采用miR-148a低表达人绒毛膜滋养细胞构建的子痫前期模型细胞活力、焦亡、炎性和氧化应激反应观察

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作者 郭艳萍 栾媛媛 +1 位作者 周巾 蒋天从 《山东医药》 CAS 2024年第18期1-5,共5页

目的观察采用微小RNA-148a(miR-148a)低表达人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo构建的子痫前期(Preeclampsia,PE)模型细胞的细胞活力、焦亡、炎症和氧化应激反应。方法取对数生长期人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo,分为甲、乙、丙、丁组:甲... 目的观察采用微小RNA-148a(miR-148a)低表达人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo构建的子痫前期(Preeclampsia,PE)模型细胞的细胞活力、焦亡、炎症和氧化应激反应。方法取对数生长期人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo,分为甲、乙、丙、丁组:甲组细胞用抑制miR-148a表达的miR-148a inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h(建立PE模型);乙组细胞用空白对照NC-inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h;丙组加入100 ng/L的LPS培养24 h;丁组不做任何处理。培养48 h时,采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-148a,采用CCK8法检测各组细胞活力,采用TUNEL法测算各组细胞焦亡率,采用Western Blotting法检测各组细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD,采用ELISA法检测各组上清液炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6]及氧化应激指标[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]。结果与丁组相比,丙组细胞miR-148a相对表达量高,培养24、48、72 h时OD值低,细胞焦亡率高,细胞Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞miR-148a相对表达量低,培养24、48、72 h时OD值高,细胞焦亡率低,细胞Caspase-1、GSDMD和NLRP3蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与丁组相比,丙组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平高,细胞GSH和SOD表达降低、MDA表达升高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平低,细胞GSH和SOD表达升高、MDA表达降低(P均<0.05)。结论miR-148a低表达HTR-8/SVneo细胞构建的PE模型细胞活力高,细胞焦亡程度、炎性反应及氧化应激反应低。miR-148a可能是PE的治疗靶点之一。 展开更多

关键词 微小RNA 微小RNA-148a 子痫前期 人绒毛膜滋养细胞 细胞活力 细胞焦亡 炎性反应 氧化应激

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HBV阳性血清体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的研究

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作者 白桂芹 付逢萍 +1 位作者 唐瑶 卫萌 《中国妇幼健康研究》 2011年第6期740-742,共3页

目的 建立乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的模型,探讨HBV宫内感染的可能危险因素.方法 对人绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将不同复制水平的HBV阳性血清与传代培养的JEG-3细胞在无人为干... 目的 建立乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）体外感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3的模型,探讨HBV宫内感染的可能危险因素.方法 对人绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将不同复制水平的HBV阳性血清与传代培养的JEG-3细胞在无人为干扰因素下共同孵育48~72小时,实时荧光定量PCR方法检测细胞内HBV-DNA的复制水平.结果 在无人为干扰因素下,HBV阳性血清体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,正常人血清细胞中未能检测出HBV-DNA;低、中危组细胞内也未检测出HBV-DNA;高危组复制水平为4.56×103U/mL,极高危组复制水平为2.72×104U/mL,随着HBV阳性血清复制水平的提高,JEG-3细胞内HBV复制水平有升高的趋势.结论 HBV体外可感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3,HBV高复制水平可能是其宫内感染的独立危险因素之一. 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 体外感染 人绒毛膜滋养细胞株JEG-3 HBVDNA

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miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭、EMT的影响及其分子机制 被引量：1

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作者 郝媛媛 徐曼 安泓润 《山东医药》 CAS 2021年第35期31-34,共4页

