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人角膜基质细胞的表型研究进展 被引量：1
1
作者 杨怡(综述) 牛阳 袁玲(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期874-879,共6页
人角膜基质细胞(HCSCs)是一类呈静息状态的神经嵴间充质细胞,是负责分泌基质的高度特化的透明组织,在维持角膜透明度和人眼正常视觉功能等方面发挥重要作用。正常情况下,角膜基质细胞呈静息状态并表现为扁平、树突状,在角膜受到创伤刺... 人角膜基质细胞(HCSCs)是一类呈静息状态的神经嵴间充质细胞,是负责分泌基质的高度特化的透明组织,在维持角膜透明度和人眼正常视觉功能等方面发挥重要作用。正常情况下,角膜基质细胞呈静息状态并表现为扁平、树突状,在角膜受到创伤刺激后被激活,激活状态的人角膜基质细胞(HCK)向修复表型转变,发生凋亡或向角膜成纤维细胞表型和肌成纤维细胞表型转化。HCSCs的表型转化与人角膜损伤修复过程所引起的瘢痕组织形成以及角膜透明度降低等方面具有密切关系。本文通过对HCSCs的3种表型、表型标志物、表型间转化以及体外转化的机制进行综述,发现通过干预HCK向纤维化表型转化过程及TGF-β/Smad等相关信号通路可以抑制角膜纤维化。因此,深入研究HCSCs表型转化的分子机制及干预角膜瘢痕形成的调控机制,有助于临床防治患者角膜纤维化和角膜术后混浊。 展开更多
关键词 人角膜基质细胞 细胞表型 体外转化
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人角膜基质间充质干细胞的分离培养及表型鉴定 被引量：3
2
作者 刘先宁 汪耀 +7 位作者 朱秀萍 程燕 潘士印 肖湘华 银勇 安娜 王亚妮 刘睿 《现代检验医学杂志》 CAS 2019年第4期28-30,34,共4页
目的建立人角膜基质间充质干细胞(HCS-MSC)体外分离培养、传代和鉴定等方法。方法无菌条件下,取眼科临床角膜移植术后剩余的供体角膜缘组织,去除上皮和内皮组织,将基质组织切成1mm×2mm的组织块,采用无动物源性血清的间充质干细胞... 目的建立人角膜基质间充质干细胞(HCS-MSC)体外分离培养、传代和鉴定等方法。方法无菌条件下,取眼科临床角膜移植术后剩余的供体角膜缘组织,去除上皮和内皮组织,将基质组织切成1mm×2mm的组织块,采用无动物源性血清的间充质干细胞培养液进行组织块贴壁法培养,倒置显微镜下动态观察细胞的生长形态及贴壁状态,将传代培养后的第三代细胞采用流式细胞分析法进行表型鉴定,液氮冷冻保存。结果采用人角膜缘基质组织块贴壁法培养,于培养后第7天开始向周围呈放射状长出细胞,14天左右长满培养皿,细胞形态呈均一梭形;传代培养后生长快速,于2~4天达90%融合;连续传代3次,其生长特性和形态不变,CD90,CD29和CD105阳性率>95%,CD34和CD-HLA-dr阳性率<3%。结论采用人角膜缘基质组织可分离培养出间充质干细胞,为角膜组织修复、重建及对抗免疫排斥反应等奠定基础。 展开更多
关键词 人角膜基质间充质干细胞 体外分离培养 表型鉴定
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人角膜基质间充质干细胞外泌体的分离制备及鉴定 被引量：1
3
作者 刘先宁 汪耀 +6 位作者 潘士印 肖湘华 银勇 王亚妮 刘睿 朱秀萍 赵明 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第5期114-116,共3页
目的制备人角膜基质间充质干细胞(human corneal stromal mesenchymal stem cells,HC-MSCs)外泌体并进行生物学鉴定。方法采用组织块培养技术获得HC-MSCs,利用超速离心法从HC-MSCs培养上清中分离制备外泌体,通过蛋白免疫印迹、透射电镜... 目的制备人角膜基质间充质干细胞(human corneal stromal mesenchymal stem cells,HC-MSCs)外泌体并进行生物学鉴定。方法采用组织块培养技术获得HC-MSCs,利用超速离心法从HC-MSCs培养上清中分离制备外泌体,通过蛋白免疫印迹、透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定。结果分离的纳米囊泡表达外泌体特异性标志蛋白CD63,CD81和TSG101,在透射电子显微镜下可见其呈圆形、卵圆形和杯盘状囊泡,直经113.3 nm。结论从HCMSCs培养上清中可分离出具有典型结构及特征的外泌体,为HC-MSCs外泌体的作用机制及其在眼科的转化应用研究奠定坚实的基础。 展开更多
关键词 人角膜基质间充质干细胞 外泌体 制备及鉴定
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反义cyclinD1基因转染后人角膜基质细胞增生改变的实验研究
4
作者 黄海东 康景佳 +3 位作者 尹禄 管迪 张欣 李泓甫 《西部医学》 2014年第2期163-165,共3页
