... 目的 评估二代交叉引物恒温扩增技术(CPA)对结核分枝杆菌(MTB)检测的应用价值。方法 选取我院收治患者送检的各类标本235例,其中痰液98例、肺泡灌洗液76例、胸(腹)水37例、其它标本(穿刺液及分泌物等)24例。对每份送检标本应用多色巢式荧光定量PCR(Xpert MTB/RIF)和二代CPA同步检测MTB,比较二者检测结果的差异。结果 Xpert MTB/RIF和二代CPA检测MTB的总体阳性率分别为43.38%和42.13%,对痰液、肺泡灌洗液、胸(腹)水、其它标本(穿刺液及分泌物等)的阳性检出率则分别为50.00%与47.96%、47.37%与44.74%、16.22%与16.22%、50.00%与50.00%,二者对各类标本的阳性检出率比较差异均无统计学意义(p>0.05)。二者对全部标本的阳性符合率88.35%,阴性符合率93.94%,总符合率91.49%,一致性比较,Kappa=0.83。二者检测结果的差异主要表现在少数含菌量极低的标本。结论 二代CPA与Xpert MTB/RIF对检测MTB结果比较具有极高的一致性,二代CPA可推荐用于临床对MTB的快速检测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 交叉引物恒温扩增技术 Xpert MTB/RIF
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交叉引物恒温扩增技术在结核分枝杆菌检测中的应用 被引量：9
3
作者 毛秀军 李世明 +3 位作者 葛晓励 张国强 孙绍秋 王惠良 《检验医学与临床》 CAS 2016年第8期1107-1109,共3页
目的探讨交叉引物扩增技术（CPA）快速检测系统在结核病诊断中的价值。方法收集唐山市第四医院2015年3~5月206例结核病就诊患者的痰液标本,其中肺结核患者95例（其中痰涂片阳性26例,阴性69例）,非结核患者111例,分别采用RT-PCR法实时荧... 目的探讨交叉引物扩增技术（CPA）快速检测系统在结核病诊断中的价值。方法收集唐山市第四医院2015年3~5月206例结核病就诊患者的痰液标本,其中肺结核患者95例（其中痰涂片阳性26例,阴性69例）,非结核患者111例,分别采用RT-PCR法实时荧光定量聚合酶链反应法（RT-PCR）检测标本中的结核分枝杆菌,对结果进行统计分析。结果涂片法、罗氏培养法、EasyNAT~TB-CPA法检测初诊疑似肺结核患者痰液的灵敏度分别为：27.37%（26/95）、50.53%（48/95）、56.84%（54/95）、51.58%（49/95）。以罗氏培养结果为诊断金标准,EasyNAT~TB-CPA法灵敏度为89.58%（43/48）,特异度94.94%（150/158）;RT-PCR法的灵敏度为83.33%（40/48）,特异度94.30%（149/158）;EasyNAT~TB-CPA与RT-PCR法相比,总体一致性为98.54%（203/206）,Kappa指数值为0.92。结论 TB-CPA法在检测痰液标本中具有较高的临床应用价值,且方法简便、快速。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 恒温扩增 培养法 交叉引物扩增技术
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交叉引物恒温扩增技术在副溶血性弧菌毒力基因检测中的应用 被引量：2
4
作者 吴晓芳 纪蕾 +2 位作者 严伟 黄世旺 马学军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期85-88,共4页
目的 建立一种快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血素（TDH）和不耐热溶血素（TLH）的CPA-核酸试纸条法.方法 根据副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应体系进行优化,确立最佳反应温度和时间,并将CPA方法... 目的 建立一种快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血素（TDH）和不耐热溶血素（TLH）的CPA-核酸试纸条法.方法 根据副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应体系进行优化,确立最佳反应温度和时间,并将CPA方法与荧光定量PCR法进行比较与评价.结果 本研究建立的CPA-核酸试纸条法最佳反应温度和时间为60℃40 min,对副溶血性弧菌的TDH和TLH毒力基因检测具有高度特异性,对副溶血性弧菌的TLH和TDH检出极限分别为1.8 cfu/ml和16.0 cfu/m,与荧光定量PCR法一致;而且具有较好的稳定性.464株菌株中检出副溶血性弧菌TLH和TDH基因阳性率分别为100％（464/464）和72.6％（337/464）,其中,水产品中分离株TDH毒力基因阳性率为7.81％ （10/128）;临床标本分离株TDH毒力基因阳性率为97.32％ （327/336）.结论 该方法检测副溶血性弧菌TLH和TDH基因,具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点,可用于副溶血性弧菌的现场快速检测. 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 交叉引物恒温扩增技术 毒力基因
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交叉引物恒温扩增技术结合核酸试纸条检测沙门菌方法的建立 被引量：4
