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PPARγ基因沉默的人骨髓基质细胞对骨髓抑制小鼠造血功能的影响
1
作者 王雪梅 黄纯兰 +5 位作者 周铁军 李玉娇 魏梦宇 陈燕 陈晓敏 王万玥 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期6-12,共7页
目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma, PPARγ)基因沉默的人骨髓基质细胞HS-5对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法 用X射线进行全身照射构建骨髓抑制小... 目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma, PPARγ)基因沉默的人骨髓基质细胞HS-5对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法 用X射线进行全身照射构建骨髓抑制小鼠模型,造模后2 h,将小鼠随机分为3组,分别为实验组(尾静脉注射PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(尾静脉注射未行PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、空白组(尾静脉注射等量的生理盐水),每组5只。各组于放疗前、放疗后24 h、放疗后1周、放疗后2周进行外周血常规检测。对HS-5细胞在体外进行成骨、成脂诱导,分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞)、空白组(未行成骨/成脂诱导分化的HS-5细胞),观察成骨/成脂染色情况。采用CCK-8实验检测PPARγ基因沉默的HS-5细胞对小鼠骨髓造血干细胞(hemopoietic stem cell, HSC)增殖的影响,分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、阳性对照组(50μmol/L PPARγ抑制剂处理的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、阴性对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、空白组(小鼠HSC单独培养,不与HS-5细胞共培养)。结果 放疗后,各组小鼠血常规指标均呈先降低后升高趋势,放疗后1周,三组小鼠血小板、白细胞水平差异显著,且实验组>对照组>空白组(均P<0.05);放疗后2周,三组小鼠脂肪空泡面积百分比差异显著,且实验组<对照组<空白组(均P<0.05),经Pearson相关分析显示,血常规各指标与血清PPARγ表达水平呈负相关(均P<0.05),与脂肪空泡面积百分比呈负相关(均P<0.05)。在体外成骨/成脂诱导分化后,实验组与对照组相比,橙红色的细胞比例明显降低,红色钙结节比例明显增高;成骨分化诱导3 d后,实验组、阳性对照组、阴性对照组人骨髓基质细胞均与小鼠HSC细胞进行共培养,空白组则单纯培养HSC细胞,结果显示共培养24、48、72 h后,实验组、阳性对照组小鼠HSC细胞增殖水平均高于阴性对照组和空白组(均P<0.05)。结论 PPARγ基因沉默的HS-5植入骨髓抑制小鼠后有助于小鼠造血功能增强。PPARγ基因被干扰沉默后,可增强HS-5细胞的成骨分化能力,减弱HS-5细胞的成脂分化能力,而成骨分化诱导的HS-5细胞能进一步增强小鼠HSC的增殖能力。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖激活受体Γ 人骨髓基质细胞 骨髓抑制小鼠 造血功能 成骨/成脂分化
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人骨髓基质细胞在骨组织工程临床应用中的探讨 被引量：24
2
作者 柴岗 张艳 +2 位作者 刘伟 崔磊 曹谊林 《中国临床康复》 CSCD 2002年第22期3340-3341,I001,共3页
目的研究人骨髓基质干细胞经体外诱导表达成骨细胞表型,作为骨组织工程临床应用种子细胞的可行性。方法人骨髓中密度梯度法分离骨髓基质干细胞,诱导组予条件培养液,对照组予单纯DMEM培养液,分别培养至第3代细胞,计算各代倍增时间和3代... 目的研究人骨髓基质干细胞经体外诱导表达成骨细胞表型,作为骨组织工程临床应用种子细胞的可行性。方法人骨髓中密度梯度法分离骨髓基质干细胞,诱导组予条件培养液,对照组予单纯DMEM培养液,分别培养至第3代细胞,计算各代倍增时间和3代总的扩增倍数,经相差显微镜观察,钙结节茜素红染色,四环素荧光,免疫荧光检测骨钙蛋白,成骨细胞转录因子RT-PCR检测Ⅰ型胶原,骨钙蛋白mRNA表达。结果诱导组骨髓基质干细胞(MSC)经体外诱导,三代平均扩增163.4倍后,形成钙结节,骨钙蛋白(OCN),成骨细胞转录因子(cbfa1)免疫荧光结果阳性,RT-PCR证实Ⅰ型胶原,骨钙蛋白mRNA的表达;对照组未能形成钙结节,无成骨细胞特征性蛋白OCN,cbfa1的表达。结论人MSC体外经条件培养液诱导培养三代后仍可表达成骨细胞表型,可以满足骨组织工程临床应用对种子细胞质和量的需要。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 骨组织工程 临床应用