目的探讨反义cyclinD1基因转染对人角膜基质细胞增生的作用效果。方法从沈阳军区总医院眼库获取人角膜组织,体外培养获得第2代人角膜基质细胞用于实验。阳离子脂质体lipofectamine介导进行反义cyclinD1基因转染(实验组),对照组分别为PB... 目的探讨反义cyclinD1基因转染对人角膜基质细胞增生的作用效果。方法从沈阳军区总医院眼库获取人角膜组织,体外培养获得第2代人角膜基质细胞用于实验。阳离子脂质体lipofectamine介导进行反义cyclinD1基因转染(实验组),对照组分别为PBS替代cyclinD1质粒及lipofectamine(对照1组)和PBS代替cyclinD1质粒(对照2组)。通过免疫细胞化学法统计人角膜基质细胞的cyclinD1蛋白表达情况,利用四甲基偶氮唑盐法分析人角膜基质细胞增生情况,锥虫蓝染色计算活细胞比率。结果反义cyclinD1转染后,人角膜基质细胞仅有少量细胞核cyclinD1染色呈阳性,cyclinD1蛋白表达明显降低,A570值显著下降,与对照1组和对照2组比较,差异存在显著性(P<0.05)。对照1组和对照2组比较,差异无显著性(P>0.05)。锥虫蓝染色显示3组活细胞比率均超过90%。结论反义cyclinD1基因转染具有抑制人角膜基质细胞增生的作用,并且细胞毒性不明显,可以作为基因治疗的相关依据。 展开更多
关键词 反义cyclinD1 基因转染 人角膜基质细胞增生
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丹参酮ⅡA对人角膜基质细胞纤维化的抑制作用 被引量：3
5
作者 胡红利 肖中举 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第12期1114-1118,共5页
目的研究丹参酮ⅡA (tanshinoneⅡA,TSN)对转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人角膜基质细胞(human keratocyte,HK)纤维化的作用,探索该药物是否具有防治角膜瘢痕的潜能。方法采用胰蛋白酶消化培养HK,并... 目的研究丹参酮ⅡA (tanshinoneⅡA,TSN)对转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人角膜基质细胞(human keratocyte,HK)纤维化的作用,探索该药物是否具有防治角膜瘢痕的潜能。方法采用胰蛋白酶消化培养HK,并传代至4-7代用于实验。通过TGF-β1诱导建立HK纤维化模型,并分别用5.0μg·L^(-1)TGF-β1和不同浓度的TSN联合给药方法对HK进行处理。采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)与Vimentin的表达,qPCR检测纤连蛋白(fibronectin,FN)和I型胶原(collgen I,COL I) mRNA的表达;利用细胞免疫荧光染色观察HK细胞形态的改变氉。结果 5.0μg·L^(-1)TGF-β1可以显著上调α-SMA与Vimentin蛋白的表达和胞外基质成分FN mRNA(2.238±0.227)、COL I mRNA(3.554±0.526)的表达。2.5μmol·L^(-1)和5.0μmol·L^(-1)TSN均能抑制α-SMA蛋白的表达和FN mRNA(0.619±0.017、0.263±0. 006)、COL I mRNA(0.631±0.011、0.275±0.081)的表达。5.0μg·L^(-1)TGF-β1诱导组HK形态呈长梭形,具有两极,细胞呈极性分布; 5.0μmol·L^(-1)TSN联合5.0μg·L^(-1)TGF-β1培养HK形态同原始细胞形态,细胞呈三角形或星形。结论 TSN可抑制TGF-β1诱导的HK纤维化,具有抗角膜瘢痕的潜力。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA 转化生长因子-Β1 人角膜基质细胞纤维化
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人角膜基质损伤修复研究进展
6
作者 吴淑娴 《科教导刊（电子版）》 2017年第5期173-173,共1页
角膜在创伤或手术后，静止状态的角膜基质细胞（Keratocyte）会被激活转化为修复表型细胞：成纤维细胞（Fibroblast）和肌成纤维细胞（Myofibroblast），使得损伤的角膜基质得以修复，但过纤维化会导致瘢痕形成，角膜瘢痕是造成视力不... 角膜在创伤或手术后，静止状态的角膜基质细胞（Keratocyte）会被激活转化为修复表型细胞：成纤维细胞（Fibroblast）和肌成纤维细胞（Myofibroblast），使得损伤的角膜基质得以修复，但过纤维化会导致瘢痕形成，角膜瘢痕是造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因。本文就角膜基质细胞的转分化方向研究简要综述。 展开更多
关键词 人角膜基质细胞 转分化 角膜瘢痕 损伤修复
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来源于全飞秒激光小切口微透镜摘除术的基质层人角膜成纤维细胞的原代培养与鉴定 被引量：4
7
作者 陆燕 孟虎 +1 位作者 侯培莉 黄振平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第9期801-803,共3页