5
作者 朱淑英 张兵 《中国卫生检验杂志》 CAS 2023年第9期1079-1081,1106,共4页
目的 建立一种快速检测沙门菌的交叉引物恒温扩增技术(CPA)-核酸试纸条法。方法 收集不同来源的15株沙门菌和非沙门菌,作为实验用菌株,使用加热煮沸法提取细菌DNA核酸;对CPA方法进行敏感性和特异性研究,并与沙门菌荧光定量PCR法进行比... 目的 建立一种快速检测沙门菌的交叉引物恒温扩增技术(CPA)-核酸试纸条法。方法 收集不同来源的15株沙门菌和非沙门菌,作为实验用菌株,使用加热煮沸法提取细菌DNA核酸;对CPA方法进行敏感性和特异性研究,并与沙门菌荧光定量PCR法进行比较与评价。结果 特异性试验结果显示,本研究建立的CPA-核酸试纸条法对15种沙门菌的检测阳性率达100%,对15株非沙门菌检测结果全部为阴性。灵敏性试验结果显示,对沙门菌的纯菌液灵敏度检测极限为1.6 cfu/ml,模拟样本的检测限达到160 cfu/g,与荧光定量PCR法一致。结论 该方法检测沙门菌具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可应用于沙门菌快速检测。 展开更多
关键词 沙门菌 交叉引物恒温扩增技术 核酸试纸条
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环介导恒温扩增技术对肺炎链球菌耐药菌株的检测及其评价
6
作者 康红艳 陈秋圆 +4 位作者 海燕 蔡彬秀 张华 王珍珠 孙丽娜 《标记免疫分析与临床》 2025年第1期169-173,共5页
目的 评价环介导恒温扩增技术(LAMP)对肺炎链球菌(Spn)耐药菌株的检测能力。方法 设计Spn耐药菌株耐药基因gyrA、gyrB、ermB和mefA的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测Spn耐药菌株的LAMP方法,以携带上述基因的质粒DNA为检测标准,明确... 目的 评价环介导恒温扩增技术(LAMP)对肺炎链球菌(Spn)耐药菌株的检测能力。方法 设计Spn耐药菌株耐药基因gyrA、gyrB、ermB和mefA的环介导恒温扩增特异性引物,建立检测Spn耐药菌株的LAMP方法,以携带上述基因的质粒DNA为检测标准,明确其灵敏度与特异性。前瞻性分析2023年6月至2024年6月在本院就诊的120例社区获得性肺炎患者的痰液标本。采用LAMP检测临床标本中的Spn耐药菌株,与常规细菌培养结果以及Sanger测序结果进行统计学分析。采用LAMP检测Spn耐药菌株耐药基因gyrA、gyrB、ermB和mefA,同时与药敏试验结果进行统计学分析。结果 采用LAMP可检测到质粒DNA的最低浓度10^(-4)ng/μL;采用PCR可检测到质粒DNA的最低浓度10^(-2)ng/μL,说明LAMP的灵敏度高。分离培养法检出Spn耐药菌株31株,LAMP法检出Spn耐药菌株33株,检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。LAMP法和Sanger测序对Spn耐药菌株耐药基因的检测结果100%一致。LAMP法与K-B法药敏试验的gyrA阳性一致率92.41%,LAMP法与K-B法药敏试验的gyrB阳性一致率95.06%,LAMP法与K-B法药敏试验的ermB阳性一致率90.91%,LAMP法与K-B法药敏试验的mefA阳性一致率87.50%。结论 LAMP可快速检测gyrA、gyrB、ermB和mefA,其可用于Spn耐药菌株的检测。 展开更多
关键词 环介导恒温扩增技术 肺炎链球菌 耐药菌株
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实时荧光核酸恒温扩增技术检测宫颈解脲支原体的应用价值
7
作者 朱寅 宁玉梅 《健康研究》 2025年第1期101-106,共6页
目的对比实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)感染治疗后的检测效果差异,为探寻随访中实时评估疗效的检测... 目的对比实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)在解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)感染治疗后的检测效果差异,为探寻随访中实时评估疗效的检测方法以避免过度治疗提供参考。方法分别在患者初检和治疗后停药2周及以下、停药2周以上复诊时,采用液体培养法、PCR法、SAT法检测UU,记录3种方法的结果报告时间;以液体培养法为标准,计算PCR法、SAT法的灵敏度、特异度、假阳性率,用配对设计四格表资料卡方检验(McNemar)比较PCR和SAT 2种检测方法与液体培养法检测UU的阳性率,绘制受试者工作曲线并计算出曲线下面积(area under curve,AUC)以评估PCR法与SAT法的检测效果差异。结果除去样本保存和运输时间,从样本接收到报告结果,液体培养法耗时约45 h,PCR法耗时约11 h,SAT法耗时约6 h。治疗后随访4周,停药2周及以下时,PCR法检测UU的灵敏度为87.5%(7/8),特异度为38.5%(5/13),假阳性率61.5%(8/13),AUC为0.630(95%CI:0.386~0.873),与液体培养法的结果比较,差异有统计学意义(χ^(2)=4.00,P=0.039);SAT法的检测灵敏度为87.5%(7/8),特异度为84.6%(11/13),假阳性率为15.4%(2/13),AUC为0.861(95%CI:0.682~1.000),与液体培养法的结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.000,P=1.000)。治疗前筛查和停药2周以上时,PCR和SAT检测UU的结果与液体培养法的结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与PCR相比,SAT报告时间短,复查时假阳性率更低,因此SAT兼顾快速和准确,更适合治疗后停药时间≤2周的患者复查。 展开更多