目的探讨miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭及上皮—间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo分为过表达组、沉默组及对照组,应用脂质体转染法分别转染miR-200c模拟物(miR-200c mimics)、mi... 目的探讨miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭及上皮—间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo分为过表达组、沉默组及对照组,应用脂质体转染法分别转染miR-200c模拟物(miR-200c mimics)、miR-200c抑制物(miR-200c inhibitor)、miRNA阴性对照(miR-NC)。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-200c表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察各组细胞迁移和侵袭能力(分别以细胞迁移率和侵袭细胞数表示),Westernblotting法检测各组细胞中EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Fibro⁃nectin)和Notch1蛋白相对表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c与Notch1的靶向关系。结果过表达组、对照组和沉默组细胞miR-200c相对表达量依次降低,细胞迁移率和侵袭细胞数依次升高,组间两两比较P均<0.05。过表达组、对照组、沉默组E-cadherin蛋白相对表达量依次降低,N-cadherin、Fibronectin和Notch1蛋白相对表达量依次升高,组间两两比较P均<0.05。转染Notch1-WT(野生型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为0.31±0.09,转染Notch1-WT和miR-NC的细胞为0.99±0.03(P<0.05);转染Notch1-MUT(突变型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为1.00±0.05,转染Notch1-MUT和miR-NC的细胞为1.02±0.04(P>0.05)。结论miR-200c能够抑制人绒毛膜滋养细胞的迁移、侵袭及EMT,其机制可能与靶向调控Notch1有关。 展开更多

关键词 人绒毛膜滋养细胞 MIR-200C NOTCH1 细胞迁移 细胞侵袭 上皮—间质转化

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丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响

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作者 于喜乐 卫爱武 +2 位作者 石少琦 崔天薇 宋红艳 《华中科技大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期45-51,共7页

目的探讨丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响。方法将HTR-8/Svneo分为对照组、丹寿汤低(丹寿汤-L,100μmol/mL)、中(丹寿汤-M,150μmol/mL)、高剂量(丹寿汤-H,200μmol/mL)组、mTOR通路激活... 目的探讨丹寿汤调控mTOR/S6K通路对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬及增殖、凋亡的影响。方法将HTR-8/Svneo分为对照组、丹寿汤低(丹寿汤-L,100μmol/mL)、中(丹寿汤-M,150μmol/mL)、高剂量(丹寿汤-H,200μmol/mL)组、mTOR通路激活剂MHY1485(100 nmol/mL)组、丹寿汤-H+MHY1485组,处理24 h后,检测细胞增殖、凋亡、侵袭与迁移,观察自噬小体变化,检测LC3、p62、Beclin1 mRNA表达及mTOR/S6K通路相关蛋白的表达。结果与对照组相比,不同剂量的丹寿汤组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著降低,凋亡率、p62 mRNA表达增加,组间差异有统计学意义,但MHY1485组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著增加,凋亡率、p62 mRNA表达降低(均P<0.05);与丹寿汤-H组相比,丹寿汤-H+MHY1485组增殖率、侵袭、迁移率、自噬小体/细胞质总面积、LC3、Beclin1 mRNA、p-mTOR/mTOR、S6K蛋白表达显著增加,凋亡率、p62 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论丹寿汤调控mTOR/S6K通路抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo自噬、增殖,诱导其凋亡。 展开更多

关键词 丹寿汤 mTOR/S6K通路 人绒毛膜滋养层细胞 自噬

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单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

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作者 张云怡 张政 +3 位作者 张俊彦 陈鸿鹄 占利 陈建才 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期628-635,共8页

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8... 目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo 蛋白质组 TMT蛋白质组学技术

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黄芪甲苷对高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响

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作者 叶文慧 肖海侠 蔡双明 《广州中医药大学学报》 CAS 2024年第1期178-184,共7页