目的评价体外培养与鉴定行全飞秒激光小切口微透镜摘除术(small incision lenticule extraction,SMILE)的近视患者角膜基质层来源的人角膜成纤维细胞的可行性。方法 8例16眼行SMILE的近视患者的角膜基质层组织分别进行组织块培养,采用... 目的评价体外培养与鉴定行全飞秒激光小切口微透镜摘除术(small incision lenticule extraction,SMILE)的近视患者角膜基质层来源的人角膜成纤维细胞的可行性。方法 8例16眼行SMILE的近视患者的角膜基质层组织分别进行组织块培养,采用细胞形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定。结果 8例SMILE来源的基质层人角膜成纤维细胞全部原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或三角形;免疫细胞化学鉴定:波形蛋白染色阳性,而角蛋白、结蛋白、S-100染色均为阴性。结论 SMILE来源的近视患者的角膜基质层是人角膜成纤维细胞培养的方便的组织来源。 展开更多
关键词 人角膜基质 角膜成纤维细胞 全飞秒激光小切口微透镜摘除术 细胞原代培养
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脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性 被引量：2
8
作者 霍银平 周利晓 孙成林 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第30期4449-4455,共7页
背景:研究发现多种生物材料可制备角膜基质支架且具有良好的生物相容性,而关于脱细胞猪角膜基质支架的制备和生物相容性研究不多。目的:制备脱细胞猪角膜基质支架,探讨其与人角膜基质细胞的生物相容性。方法:制备脱细胞猪角膜基质支架... 背景:研究发现多种生物材料可制备角膜基质支架且具有良好的生物相容性,而关于脱细胞猪角膜基质支架的制备和生物相容性研究不多。目的:制备脱细胞猪角膜基质支架,探讨其与人角膜基质细胞的生物相容性。方法:制备脱细胞猪角膜基质支架及其浸提液。取生长状态良好的人角膜基质细胞,分别以脱细胞猪角膜基质支架浸提液(实验组)、完全培养基培养(对照组)培养,培养后1,2,3 d,采用MTT法检测人角膜基质细胞的增殖;将人角膜基质细胞直接接种于脱细胞猪角膜基质支架上,接种1,3,7 d,采用免疫化学法测定人角膜基质细胞在支架内的生长情况。结果与结论:(1)随着时间的增加,实验组与对照组人角膜基质细胞数量不断增加,两组不同时间点的吸光度值比较差异无显著性意义;(2)人角膜基质细胞在脱细胞猪角膜基质支架上生长良好,细胞整联蛋白β1、波形蛋白、乙醛脱氢酶3A1呈阳性表达,CD34、CDK2和K-Ras蛋白也呈阳性表达;(3)结果表明,脱细胞猪角膜基质支架无细胞毒性,与人角膜基质细胞具有良好的生物相容性。 展开更多
关键词 生物相容性材料 角膜基质 组织工程 生物材料 材料相容性 脱细胞猪角膜基质支架 生物相容性 人角膜基质细胞 整联蛋白β1 波形蛋白 乙醛脱氢酶3A1
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蛋白激酶C抑制剂对人角膜基质细胞增殖周期的调控作用 被引量：2
9
作者 晏晓明 黄萍 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期691-693,共3页
目的　探讨蛋白激酶C(PKC)的抑制剂星状孢菌素 (ST)对人角膜基质细胞在G1/S时相阶段的调控作用及分子机制。方法　流式细胞仪 (FCM)测量PKC抑制剂ST对人角膜基质细胞周期的影响 ,cyclin/DNA双参数法检测细胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白含量... 目的　探讨蛋白激酶C(PKC)的抑制剂星状孢菌素 (ST)对人角膜基质细胞在G1/S时相阶段的调控作用及分子机制。方法　流式细胞仪 (FCM)测量PKC抑制剂ST对人角膜基质细胞周期的影响 ,cyclin/DNA双参数法检测细胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白含量。 结果　ST使人角膜基质细胞阻滞在G1期 ,实验组G1期细胞百分比 (2 5 μg/LST组为 78 4 % ,5 μg/LST组为 90 9% )明显高于对照组 (72 4 % ) ,并呈现剂量依赖性 ;cyclin/DNA双参数流式细胞术分析显示ST使G1期细胞cyclinE蛋白水平下降 ,同时G1期细胞数增加。结论　PKC抑制剂ST能调控人角膜基质细胞的周期 ,并在G1/S时相发挥其抑制细胞生长的作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶C抑制剂 人角膜基质细胞增殖周期 调控作用 角膜 星状孢菌素
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组织工程人角膜基质体外重建的研究进展 被引量：4
10
作者 赵文卓 樊廷俊 +1 位作者 胡修忠 牛莹 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第8期62-66,89,共6页
从种子细胞和载体支架两个方面的最新研究成果,对组织工程人角膜基质的体外重建及其研究中存在的问题与解决途径进行综述。
关键词 人角膜基质 组织工程 种子细胞 载体支架 重建
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