关键词 解脲支原体 液体培养法 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 聚合酶链反应 实时评估
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花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立 被引量：1
8
作者 马艳平 覃宝田 +4 位作者 梁曦 王刚 郝乐 周东来 刘振兴 《广东农业科学》 CAS 2024年第3期148-156,共9页
【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方... 【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO_(4)、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应温度为62℃,最佳反应时间为45 min。扩增产物经凝胶电泳检测呈梯形条带,带有探针的反应产物采用一次性核酸试纸条检测装置进行检测,在3~5 min内即可通过是否出现特征性条带而使反应结果可视化。该方法可特异性地检测出LMIV,不与其他水生常见病毒和常见细菌发生交叉反应。使用LMIV-CPA方法和常规PCR方法共同检测156份临床样品,LMIV-CPA的阳性检出率为93.30%,常规PCR方法的阳性检出率为85.83%;在比较二者的灵敏度差异时,LMIV-CPA的检测限为102 copies/μL,灵敏度为常规PCR的10倍,综合结果显示LMIV-CPA优于PCR。【结论】LMIV-CPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于LMIV的现场快速检测,为花鲈LMIV的准确快速诊断和有效防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 花鲈虹彩病毒 交叉引物恒温扩增 特异性 灵敏度 核酸试纸条 可视化
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交叉引物恒温扩增技术快速检测副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因 被引量：5
9
作者 黄世旺 卢亦愚 +3 位作者 李剑 徐昌平 方叶珍 蒋雪凤 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第13期1906-1908,1953,共4页
目的建立一种特异、灵敏、简便的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术,快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)耐热直接溶血素基因(tdh)。方法根据Gen Bank上公布的VP tdh基因序列,在其保守区域设计CPA... 目的建立一种特异、灵敏、简便的交叉引物恒温扩增(cross priming amplification,CPA)技术,快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)耐热直接溶血素基因(tdh)。方法根据Gen Bank上公布的VP tdh基因序列,在其保守区域设计CPA引物和探针,并对反应体系和反应条件进行优化,同时验证方法的灵敏度和特异性。结果本方法对tdh基因检测具有高度特异性;对tdh阳性质粒DNA和菌液检测的灵敏度分别达到了1.8×101copy/μl和6.2×103cfu/ml;对82份临床标本的检测阳性率与荧光PCR法相同,大大高于传统培养法。结论本研究建立的CPA法快速、简便、灵敏、特异,适用于VP腹泻患者的床边诊断以及食物中毒的现场快速检验中。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 交叉引物恒温扩增 tdh基因
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交叉引物恒温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌 被引量：6
10
作者 陈欢 黄世旺 +2 位作者 徐昌平 沈伟伟 毛争争 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第11期1303-1305,1308,共4页