【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组:对照组(未处理)、高糖组(高糖刺激)及黄芪甲苷50、100μmol/L组(高糖刺激+黄芪甲苷)。采用细胞计数试剂盒8(... 【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo)焦亡及侵袭迁移的影响。【方法】将HTR-8/SVneo细胞分为4组:对照组(未处理)、高糖组(高糖刺激)及黄芪甲苷50、100μmol/L组(高糖刺激+黄芪甲苷)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,分别采用Transwell实验和划痕实验测定细胞侵袭、迁移能力,Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光染色评估细胞焦亡情况,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶剪切体(cleaved-Caspase-1)、消皮素D-N端(GSDMD-NT)、白细胞介素18(IL-18)蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞活力显著降低,细胞迁移率显著降低,侵袭细胞数显著减少,PI阳性细胞比例显著增加,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与高糖组比较,黄芪甲苷处理组细胞活力显著升高,细胞迁移率显著增加,侵袭细胞数显著增加,PI阳性细胞比例显著下降,NLRP3、cleaved-Caspase-1、GSDMD-NT、IL-18蛋白表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的HTR-8/SVneo细胞焦亡,改善细胞侵袭及迁移能力。 展开更多

关键词 黄芪甲苷 妊娠期糖尿病 细胞焦亡 细胞侵袭 细胞迁移 人绒毛膜滋养层细胞

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人绒毛膜滋养层细胞的体外培养 被引量：3

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作者 韩丽英 苑春莉 +2 位作者 黄冰玉 胡静 李荷莲 《中国实验诊断学》 2003年第6期516-518,共3页

目的　培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法　胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织 ,进行原代培养 ,胰蛋白酶消化法传代培养 ,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果　原代培养滋养层细胞 3h后开始贴壁 ,18h后全部贴壁 ,3天可传... 目的　培养符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞。方法　胰蛋白酶、胶原酶消化绒毛组织 ,进行原代培养 ,胰蛋白酶消化法传代培养 ,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果　原代培养滋养层细胞 3h后开始贴壁 ,18h后全部贴壁 ,3天可传代 ,角蛋白、波形蛋白染色细胞纯度达 95 %以上。结论　胰蛋白酶、胶原酶消化法简便易行 ,可获得符合实验要求的人绒毛膜滋养层细胞 ,建立了稳定的人类绒毛膜滋养层细胞体外培养体系。 展开更多

关键词 人绒毛膜滋养层细胞 体外培养 细胞培养 胰蛋白酶 胶原酶

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miR-130b-5p下调胰岛素样生长因子-1抑制人绒毛膜滋养层细胞迁移及侵袭的作用及机制 被引量：1

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作者 相萌 张旭东 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期539-547,共9页

【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和m... 【目的】探究微小RNA 130b-5p(miR-130b-5p)靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)迁移及侵袭的影响。【方法】将HTR8/SVneo细胞分为对照组、miR-NC组、miR-130b-5pmimics组、miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1组和miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组,双荧光素酶报告基因检测miR-130b-5p和IGF-1的靶向关系;采用实时荧光定量PCR检测HTR8/SVneo细胞样本中miR-130b-5p及IGF-1表达水平;采用CCK-8法检测HTR8/SVneo细胞增殖情况;采用全息细胞仪及Transwell法分析HTR8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western blot法检测HTR8/SVneo细胞样本中IGF-1及侵袭、上皮间充质转化(EMT)蛋白表达情况。【结果】双荧光素酶报告基因结果显示,IGF-1是miR-130b-5p的潜在靶基因;相较于miR-NC组,miR-130b-5pmimics组中miR-130b-5p表达水平、细胞增殖抑制率、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,IGF-1、c-Myc、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平显著降低(P<0.05);相较于miR-130b-5pmimics+pcD⁃NA3.1组,miR-130b-5pmimics+pcDNA3.1-IGF-1组中细胞增殖抑制率、E-cadherin表达水平显著降低,c-Myc、Cy⁃clinD1表达水平、迁移距离、侵袭细胞数、MMP9、MMP2、Vimentin和N-cadherin表达水平显著增加(P<0.05)。【结论】miR-130b-5p过表达可能通过抑制IGF-1表达来抑制HTR8/SVneo细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 人绒毛膜滋养层细胞 胰岛素样生长因子-1 微小RNA 130b-5p 迁移 侵袭