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人骨髓基质细胞的分离、培养及成骨鉴定 被引量：8
3
作者 毛新展 周江南 +2 位作者 胡建中 李康华 易红 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期31-32,36,共3页
目的建立一种体外分离培养人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCells ,hBMSCs)的方法。方法 :从髂棘 (髂前或髂后 )抽取骨髓液 5～ 8ml,经密度离心后的骨髓单核细胞 ,以 10 6/ml浓度接种培养 ,贴壁细胞接近长满后 ,进行传代培养 ,... 目的建立一种体外分离培养人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCells ,hBMSCs)的方法。方法 :从髂棘 (髂前或髂后 )抽取骨髓液 5～ 8ml,经密度离心后的骨髓单核细胞 ,以 10 6/ml浓度接种培养 ,贴壁细胞接近长满后 ,进行传代培养 ,每传一代约 5～ 7d。培养期间进行碱性磷酸酶的检测和钙染色。结果 :原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的细胞。两种细胞在体外可向成骨方向转化。结论 :人骨髓基质细胞在体外长期培养后仍具有成骨能力 ,为骨髓中间充质干细胞 ,掌握其培养方法为其广泛应用奠定基础。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 细胞培养 细胞分离 成骨鉴定
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人骨髓基质细胞接种珊瑚构建组织工程骨 被引量：3
4
作者 钱奇春 刘彦普 +3 位作者 杨维东 陈富林 赵黎 张晓东 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 2002年第4期360-361,共2页
目的 :观察体外培养的人骨髓基质细胞与珊瑚复合物植入体内后的成骨能力。方法 :穿刺抽吸人髂骨区骨髓基质细胞 ,体外培养扩增、诱导 ,将其与珊瑚复合后植入裸鼠体内 ,以单纯珊瑚作为对照。术后 4、8周取材 ,通过大体、组织学、扫描电... 目的 :观察体外培养的人骨髓基质细胞与珊瑚复合物植入体内后的成骨能力。方法 :穿刺抽吸人髂骨区骨髓基质细胞 ,体外培养扩增、诱导 ,将其与珊瑚复合后植入裸鼠体内 ,以单纯珊瑚作为对照。术后 4、8周取材 ,通过大体、组织学、扫描电镜观察植入物体内成骨情况。结果 :术后 4周 ,复合物中有少量新骨形成 ;术后 8周 ,复合物中出现大量成熟骨组织。而对照组无骨组织形成。结论 :人骨髓基质细胞复合珊瑚在无免疫动物体内具有成骨能力 。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 珊瑚 成骨 骨组织工程
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骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用 被引量：4
5
作者 钱奇春 刘彦普 +1 位作者 杨维东 张晓东 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2003年第5期350-352,共3页
目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2 (rhBMP - 2 )和碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)单独或联合作用对人骨髓基质细胞 (HBMSC)增殖和分化的影响。方法 :利用四唑盐比色法 (MTT)、碱性磷酸酶 (ALP)测定法观察不同浓度的rhBMP - 2和b -FGF... 目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2 (rhBMP - 2 )和碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)单独或联合作用对人骨髓基质细胞 (HBMSC)增殖和分化的影响。方法 :利用四唑盐比色法 (MTT)、碱性磷酸酶 (ALP)测定法观察不同浓度的rhBMP - 2和b -FGF单独或联合作用时HBMSC的增殖和分化情况。结果 :rhBMP - 2对HBMSC的增殖和ALP表达均有促进作用 ;b -FGF促进HBMSC增殖 ,但抑制ALP表达 ;rhBMP - 2和b -FGF联合作用时HBMSC的增殖和ALP活性较单独作用有显著提高。结论 :rhBMP - 2和b 展开更多