目的建立一种快速、特异、灵敏的交叉引物恒温扩增(crossing priming amplification,CPA)技术检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶基因(nuc)。方法从GenBank上下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计... 目的建立一种快速、特异、灵敏的交叉引物恒温扩增(crossing priming amplification,CPA)技术检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶基因(nuc)。方法从GenBank上下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计CPA引物及探针,建立CPA恒温扩增快速检测技术,并对反应条件进行优化,同时验证方法的特异性和敏感性。结果本方法对金黄色葡萄球菌检测具有高度特异性,对构建的阳性质粒DNA灵敏度达到1.0×10^1 copy/μl,对12份临床标本的检测阳性率与荧光PCR法相同,同时CPA法实验过程操作简便、反应迅速,且无需使用昂贵仪器,最快可在40 min内出检测结果。结论本研究建立的CPA法快速、简便、灵敏、特异,适用于金黄色葡萄球菌核酸快速检测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 交叉引物恒温扩增 nuc基因
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交叉引物恒温扩增技术在结核病中的诊断价值及其影响因素
11
作者 余黄 林翀 +5 位作者 欧阳范献 陈灼霖 陈林 陈小娟 许玉妮 陈少文 《中国热带医学》 CAS 2023年第3期240-245,共6页
目的分析交叉引物恒温扩增技术(cross-primer isothermal amplification technology,CPA)在临床筛查、诊断结核病中的价值及其影响因素。方法收集2018年1月1日—2021年12月31日在海南医学院第二附属医院的住院患者543例,其中结核患者17... 目的分析交叉引物恒温扩增技术(cross-primer isothermal amplification technology,CPA)在临床筛查、诊断结核病中的价值及其影响因素。方法收集2018年1月1日—2021年12月31日在海南医学院第二附属医院的住院患者543例,其中结核患者179例、肺炎患者187例,其他疾病患者177例。对患者的痰液、肺泡灌洗液、胸水和中段尿等进行CPA检测、涂片镜检、培养法和基因检测,评估CPA检测对结核病诊断的价值及其影响因素分析,统计学分析采用SPSS 26.0进行。结果CPA检测总阳性率为14.4%(78/543),其中痰液标本阳性率29.1%(39/134),在78例CPA检测阳性病人的分布中,结核组占首位69.2%(54/78),其次为肺炎组21.8%(17/78),其他疾病组占最低位9.0%(7/78);以CPA检测为参照方法,涂片镜检“灵敏度”低于基因检测和培养法,而“特异度”高于培养法和基因检测,涂片镜检“漏诊率”高于基因检测和培养法;CPA检测阳性与性别、血沉和肺炎均有关;CPA检测与培养法和基因检测具有较好的一致性(Kappa>0.9),CPA检测与涂片镜检也具有中等程度的一致性(Kappa=0.616)。结论痰标本是CPA检测的最佳首选对象,而胸水检测的价值相对有限,筛查和诊断“结核组与其他疾病组”时可选用痰液、肺泡灌洗液和中段尿等作为CPA检测的临床标本,而筛查和诊断“结核组与肺炎组”时可选用痰液;性别、血沉和肺炎是CPA阳性患者的影响因素,因此,CPA检测值得在临床推广,但需要更多的临床研究数据。 展开更多
关键词 交叉引物恒温扩增技术 结核 诊断价值
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交叉引物恒温扩增法检测甲型H1N1流感病毒及临床应用 被引量：10
12
作者 白志军 胡林 +4 位作者 李魁彪 钟华燕 陈艺韵 鲁恩洁 狄飚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期208-211,215,共5页
目的建立交叉引物恒温扩增（Cross Priming Amplification,CPA）技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,... 目的建立交叉引物恒温扩增（Cross Priming Amplification,CPA）技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,该扩增产物可通过全封闭式核酸检测装置进行检测。14份健康人咽拭子标本、7个其他呼吸道病毒和6个虫媒病毒株被用来检测CPA反应的特异性;已知病毒滴度的甲型H1N1毒株进行对照梯度稀释,以测试CPA的敏感性;102份甲型H1N1临床咽拭子标本为检测对象,评估其临床的检测的可行性。结果 CPA反应未出现对健康样本以及其他病毒产生交叉反应;对已知滴度的病毒进行梯度稀释检测,证明CPA的敏感性为10拷贝/μL。对甲型H1N1流感临床病例发病1~3d临床标本新建检测方法的检出率为100%,4~6d临床标本检出率为79.31%,≥7d临床标本检出率为9.09%。讨论CPA具有较高的敏感性、特异性,对设备要求低,适合基层医疗单位对甲型H1N1流感发病早期诊断使用。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 交叉引物恒温扩增技术 临床应用
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RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值 被引量：1
13
作者 杜云 胡次浪 +4 位作者 朱晓华 张帆 吴爱民 曾祥妮 李岚 《实用临床医学（江西）》 CAS 2024年第3期64-68,80,共6页