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高糖环境下PLGF基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞增殖、迁移及侵袭及Nrf2/HO-1信号通路的影响

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作者 束晓明 陈晓琴 邵雯 《中国医药导报》 CAS 2023年第28期26-29,共4页

目的探究高糖环境下胎盘生长因子(PLGF)基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞(EVCT)的影响。方法体外培养HTR-8/SVneo细胞,将细胞分为对照组(不做处理)、空载组(空载质粒转染)及PLGF沉默组(PLGF双切口酶质粒转染)。CCK-8法、划痕实验及Transwel... 目的探究高糖环境下胎盘生长因子(PLGF)基因沉默对人绒毛膜外滋养细胞(EVCT)的影响。方法体外培养HTR-8/SVneo细胞,将细胞分为对照组(不做处理)、空载组(空载质粒转染)及PLGF沉默组(PLGF双切口酶质粒转染)。CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭能力;q RT-PCR及Western blot检测各组细胞PLGF、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA及蛋白表达情况。结果对照组与空载组细胞增殖抑制率、划痕愈合率、侵袭细胞数比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组细胞增殖抑制率升高,划痕愈合率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。对照组与空载组PLGF、Nrf2及HO-1 m RNA及蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,PLGF沉默组PLGF、Nrf2及HO-1m RNA及蛋白表达量降低(P<0.05)。结论高糖环境下PLGF基因沉默能够抑制EVCT增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与抑制Nrf2/HO-1信号通路活性有关。 展开更多

关键词 胎盘生长因子 人绒毛膜外滋养细胞 核转录因子红系2相关因子2 血红素氧合酶1

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分散人绒毛膜滋养层细胞及细胞培养

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作者 张春 柏艳红 周丽 《中国优生与遗传杂志》 2004年第5期71-71,75,共2页

目的　获取人绒毛膜滋养层细胞。方法　应用胰酶 /DNA酶法进行消化后进行培养。经光镜和电镜观察。结果　我们获取了人绒毛滋养层细胞并成功培养。结论　取人妊娠 4 5～ 5 5D刮宫术后的绒毛组织 ,经胰酶。

关键词 人绒毛膜滋养层细胞 DNA酶 细胞培养 胰酶 刮宫术 绒毛组织 光镜

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B细胞淋巴瘤6对HTR-8/SVneo滋养细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

11

作者 杨丽 杨静 +2 位作者 叶尔登切切克 韩锐 腊晓琳 《国际妇产科学杂志》 CAS 2024年第6期659-663,668,共6页

目的:探讨B细胞淋巴瘤6(B cell lymphoma 6,BCL6)基因过表达对人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响。方法:利用慢病毒介导的过表达LV5-BCL6(OE-BCL6)技术构建BCL6过表达的HTR-8/SVneo细胞系,同时设阴性对照组(OE-N... 目的:探讨B细胞淋巴瘤6(B cell lymphoma 6,BCL6)基因过表达对人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响。方法:利用慢病毒介导的过表达LV5-BCL6(OE-BCL6)技术构建BCL6过表达的HTR-8/SVneo细胞系,同时设阴性对照组(OE-NC),并采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)检测BCL6的mRNA和蛋白表达水平。随后进行CCK8法、流式细胞术、Transwell实验以及Transwell小室侵袭实验,对比2组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的能力。结果:荧光显微镜观察结果显示,OE-BCL6组和OE-NC组HTR-8/SVneo细胞的慢病毒转染后细胞生长状态良好,感染效率都达到了70%以上,慢病毒转染成功。mRNA水平检测显示,OE-BCL6组中BCL6表达高于OE-NC组(P<0.001)。蛋白水平检测显示,OE-BCL6组中BCL6表达高于OE-NC组(P<0.001)。转染48 h和72 h后,OEBCL6组细胞的增殖活性较OE-NC组降低,OE-BCL6组细胞的凋亡率较OE-NC组升高(均P<0.05)。OE-BCL6组细胞侵袭和迁移的细胞数均较OE-NC组降低(均P<0.05)。结论:BCL6基因可抑制HTR-8/SVneo细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡,提示BCL6可能是临床病理妊娠诊疗的一个潜在靶点,但还需进一步研究阐明其分子机制。 展开更多