关键词 骨形成蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 人骨髓基质细胞 生物学作用 增殖 分化
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骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用 被引量：5
6
作者 钱奇春 刘彦普 +1 位作者 杨维东 张晓东 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期380-381,共2页
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 人骨髓基质细胞 重组人骨形成蛋白-2 生物学作用 成骨 间充质细胞 RHBMP-2 培养条件 定向分化 多向分化
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人骨髓基质细胞中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶DcDNA的克隆 被引量：6
7
作者 顾善兰 唐建华 张晓杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期172-178,共7页
为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA... 为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA几乎百分之百同源 ,与人肝脏GPI PLDcDNA同源性为 95 %,氨基酸同源性为 94 %,3者对应的结构基因只有 1个 ,位于人类第 6号染色体上 ,基因组序列长约 80kb ,包括 2 5个外显子 .构建克隆的GPI PLDcDNA的真核表达载体 ,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶 (PLAP)而无GPI PLD活性的G9细胞 ,同时设立对照组检测GPI PLDcDNA的功能 .结果显示 ,对照组细胞几乎检测不到GPI PLD活性 ,其表达的PLAP主要位于细胞膜上 ;而转染GPI PLDcDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI PLD活性 ,而且大部分酶活性存在于培养液中 ,其表达的PLAP也主要被释放入培养液 .结果证实 ,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI PLDcDNA有生物学功能 ,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质 . 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D CDNA克隆
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人骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的研究 被引量：3
8
作者 邹雨汐 姜晓丹 +2 位作者 徐如祥 陈剑荣 黄涛 《中国临床康复》 CSCD 2004年第31期6891-6893,i001,共4页
目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子... 目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导为神经元样细胞,通过免疫细胞化学方法对诱导后细胞进行鉴定;通过高效液相色谱法(HPLC)检测诱导后细胞合成分泌神经递质去甲肾上腺素(NE)的能力。结果:分离得到的成人BMSCs培养10～14d后,细胞呈半贴壁状,胞体饱满,Nestin抗原染色阳性。培养20d后,在诱导因子作用下进一步分化为神经元样细胞(NLCs),具有细长双极或多极突起,神经核蛋白(NeuN)抗原表达阳性。HPLC检测BMSCs、空白神经干细胞培养液未测到NE,经体外诱导培养8,11d的神经干细胞、体外诱导分化20d的NLCs均可检测到NE,神经干细胞(8,11d)的NE含量为(10.4146±1.0425),(28.3359±3.8371)μg/L小于NLCs(20d)组(52.1342±3.9136)μg/L,差异有非常显著性意义(F=126.64,P=0.0000)。而且随着BMSCs培养天数的增加,其所含的NE浓度也渐增加(P<0.05)。结论:在适宜培养条件及诱导因子联合作用下,人BMSCs可被成功诱导为神经细胞,并具有合成分泌神经递质成分的能力。 展开更多