目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝... 目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。 展开更多
关键词 肺炎支原体 肺炎 儿童 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 诊断
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非洲马瘟病毒和西尼罗病毒多酶恒温核酸快速扩增检测方法的建立
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作者 钱佳豪 刘丹 +7 位作者 周师众 张博源 高建帅 许霄峰 李慧彤 丁家波 王春凤 沈青春 《动物医学进展》 北大核心 2025年第3期12-16,共5页
为了建立一种方便快捷的非洲马瘟病毒(AHSV)和西尼罗病毒(WNV)的检测方法,将GenBank中非洲马瘟病毒VP7序列以及近3年世界范围内流行的西尼罗病毒序列进行比对,选择保守区域,并按照需求设计引物与探针。通过反应条件的优化,以及特异性与... 为了建立一种方便快捷的非洲马瘟病毒(AHSV)和西尼罗病毒(WNV)的检测方法,将GenBank中非洲马瘟病毒VP7序列以及近3年世界范围内流行的西尼罗病毒序列进行比对,选择保守区域,并按照需求设计引物与探针。通过反应条件的优化,以及特异性与敏感性试验,建立了一种能够同时检测非洲马瘟病毒和西尼罗病毒的多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)方法。结果表明该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,反应时间仅需20 min。该检测方法可应用于非洲马瘟和西尼罗热的快速诊断和现场监测,为疫情控制和流行病学研究提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲马瘟病毒 西尼罗热病毒 多酶恒温快速扩增技术
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基于多交叉置换扩增和纳米生物传感技术快速检测肺炎支原体方法的建立
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作者 肖飞 郑宝英 +8 位作者 徐文健 伏瑾 黄小兰 孙春荣 贾楠 张裕 许峥 周娟 王毅 《遵义医科大学学报》 2024年第5期513-521,共9页
目的建立一种简单、灵敏、快速的肺炎支原体(MP)检测方法,并对其应用性进行验证和评价。方法利用多交叉置换扩增(MCDA)技术对肺炎支原体特异基因CARDS毒素基因进行扩增,利用侧流免疫层析生物传感(LFB)技术读取扩增结果,命名该方法为MP-M... 目的建立一种简单、灵敏、快速的肺炎支原体(MP)检测方法,并对其应用性进行验证和评价。方法利用多交叉置换扩增(MCDA)技术对肺炎支原体特异基因CARDS毒素基因进行扩增,利用侧流免疫层析生物传感(LFB)技术读取扩增结果,命名该方法为MP-MCDA-LFB。分析扩增反应在60~67℃(间隔1℃)的扩增效率,筛选最适反应温度;分析分别扩增10、20、30、40 min时能够检测到的最低核酸浓度,筛选最佳反应时间。利用10倍系列稀释的肺炎支原体核酸分析MP-MCDA-LFB方法的灵敏度和检测限,利用35株非肺炎支原体菌株分析MP-MCDA-LFB方法的特异性。利用MP-MCDA-LFB方法检测80份疑似MP感染的临床样本,并与RT-PCR法检测结果进行比较,分析MP-MCDA-LFB方法的临床应用性。结果MP-MCDA-LFB能够实现对肺炎支原体CARDS毒素基因的快速检测。其最佳反应温度为63℃,最短反应时间为40 min,整个检测过程可在1 h内。MP-MCDA-LFB方法具有较高的灵敏度和特异性,其检测限低至45 ng/L,与其他临床表现相似的病原体无交叉反应,特异性为100%。MP-MCDA-LFB方法从80份临床样本中检出45份阳性样本(56.3%),检出率与RT-PCR方法一致。结论本研究建立的以CARDS毒素基因为靶标的MP-MCDA-LFB检测方法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优点,在基层医疗机构和现场检测具有较好的应用潜力。 展开更多
关键词 肺炎支原体 多交叉置换扩增技术 侧流免疫层析生物传感技术 CARDS毒素基因 RT-PCR
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黄瓜细菌性角斑病菌交叉引物恒温扩增检测技术 被引量：3
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作者 霍亚云 张永江 +4 位作者 李为民 朱罗罗 胡林 尤其敏 赵文军 《植物检疫》 北大核心 2017年第5期44-47,共4页
黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae pv.lachrymans。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.5... 黄瓜细菌性角斑病是我国黄瓜生产上的重要病害之一,其病原菌为Pseudomonas syringae pv.lachrymans。根据该病原菌甘油醛-3-磷酸脱氢基因保守序列设计引物和探针,建立了交叉引物恒温扩增和核酸试纸条检测技术。菌体DNA检测灵敏度可达0.55 ng,纯菌直接检测灵敏度基本可达到单个细菌。所测试的5株黄瓜细菌性角斑病菌和染病黄瓜叶片均为阳性,其他13株对照菌株均为阴性。该方法灵敏度高,且操作简单,对设备要求低等,适合基层实验室应用。 展开更多