关键词 BCL6 人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo 细胞增殖 细胞凋亡 侵袭

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METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/AKT信号通路蛋白的调控作用 被引量：1

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作者 吴黄琪 孙萍 +1 位作者 杜鑫 郭伟 《山东医药》 CAS 2023年第14期40-44,共5页

目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,并分析METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择行剖宫产分娩的PE产妇15例、行剖宫产分娩的正常产妇15例。收集PE产妇及正常产妇胎盘... 目的探讨甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,并分析METTL3对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法选择行剖宫产分娩的PE产妇15例、行剖宫产分娩的正常产妇15例。收集PE产妇及正常产妇胎盘组织,采用qRT-PCR法检测METTL3 mRNA表达水平。取人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,分为空白对照组、空载对照组和过表达METTL3组,空白对照组正常培养,空载对照组感染阴性对照慢病毒,过表达METTL3组感染过表达METTL3慢病毒。采用CCK-8法观察三组细胞增殖能力,Tran⁃swell实验观察细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平。结果与正常产妇胎盘组织相比,PE产妇胎盘组织METTL3 mRNA表达水平升高(P均<0.01)。与空白对照组以及空载对照组相比,过表达METTL3组细胞增殖活力降低,细胞迁移数量、细胞侵袭数量减少,细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平降低(P均<0.01)。空白对照组与空载对照组上述指标比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论PE患者胎盘组织中METTL3表达升高;METTL3可能通过调控PI3K/AKT信号通路影响人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与PE的发生发展。 展开更多

关键词 甲基转移酶样蛋白3 人绒毛膜滋养层细胞 PI3K/AKT信号通路 子痫前期

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lncRNA SNHG17靶向miR-525-5p对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

13

作者 叶玉锦 黄丽珊 +1 位作者 黄巧如 吴明秀 《医学分子生物学杂志》 CAS 2022年第6期452-456,463,共6页

目的探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-mi... 目的探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-miR-525-5p及其阴性对照;采用平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-525-5p与SNHG17的靶向关系。结果与正常胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17表达升高,miR-525-5p表达降低(P<0.05)。转染si-SNHG17后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多,划痕愈合率升高(P<0.05)。lncRNA SNHG17靶向调控miR-525-5p;共转染si-SNHG17和anti-miR-525-5p后细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05)。结论沉默lncRNA SNHG17可通过促进miR-525-5p表达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭。 展开更多

关键词 子痫前期 人绒毛膜滋养层细胞 lncRNA SNHG17 miR-525-5p 细胞增殖 迁移 侵袭

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PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 被引量：3

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作者 彭青 温彦静 +2 位作者 李茜 李曼 常美英 《天津医药》 CAS 北大核心 2022年第2期120-124,共5页

目的探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组(阴性对照组)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)-siRNA组(抑制PTEN表达... 目的探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组(阴性对照组)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)-siRNA组(抑制PTEN表达组)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路抑制剂(GDC-0349)组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、PTEN蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)/PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)/AKT、磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与高糖组、NC组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与PTEN-siRNA组比较,GDC-0349组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。 展开更多

关键词 TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 滋养层 细胞凋亡 PTEN磷酸水解酶 磷酸肌醇3-激酶 高糖 人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo

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miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成 被引量：3

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作者 李敏 姜龙环 +3 位作者 张营 朱彤宇 张敏 靖新城 《中国计划生育学杂志》 2023年第3期490-494,499,737,共7页