关键词 NE 神经元样细胞 神经干细胞 诱导 BMSC 阳性 神经细胞 密度梯度离心 分化 人骨髓基质细胞
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地塞米松和1,25(OH)_2D_3对体外人骨髓基质细胞成骨及成脂分化的影响 被引量：3
9
作者 袁风红 程力 +1 位作者 俞可佳 高恺言 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2006年第5期447-451,共5页
目的观察地塞米松(Dex)和1,25(OH)2D3(D3)对骨髓基质细胞(MSCs)成骨及成脂分化的影响。方法以离心法分离培养人MSCs,以10-7mol/L Dex和/或10-8mol/L1,25(OH)2D3作为分化诱导剂对细胞进行干预,分别用细胞碱性磷酸酶(ALP)染液试剂盒及苏... 目的观察地塞米松(Dex)和1,25(OH)2D3(D3)对骨髓基质细胞(MSCs)成骨及成脂分化的影响。方法以离心法分离培养人MSCs,以10-7mol/L Dex和/或10-8mol/L1,25(OH)2D3作为分化诱导剂对细胞进行干预,分别用细胞碱性磷酸酶(ALP)染液试剂盒及苏丹Ⅲ染液对成骨细胞和脂肪细胞进行组织化学染色,计数;使用RT-PCR技术在转录水平检测成骨细胞标记物骨桥蛋白(OPN)及脂肪细胞标记物过氧化酶体增殖激活受体γ2(PPARγ2)mRNA的表达。结果细胞染色结果表明各干预组ALP+细胞百分比均较对照组增加,与对照组相比有显著性差异(P<0·05),苏丹Ⅲ+细胞百分比Dex组较对照组增多,D3组较对照组减少,差异有显著性(P<0·05),Dex+D3组较Dex组苏丹Ⅲ+细胞数明显减少,两者相比差异有显著性(P<0·05);OPN mRNA及PPARγ2mRNA表达未在对照组测得,Dex诱导了OPN mRNA及PPARγ2mRNA表达,1,25(OH)2D3诱导OPN mRNA表达,并抑制Dex诱导的PPARγ2mRNA的表达。结论Dex促进MSCs的成骨分化及成脂分化,1,25(OH)2D3促进MSCs的成骨分化的同时抑制其成脂分化,与Dex合用抑制Dex成脂分化作用,强化了其成骨分化作用,反映了成骨细胞与脂肪细胞间存在的反变关系,表明两者来源于同一前体细胞的可能性。 展开更多
关键词 地塞米松 1 25(OH)2D3 人骨髓基质细胞 成骨分化 成脂分化
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珊瑚复合人骨髓基质细胞构建组织工程骨 被引量：2
10
作者 钱奇春 陈海军 +2 位作者 刘彦普 杨维东 张晓东 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第5期477-479,共3页
目的 :观察人骨髓基质细胞在角孔珊瑚上立体培养后的生长情况及其在体内的成骨能力。方法 :穿刺抽吸人髂骨区骨髓基质细胞 ,体外培养扩增、诱导后 ,接种于角孔珊瑚中立体培养 5d ,观察细胞在角孔珊瑚表面的贴附及伸展情况 ;将上述细胞 ... 目的 :观察人骨髓基质细胞在角孔珊瑚上立体培养后的生长情况及其在体内的成骨能力。方法 :穿刺抽吸人髂骨区骨髓基质细胞 ,体外培养扩增、诱导后 ,接种于角孔珊瑚中立体培养 5d ,观察细胞在角孔珊瑚表面的贴附及伸展情况 ;将上述细胞 /角孔珊瑚复合物植入体内 ,观察植入物在体内的成骨情况。结果 :细胞可在角孔珊瑚中立体培养成活。体内植入后 4周 ,复合物中有少量新骨形成 ;体内植入后 8周 ,复合物中出现大量较成熟骨组织 ;而对照组 4、8周均无骨组织形成。结论 :穿刺抽吸的人骨髓基质细胞可作为骨组织工程的种子细胞 ,角孔珊瑚可作为骨组织工程的支架材料。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 珊瑚 成骨 骨组织工程
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转FL、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34^+细胞体外扩增 被引量：2
11
作者 李杰 李薇 +1 位作者 侯燕 马俐君 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第6期670-674,共5页