关键词 黄瓜细菌性角斑病菌 交叉引物恒温扩增 核酸试纸条 检测
原文传递
交叉引物法恒温扩增技术在结核病诊断中的应用价值分析 被引量：3
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作者 王超 徐东芳 王庆 《黑龙江医药》 CAS 2019年第6期1458-1460,共3页
目的:探讨在目前的结核病诊断中,交叉引物恒温扩增技术(CPA)的临床应用价值。方法:选取我院接诊疑为肺结核病的初诊患者256例,收集研究对象4份痰标本,分别采用罗氏培养、痰涂片萋尼氏抗酸染色法、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和CP... 目的:探讨在目前的结核病诊断中,交叉引物恒温扩增技术(CPA)的临床应用价值。方法:选取我院接诊疑为肺结核病的初诊患者256例,收集研究对象4份痰标本,分别采用罗氏培养、痰涂片萋尼氏抗酸染色法、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和CPA进行检测,评价各项指标检测阳性率,并以罗氏培养法为标准,判断其灵敏度、特异性。结果:罗氏培养法阳性检出率为40.23%、痰涂片法阳性检出率为27.34%、RT-PCR法阳性检出率为37.89%、TB-CPA法阳性检出率为38.67%。痰涂片法灵敏度为35.29%,特异度为77.92%;RT-PCR法灵敏度为80.39%,特异度为90.26%;TB-CPA法灵敏度为81.55%,特异度为90.20%。结论:CPA在结核病诊断中不仅具有较高准确性,同时操作简单方便,检测时间短,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 结核病 交叉引物扩增技术 恒温扩增技术 诊断
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交叉引物等温扩增技术检测志贺氏菌 被引量：17
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作者 祁军 张霞 +3 位作者 蒋刚强 蔡国瑞 董亚学 郑文杰 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第11期65-67,76,共4页
建立一种新型志贺氏菌简洁快速检测方法——交叉引物恒温扩增检测方法。针对志贺氏菌的四个血清型设计保守的特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法并应用免疫金标试纸条进行检测。用6株志贺氏菌,32株近源菌进行特异性试验;通过纯菌... 建立一种新型志贺氏菌简洁快速检测方法——交叉引物恒温扩增检测方法。针对志贺氏菌的四个血清型设计保守的特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法并应用免疫金标试纸条进行检测。用6株志贺氏菌,32株近源菌进行特异性试验;通过纯菌液计数、干扰菌试验检测进行灵敏度验证。建立方法具有较好的特异性,增菌液及干扰菌检测灵敏度均为103cfu/mL。建立的交叉引物恒温检测方法灵敏度高,可满足对志贺氏菌进行现场快速筛查目的。 展开更多
关键词 志贺氏菌 交叉引物 等温扩增技术
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交叉引物等温扩增技术检测沙门氏菌 被引量：4
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作者 祁军 左峰 +3 位作者 刘国红 刘红梅 徐高连 张霞 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第2期67-70,共4页
建立一种新型沙门氏菌快速筛选检测方法--交叉引物恒温扩增检测方法。针对沙门氏菌设计特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法进行检测。用19株沙门氏菌,35株近源菌进行特异性试验;通过定量DNA、纯菌液计数检测进行灵敏度验证。建立... 建立一种新型沙门氏菌快速筛选检测方法--交叉引物恒温扩增检测方法。针对沙门氏菌设计特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法进行检测。用19株沙门氏菌,35株近源菌进行特异性试验;通过定量DNA、纯菌液计数检测进行灵敏度验证。建立方法具有很好的特异性;增菌液检测灵敏度为102cfu/mL,DNA检测灵敏度为101fg/test。建立的交叉引物恒温检测方法特异性好、灵敏度高,不需要复杂仪器,对口岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。 展开更多
关键词 沙门氏菌 交叉引物 等温扩增技术
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交叉引物扩增技术快速检测结核分枝杆菌 被引量：6
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作者 周静宇 徐生梅 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期22-22,共1页
关键词 结核分枝杆菌 交叉引物扩增 抗酸染色 蛋白质芯片 抗体
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