目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及... 目的:探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法:在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果:与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平下降(P<0.01),细胞Notch1蛋白表达升高(P<0.001),细胞的迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.05)以及细胞的管状形成能力(P<0.01)增强。结论:miR-30c-5p能够通过抑制Notch1的表达降低人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成能力,参与子痫前期的发病。 展开更多

关键词 微小RNAS miR-30c-5p NOTCH1 人绒毛膜滋养层细胞 子痫前期

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miR-34a靶向MMP2对TNF-α诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移及侵袭的影响 被引量：1

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作者 温彦静 彭青 +2 位作者 王静娜 李曼 常美英 《天津医药》 CAS 北大核心 2021年第10期1037-1042,共6页

目的探讨微小RNA(miR)-34a靶向基质金属蛋白酶(MMP)2对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭的影响。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,利用0.5μg/LTNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱... 目的探讨微小RNA(miR)-34a靶向基质金属蛋白酶(MMP)2对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭的影响。方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,利用0.5μg/LTNF-α刺激细胞;将细胞分为对照组、TNF-α诱导组、NC组、miR-34a mimics组、iNC组、miR-34a inhibitor组;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中miR-34a、MMP2 mRNA的表达;CCK-8法、Transwell法和划痕实验分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移情况;蛋白免疫印迹法检测MMP2蛋白的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-34a和MMP2的靶向关系。结果与对照组比较,TNF-α诱导组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低(P<0.05);与TNF-α诱导组和NC组比较,miR-34a mimics组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著降低(P<0.05);与TNF-α诱导组和iNC组比较,miR-34a inhibitor组细胞miR-34a表达水平、细胞增殖抑制率显著降低(P<0.05),MMP2 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率显著升高(P<0.05);miR-34a与MMP2具有靶向关系。结论miR-34a可能通过负调控MMP2的表达抑制TNF-α诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭。 展开更多

关键词 微RNAs 基质金属蛋白酶2 肿瘤坏死因子α 人绒毛膜滋养层细胞 子痫前期 MIR-34A

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PGRN在植入性胎盘组织中的表达及其对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭的影响 被引量：1

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作者 温彦静 彭青 +2 位作者 王静娜 李曼 常美英 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期140-145,共6页

目的:探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在植入性胎盘组织中的表达以及PGRN对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法:收集河北省中医院收治的植入性胎盘组织和正常胎盘组织各25例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白... 目的:探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在植入性胎盘组织中的表达以及PGRN对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法:收集河北省中医院收治的植入性胎盘组织和正常胎盘组织各25例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)检测胎盘组织(绒毛膜层)中PGRN mRNA和蛋白水平;体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,采用重组腺病毒载体和小干扰RNA(siRNA)技术过表达和干扰HTR-8/SVneo细胞中的PGRN,通过qRT-PCR和Western Blot检测细胞中PGRN表达确定过表达和干扰有效后,划痕实验和Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭相关蛋白的表达。结果:植入性胎盘组织中PGRN mRNA和蛋白表达水平均显著高于正常胎盘组织(P<0.05);过表达PGRN后,HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(FN)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平显著升高,E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达水平显著降低(P<0.05),而PGRN沉默后,HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),同时N-cadherin、FN、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:PGRN在植入性胎盘组织中过表达,PGRN的过表达可能促进人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移和侵袭;而下调PGRN的表达能抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移和侵袭;其作用机制可能与促进上皮-间质转化(EMT)过程有关。 展开更多

关键词 植入性胎盘 颗粒蛋白前体 人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo 迁移 侵袭

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HBsAg进入体外培养的人绒毛膜滋养层细胞的初步研究

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作者 王雪萍 徐德忠 +3 位作者 李远贵 闫水平 门可 张景霞 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第12期1099-1099,共1页

关键词 HBSAG 体外培养 人绒毛膜滋养层细胞 免疫组化

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硒介导PI3K/Akt/mTOR信号通路对子痫前期滋养细胞自噬的调控作用及机制