研究转FL、GM CSF基因的基质细胞对脐血CD34+ 细胞的扩增效应。将转FL、GM CSF基因的人骨髓基质细胞系与脐血CD34+ 细胞共培养 ,观察细胞总数、CD34+ 细胞数、CFU GM的变化情况。培养到第 4周时 ,第 (4 )组 (SCF+IL 3+IL 6 +GM CSF +FL... 研究转FL、GM CSF基因的基质细胞对脐血CD34+ 细胞的扩增效应。将转FL、GM CSF基因的人骨髓基质细胞系与脐血CD34+ 细胞共培养 ,观察细胞总数、CD34+ 细胞数、CFU GM的变化情况。培养到第 4周时 ,第 (4 )组 (SCF+IL 3+IL 6 +GM CSF +FL)和第 (8)组 (HFCL/hGM CSF +HFCL/hFL +SCF +IL 3+IL 6 )的细胞总数增加到最大 ,分别扩增了 717± 2 4 4 7和 70 9± 6 3 6 3,第 1周 ,第 (5 )组 (HFCL +SCF +IL 3+IL 6 )扩增了 10 5± 2 0 8倍 ,较第 (8)组减少 (P <0 0 5 )。第 1周时 ,CD34+ 细胞总数第 (4 )组和第 (8)组分别扩增了 8 4 4倍和 11 5倍 (P <0 0 5 ) ,CD34+ 细胞百分率第 (7)组 (FCL/hFL +SCF +IL 3+IL 6 )为 5 0 2 % ,第 (6 )组 (HFCL/hGM CSF +SCF +IL 3+IL 6 )为 2 8 95 % (P <0 0 1)。第 2周 ,各组CFU GM增加显著 ,以第 (4 )组和第 (8)组增加最为明显 ,以后随扩增时间延长 ,造血细胞集落数、集落体积逐渐减少。表明转FL、GM CSF基因的基质细胞 ,能有效的协同其他细胞因子对脐血CD34+ 细胞产生明显的扩增作用 。 展开更多
关键词 转基因 FL GM-CSF 人骨髓基质细胞 脐血 CD34^+ 细胞体外扩增
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冲击波诱导人骨髓基质细胞体内成骨研究 被引量：1
12
作者 胡军 邢达 +1 位作者 张爱斌 周江南 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期452-457,共6页
为了研究冲击波(SW)诱导人骨髓基质细胞(hMSCs)在动物体内成骨作用,根据前期工作结果,应用适宜能量冲击波(10kV,500次)处理体外培养的hMSCs,将SW组和对照组hMSCs与羟基磷灰石(HA)载体复合后体外培养2周,应用扫描电镜(SEM)检测细胞在载... 为了研究冲击波(SW)诱导人骨髓基质细胞(hMSCs)在动物体内成骨作用,根据前期工作结果,应用适宜能量冲击波(10kV,500次)处理体外培养的hMSCs,将SW组和对照组hMSCs与羟基磷灰石(HA)载体复合后体外培养2周,应用扫描电镜(SEM)检测细胞在载体表面的生长情况.将hMSCs-HA载体复合体植入裸鼠皮下,分别于术后4周、8周取材进行组织学、四环素荧光标记、SEM观察、碱性磷酸酶测定、RT-PCR检测骨钙素mRNA表达.结果表明,SW组及对照组细胞与HA载体体外复合后生长良好,且SW组细胞分泌较多的细胞基质;细胞载体复合体植入动物体内后,SW组载体表面有类骨组织形成,而对照组HA载体表面无骨组织形成;SW组与对照组的hMSCs-HA载体复合体碱性磷酸酶表达有显著性差异(P<0.01);SW组hMSCs-HA载体复合体术后4周与8周表达骨钙素mRNA,而对照组则无表达.提示hMSCs经适宜能量冲击波作用后与HA载体复合植入裸鼠体内具有成骨作用,适宜能量的冲击波作为一种新的促进hMSCs成骨分化的方法,可应用于组织工程领域. 展开更多
关键词 冲击波 人骨髓基质细胞 羟基磷灰石 组织工程 成骨作用
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慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞 被引量：1
13
作者 汤浩 项永生 +3 位作者 秦玲莎 姜晓丹 徐如祥 陈镇洲 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第40期7441-7445,共5页
背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:将携带增强型绿色荧... 背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。结果与结论:基因转染48h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白 人骨髓基质细胞 慢病毒 转染 体内移植
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永生化人骨髓基质细胞的表面抗原及多向分化研究 被引量：1
14
作者 桂松柏 张亚卓 +2 位作者 孙梅珍 王红云 李丹 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2007年第4期159-162,共4页
