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人干扰素α2b-胸腺肽α1融合基因在家蚕细胞中的表达和活性研究 被引量：4
1
作者 郭冬生 朱成钢 +1 位作者 张耀洲 吴祥甫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期803-807,共5页
根据细胞因子协同作用的特点,采用重组DNA技术构建了人干扰素(IFN)α2b 胸腺肽(THY)α1融合基因,克隆到pBacPAK8上,获得重组转移载体pBacPAK IFN THY.与线形化Bm BacPAK6病毒基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒Bm Bac... 根据细胞因子协同作用的特点,采用重组DNA技术构建了人干扰素(IFN)α2b 胸腺肽(THY)α1融合基因,克隆到pBacPAK8上,获得重组转移载体pBacPAK IFN THY.与线形化Bm BacPAK6病毒基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒Bm BacPAK IFN THY.将Bm BacPAK IFN THY感染家蚕细胞进行表达.DNA印迹证明IFN THY已插入Bm BacPAK6中(4kb左右的杂交带);SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白质印迹证明IFN THY在家蚕细胞中得到了表达(分子质量为 2 3ku左右),且具有IFN蛋白的免疫原性;微量细胞病变抑制法和玫瑰花结法显示 96h的表达产物IFN活性为 3 72× 10 4U/ml,12 0h表达产物IFN活性为 3 10× 10 5U/ml,4 8～ 72h表达产物IFN活性较低;4 8～ 12 0h表达产物的玫瑰花结形成率均在 10 %以上.结果表明融合基因在家蚕细胞中得到了高效表达,表达的融合蛋白具有IFN α2b和THY 展开更多
关键词 人干扰素α2b-胸腺肽α1融合基因 家蚕细胞 活性 家蚕核型多角体病毒 基因表达
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胸腺素α1/干扰素α-2b融合基因表达载体的构建与表达 被引量：1
2
作者 王景林 侯世勇 康琳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第3期242-244,共3页
通过PCR人工合成模板的方法获得牛Tα1基因,与含IFNα-2b基因的pAG-IFN重组质粒,构建Tα1/IFNα-2b融合基因重组质粒pUC18-Tα1/IFN,经序列分析证实,融合基因Tα1和IFNα-2b与GenBank登录基因的序列一致性分别为100%和98.5%,仅IFNα-2b... 通过PCR人工合成模板的方法获得牛Tα1基因,与含IFNα-2b基因的pAG-IFN重组质粒,构建Tα1/IFNα-2b融合基因重组质粒pUC18-Tα1/IFN,经序列分析证实,融合基因Tα1和IFNα-2b与GenBank登录基因的序列一致性分别为100%和98.5%,仅IFNα-2b有两处碱基发生无义突变.再将融合基因亚克隆入pBV220,构建融合表达载体pBV220-Tα1/IFN,转化到E.coliM15经IPTG诱导,实现了Tα1-IFNα-2b融合蛋白的高表达,约占菌体总蛋白的24.5%,为包涵体形式.这为研制Tα1-IFNα-2b双重活性的融合蛋白奠定了基础. 展开更多
关键词 胸腺素a1 干扰素A-2B 融合基因 表达
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重组人干扰素α2a和GFE-1多肽融合基因的克隆、表达及活性测定
3
作者 谷仲平 朱以芳 +2 位作者 张涛 周勇安 杨晔 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第11期1550-1554,共5页
目的:构建IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因表达载体,获得高质量生物产品。方法:应用聚合酶链式反应技术(PCR)对干扰素(IFN)α2a3'端酶切位点进行改造,人工合成编码能特异性高效结合肺组织的GFE-1寡核苷酸片段,二者连接后克隆入pGEM3Zf质... 目的:构建IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因表达载体,获得高质量生物产品。方法:应用聚合酶链式反应技术(PCR)对干扰素(IFN)α2a3'端酶切位点进行改造,人工合成编码能特异性高效结合肺组织的GFE-1寡核苷酸片段,二者连接后克隆入pGEM3Zf质粒,进行序列分析,将融合蛋白基因克隆入pBV220表达载体,在大肠杆菌中表达,对IFN-α2a-GFE-1表达产物纯化、鉴定及体外活性检测。结果:利用PCR的方法成功地改造了IFN-α2a3'端酶切位点,成功的将GFE-1多肽与IFN-α2a3'端连接,构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白的基因克隆载体pGEM3Zf-GFE-1,DNA测序完全正确。构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因原核表达载体pBV220-IFN-α2a-GFE-1,经温度诱导在大肠杆菌中有效表达。纯化了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯度大95%,比活性达5.8×109U/mg。结论:IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因的成功克隆、表达、纯化和活性测定,为研制一种具有导向性治疗肺癌、肺纤维化等疾病的有效药品奠定基础。 展开更多
关键词 干扰素α2A GFE-1多肽 融合蛋白基因 克隆 表达
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IFN-α2a-GFE-1融合基因的构建及表达 被引量：1
4
作者 张小军 杨玉岭 张英起 《武警医学》 CAS 2003年第8期460-463,共4页
目的　　构建IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体 ,检测其在转染细胞的表达 ,为肺癌基因导向药物治疗积累实验资料。方法　应用聚合酶链式反应技术 (PCR)对干扰素 (IFN) -α 2a羧基端的酶切位点进行改造 ,并人工合成肺特异性结合多肽CGFEC... 目的　　构建IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体 ,检测其在转染细胞的表达 ,为肺癌基因导向药物治疗积累实验资料。方法　应用聚合酶链式反应技术 (PCR)对干扰素 (IFN) -α 2a羧基端的酶切位点进行改造 ,并人工合成肺特异性结合多肽CGFECVRQCPERC(GFE - 1)的寡核苷酸片段 ,二者连接后克隆入pGEM - 3zf质粒 ,连接产物转化感受态DH5α细胞 ,挑选阳性克隆经EcoRⅠ +PstⅠ酶切鉴定后测序 ,将测序正确的目的基因从测序载体相应酶切位点消化回收并纯化后 ,与上述酶处理过的PBV2 2 0质粒连接 ,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,经筛选后随机挑选阳性菌落 ,提取质粒酶切鉴定。结果　序列分析表明合成片段成功的插入IFN -α 2a羧基端 ,大小、位置、方向均正确无误 ;融合基因克隆入PBV 2 2 0表达载体在大肠杆菌中获得有效表达。结论　IFN -α 2a -GFE - 1融合基因载体的构建及表达 。 展开更多
关键词 IFN-α2a-GFE-1 融合基因 干扰素-A 2a 肺特异性结合多肽 肺癌 基因治疗
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