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作者 刘婉儿 张乐乐 +1 位作者 王婷 郭伟 《山东医药》 CAS 2024年第34期34-37,共4页

目的探讨硒通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对子痫前期(PE)人绒毛膜滋养细胞(HTR-8-Svneo)自噬及增殖迁移的影响及其机制。方法体外培养HTR-8-Svneo,随机分为正常对照组、乏氧组以及乏氧加硒组;对照组HTR-8-Svneo细胞置于37℃CO_(2)培养箱,... 目的探讨硒通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对子痫前期(PE)人绒毛膜滋养细胞(HTR-8-Svneo)自噬及增殖迁移的影响及其机制。方法体外培养HTR-8-Svneo,随机分为正常对照组、乏氧组以及乏氧加硒组;对照组HTR-8-Svneo细胞置于37℃CO_(2)培养箱,乏氧组HTR-8-Svneo细胞置于37℃乏氧培养箱,乏氧加硒组HTR-8-Svneo细胞置于37℃乏氧加硒(硒浓度为10μmol/L)培养箱,三组均培养24 h。采用CCK-8试剂盒测量HTR-8-Svneo细胞活性,细胞划痕试验检测HTR-8-Svneo细胞增殖迁移能力,Western blotting法检测HTR-8-Svneo细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白(p-PI3K、p-AKT、p-mTOR)以及自噬相关蛋白(LC3、Beclin-1、p62)表达,免疫荧光观察HTR-8-Svneo细胞LC3表达量。结果对照组、乏氧组、乏氧加硒组细胞活力OD值分别为1.5±0.21、1.04±0.05、1.48±0.27;乏氧组细胞活力较对照组降低、乏氧加硒组细胞活力较乏氧组增强(P均<0.05)。对照组、乏氧组、乏氧加硒组细胞划痕愈合率分别为17.25%、6.08%、18.13%;乏氧组细胞较对照组划痕愈合率降低、乏氧加硒组较乏氧组细胞划痕愈合率升高(P均<0.05)。乏氧组与对照组、乏氧加硒组与乏氧组比较,HTR-8-Svneo细胞通路蛋白以及自噬相关蛋白表达差异有统计学意义(P均<0.05)。对照组、乏氧组、乏氧加硒组HTR-8-Svneo细胞荧光表达量分别为73.26±4.18、134.83±3.03、74.7±12.37;乏氧组细胞荧光表达量较对照组升高,乏氧加硒组细胞荧光表达量较乏氧组降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论HTR-8-Svneo细胞加硒培养可提高细胞活力和增殖迁移能力,其机制可能与硒通过PI3K/AKT/mTOR通路调控PE滋养细胞自噬相关。 展开更多

关键词 子痫前期 硒 人绒毛膜滋养细胞 PI3K/Akt/mTOR通路 细胞自噬

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枸杞多糖对BaP诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响 被引量：1

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作者 张翠翠 李永川 孙文萍 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1318-1321,共4页

目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-... 目的 研究枸杞多糖对苯并芘(BaP)诱导人绒毛外滋养层细胞凋亡和侵袭的影响和机制。方法 用BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞,以枸杞多糖干预,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测细胞中MMP-9、Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。用p65激活剂处理人绒毛膜滋养层细胞,探讨p65激活剂对枸杞多糖影响人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的作用。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率升高,细胞侵袭能力下降,细胞中Bax、p65蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖各剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞侵袭能力增强(P<0.05),Bax、p65蛋白表达降低(P<0.05),MMP-9、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),并呈剂量依赖性。p65激活剂可以逆转枸杞多糖对BaP诱导人绒毛膜滋养层细胞凋亡和侵袭的影响。结论 枸杞多糖具有拮抗BaP诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡,促进细胞侵袭的作用,其机制可能与p65有关。 展开更多

关键词 枸杞多糖 人绒毛膜滋养层细胞 凋亡 侵袭 苯并芘(BaP) P65

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