目的研究本所转入人端粒酶逆转录酶基因的人骨髓基质细胞(hMSC-TERT细胞)的生物学特性。方法复苏hMSC-TERT细胞第30代,扩增,流式细胞仪检测细胞表面抗原;进行体外脂肪细胞、成骨细胞定向诱导,并分别进行油红O染色、碱性磷酸酶染色及von ... 目的研究本所转入人端粒酶逆转录酶基因的人骨髓基质细胞(hMSC-TERT细胞)的生物学特性。方法复苏hMSC-TERT细胞第30代,扩增,流式细胞仪检测细胞表面抗原;进行体外脂肪细胞、成骨细胞定向诱导,并分别进行油红O染色、碱性磷酸酶染色及von Kossa染色。结果hMSC-TERT细胞表面抗原检测CD34、CD45、CD44、CD106、CD166均为阴性;脂肪细胞定向诱导后油红O染色见胞浆内有红色脂肪颗粒,成骨细胞定向诱导后见胞浆内有碱性磷酸酶染色阳性黑褐色颗粒,von Kossa染色见有钙结节形成。结论hMSC-TERT细胞依然保留骨髓基质干细胞的自我更新特性及多向分化潜能。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 端粒 末端转移酶 抗原 分化 细胞分化
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人骨髓基质细胞诱导成骨细胞和脱钙骨粘附率的研究 被引量：8
15
作者 柴岗 张艳 +5 位作者 王敏 胡晓洁 吴娟娟 刘伟 崔磊 曹谊林 《实用美容整形外科杂志》 2003年第2期66-69,共4页
目的　研究人MSC诱导为成骨细胞后 ,其在脱钙骨上的粘附特性。方法　采用密度梯度法分离人骨髓中骨髓基质干细胞 ,条件培养液诱导培养至第 3代细胞 ,经相差显微镜观察 ,钙结节茜素红染色 ,免疫组化检测Ⅰ型胶原和骨钙蛋白 ,RT -PCR检测... 目的　研究人MSC诱导为成骨细胞后 ,其在脱钙骨上的粘附特性。方法　采用密度梯度法分离人骨髓中骨髓基质干细胞 ,条件培养液诱导培养至第 3代细胞 ,经相差显微镜观察 ,钙结节茜素红染色 ,免疫组化检测Ⅰ型胶原和骨钙蛋白 ,RT -PCR检测Ⅰ型胶原和骨钙蛋白mRNA的表达。不同浓度细胞悬液接种脱钙骨 ,MTT计数未粘附细胞量 ,计算不同浓度下MSC的粘附率 ,单位重量脱钙骨上MSC最多能粘附的细胞数量。结果　MSC经体外诱导形成钙结节 ,Ⅰ型胶原和骨钙蛋白免疫组化结果阳性 ,RT -PCR证实Ⅰ型胶原和骨钙蛋白mRNA的表达。脱钙骨上接种MSC达到饱和后 ,MSC的粘附率随接种浓度上升而下降。单位重量脱钙骨最多粘附的MSC量为 3 .5×1 0 7/ g。 结论　人MSC在体外经条件培养液诱导可表达成骨细胞表型 ,在脱钙骨上有良好的粘附能力 。 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 成骨细胞 脱钙骨 粘附率 干细胞 组织工程
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人骨髓基质细胞对精原干细胞体外增殖的影响研究
16
作者 徐富翠 梅欣明 杨晓红 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期491-492,共2页
关键词 人骨髓基质细胞 精原干细胞 体外增殖 干细胞培养 饲养层 原始细胞 精子形成 睾丸组织
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人骨髓基质细胞冻存技术的初步研究 被引量：3
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作者 黄柏英 《湘南学院学报（自然科学版）》 2004年第4期12-14,共3页
目的　探索适合于人骨髓基质细胞 - 196℃冷冻保存条件和方法。方法　以人髂骨区骨髓为材料进行体外人骨髓基质细胞培养 ,传代后以不同浓度二甲亚砜 (DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存 ,2个月后复苏接种培养 ,对其存活率、贴... 目的　探索适合于人骨髓基质细胞 - 196℃冷冻保存条件和方法。方法　以人髂骨区骨髓为材料进行体外人骨髓基质细胞培养 ,传代后以不同浓度二甲亚砜 (DMSO)的冻存液及不同的细胞浓度在液氮中保存 ,2个月后复苏接种培养 ,对其存活率、贴壁率和体外成骨能力进行检测。结果　不同DMSO浓度保存细胞复苏后细胞的存活率从高到低依次为 10 %DMSO组、5 %DMSO组、15 %DMSO组、2 0 %DMSO组 ;在条件培养液中 2周形成多层结构 ,并出现细胞结节 ,碱性磷酸酶染色阳性 ;冻存时细胞浓度为每毫升 (5 .0～ 8.0 )× 10 6个细胞组复苏后细胞存活率高于每毫升 (1.0～2 .5 )× 10 6个细胞组。结论　 5 % - 10 %DMSO浓度适合于骨髓基质细胞的长期保存 ,高浓度组骨髓基质细胞的冻存效果优于低浓度组。 展开更多
关键词 冻存 人骨髓基质细胞 体外 存活率 复苏后 初步研究 髂骨 阳性 成骨能力 结节
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人骨髓基质细胞向神经细胞分化的方法学研究
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作者 许期年 王秀云 童本沁 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第4期592-594,共3页
目的改进采用人骨髓体外培养人骨髓基质细胞(hBMSCs),进行体外传代扩增,并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法.方法抽取人骨髓血,淋巴细胞分离液分离,DMEM/15%人血清培养传代,至第3～5代时加入巯基乙醇(BME),观察hBMSCs分化为神经元... 目的改进采用人骨髓体外培养人骨髓基质细胞(hBMSCs),进行体外传代扩增,并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法.方法抽取人骨髓血,淋巴细胞分离液分离,DMEM/15%人血清培养传代,至第3～5代时加入巯基乙醇(BME),观察hBMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化.结果该方法hBMSCs在体外可以实现数目扩增,在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化.结论采用少量骨髓样本,既可培养获得充足的细胞量,可以满足定向诱导和细胞移植的需要. 展开更多
关键词 人骨髓基质细胞 神经细胞 细胞分化 形态学 细胞量 细胞移植 组织工程
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脂质体方法转染人骨髓基质细胞的影响因素 被引量：1
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作者 王倩 宋艳秋 《中国厂矿医学》 2008年第4期388-390,共3页
目的探讨用脂质体介导的方法转染人骨髓基质细胞的影响因素。方法构建真核表达载体pcDNA_3-sFlt-1_(D4),脂质体方法转染人骨髓基质细胞,流式细胞仪检测转染率,ELISA、MTT法检测转基因蛋白sFlt-1_(D4)的浓度及功能。结果转染率为9.27%。E... 目的探讨用脂质体介导的方法转染人骨髓基质细胞的影响因素。方法构建真核表达载体pcDNA_3-sFlt-1_(D4),脂质体方法转染人骨髓基质细胞,流式细胞仪检测转染率,ELISA、MTT法检测转基因蛋白sFlt-1_(D4)的浓度及功能。结果转染率为9.27%。ELISA法检测转染后24、48 h及4周转基因骨髓基质细胞培养上清中sFlt-1_(D4)蛋白的表达浓度分别为(0.104±0.078)μg/L、(0.158±0.022)μg/L和(0.171±0.069)μg/L。ELISA法证实转基因组培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)含量降低。MTT法证实转染24、48 h及4周的转基因产物对K562细胞的抑瘤率分别为(9.41±4.71)%、(23.63±7.50)%和(33.13±6.93)%。结论血清、细胞铺板密度、转染后细胞筛选的方式等是影响转染质量的主要因素。转基因方法可以获得sFlt-1_(D4)蛋白的表达,转基因蛋白具有抑制K562细胞生长的作用。 展开更多
关键词 脂质体 人骨髓基质细胞 转染
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构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞
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作者 陈镇洲 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第41期7704-7708,共5页
背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰... 背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因。用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上。然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上。将重组载体与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结果与结论:成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体,病毒的平均物理滴度为1.07×1012LP/L。以之转染人骨髓基质细胞,目的基因表达水平有显著提升,细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白。说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位。 展开更多
关键词 人端粒酶催化亚单位 人骨髓基质细胞 慢病毒 转染 物理滴度
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