低氧反应元件调控下h-VEGF_(165)基因表达及其蛋白产物的延迟消失 被引量：6

1

作者 张宜乾 张中明 +1 位作者 闫英群 董红燕 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期281-286,共6页

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element．HRE)作为... 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element．HRE)作为调控开关,研究氧环境对VEGF基因mRNA及蛋白产物表达的影响。重组腺相关病毒(recombinant adeno-associ- ated virus,rAAV)作为载体(rAAV-HRE-h-VEGF_(165)),转染离体培养大鼠心肌细胞,在常氧/缺氧(氧浓度1%)/缺氧复氧条件下进行培养,用酶联免疫特异性测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测培养液h-VEGF_(165)蛋白浓度,细胞免疫荧光染色观测细胞内h-VEGF_(165)蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT- PCR)方法检测细胞h-VEGF_(165)mRNA表达。结果显示：未转染组、常氧培养组均无h-VEGF_(165)mRNA及其蛋白表达：缺氧培养组h-VEGF_(165)mRNA及蛋白均表达；缺氧复氧4h组的h-VEGF(165)mRNA消失,培养液中h-VEGF_(165)蛋白减少,细胞内h-VEGF_(165)蛋白存在：缺氧复氧8h及12h组的h-VEGF_(165)mRNA消失,培养液和细胞内h-VEGF_(165)蛋白均消失。研究表明,在HRE调控下,缺氧可促使h-VEGF_(165)基因表达,复氧后,h-VEGF_(165)mRNA表达停止,蛋白产物延迟消失。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 低氧反应元件 心肌细胞

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低氧反应元件介导的Bcl-2-shRNA对缺氧诱导抗凋亡肺血管内皮细胞的调控作用 被引量：1

2

作者 姜桢 曹永梅 +4 位作者 曾真 顾玉春 季莹莹 赵宇鹏 李颖川 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期674-681,共8页

目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)... 目的探讨低氧反应元件(HRE)介导的Bcl-2基因沉默对缺氧诱导抗凋亡肺微血管内皮细胞的影响。方法设计针对Bcl-2的siRNA序列,构建含Bcl-2-shRNA和HRE的表达载体并进行慢病毒包装,重组病毒感染肺微血管内皮细胞,分别在常氧(21%)或低氧(5%)条件下培养;96 h后通过荧光标记物确认感染效率,Western blotting检测转染后细胞内Bcl-2蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Bcl-2基因沉默明显下调细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达;HRE启动子仅在低氧环境中活性显著增强;重组慢病毒感染肺微血管内皮细胞后96 h时的转染效率约为90%,细胞内Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡增加;在低氧环境中,受HRE的调控,Lv-HRE-Bcl-2-shRNA组细胞凋亡率显著增高。结论低氧条件下,HRE作为氧敏感调控开关,可进一步增强Bcl-2-shRNA的作用,诱导肺血管内皮细胞凋亡,这将为肺动脉高压的血管重塑提供潜在的治疗靶标。 展开更多

关键词 BCL-2 低氧反应元件 抗凋亡肺血管内皮细胞 基因调控

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低氧反应元件调控的腺病毒-胸苷激酶对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用 被引量：1

3

作者 王小忠 彭启全 +1 位作者 彭云恒 廖文鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1513-1516,共4页

目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体... 目的:构建携带受低氧反应元件(HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因的重组腺病毒载体,探讨该重组腺病毒对体外培养的肝癌细胞HepG2的特异性杀伤活性。方法:采用Ad Easysystem构建携带受HRE调控TK基因表达的腺病毒Ad-HRE-TK,体外感染肝癌细胞系HepG2后分别在正常和低氧条件下培养。分别采用反转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blotting)技术检5测TKmRNA及蛋白表达情况,并用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)处理后以MTT法检测细胞的增殖情况。结果:RT-PCR及Western blotting结果显示,仅转染重组腺病毒Ad-HRE-TK并在低氧条件下培养的HepG2细胞特异性表达TK基因及蛋白。HepG2细胞感染Ad-HRE-TK后,在低氧培养条件下对GCV的敏感性明显增加,在感染复数(MOI)为100并用50mg/LGCV处理时,则有95%以上HepG2细胞被杀死。而正常氧浓度下培养组,未能观察到GCV的杀伤作用。结论:低氧条件下,HRE可特异性地促进HSV-TK基因的表达,从而诱导GCV的毒性作用。 展开更多

关键词 低氧反应元件 单纯疱疹病毒胸苷激酶 腺病毒载体 肝肿瘤

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低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF_(165)基因表达对新生血管的影响 被引量：1

4

作者 董红燕 王强 +3 位作者 张中明 袁延亮 张宜乾 徐夏红 《徐州医学院学报》 CAS 2009年第11期704-707,共4页

目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165... 目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4～6周至高峰（P〈0.01）,缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31（＋）血管密度显著高于缺血对照组（P〈0.01）;但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA（＋）血管密度显著低于缺血前水平（P〈0.01）。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。 展开更多

关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 基因调控 心肌细胞 缺氧

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低氧反应元件对缺血心肌转导hVEGF_(165)基因表达的调控 被引量：1

5

作者 姜波 张中明 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2006年第5期381-385,共5页

目的探讨低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165(human vascular endous growth factor 165,hVEGF165)基因表达的调控作用。方法在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可... 目的探讨低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)对缺血、复灌心肌转导人血管内皮生长因子165(human vascular endous growth factor 165,hVEGF165)基因表达的调控作用。方法在猪冠状动脉回旋支起始处以钛夹阻断回旋支血流,建立可复灌的心肌缺血模型。携带9拷贝HRE(9HRE)-hVEGF165的腺相关病毒转染模型心肌,转染后4天,复灌组二次开胸打开钛夹恢复缺血区血供。取各组心肌组织,RT-PCR法测定hVEGF165mRNA的表达情况;免疫组化及免疫印迹法测定hVEGF165蛋白的表达情况;Ⅷ因子免疫组化染色检测局部毛细血管情况。结果缺血心肌转导hVEGF165基因后,hVEGF165蛋白表达量明显增高,而复灌组表达明显减少(P<0.01)。结论9HRE作为调控缺血心肌组织内转导的hVEGF165基因的氧敏感开关灵敏、高效,使hVEGF165基因在缺血时高度表达,而复灌后表达水平下降。 展开更多

关键词 低氧反应元件 基因调控 人血管内皮生长因子165 腺相关病毒 心肌

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低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡

6

作者 张军峰 史利利 +5 位作者 张力 赵朝华 杨蓬勃 张建水 刘勇 徐曦 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期581-586,共6页

目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表... 目的在体外培养的PC12细胞中观察低氧反应元件(HRE)介导的神经营养因子-3(NT-3)对低氧反应性表达上调及其对低氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法用分子生物学方法将5拷贝HRE(5HRE)和NT-3克隆入反转录病毒载体中构建HRE介导的低氧调控表达载体,并转导入PC12细胞,ELISA法检测NT-3的表达和分泌,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和Caspase-3激活情况。结果成功构建重组反转录病毒载体,并将外源基因转导入PC12细胞中(PC12-NT3-EGFP、PC12-5HRE-NT3-EGFP和PC12-5HRE-EGFP)。在正常条件培养下,PC12-5HRE-NT3-EGFP细胞中NT-3表达水平较低,但在低氧处理后,NT-3表达明显升高(n=3,P<0.05)。在低氧处理后,与PC12细胞组相比,PC12-5HRE-NT3-EGFP组中细胞凋亡明显减少(n=3,P<0.05),且p38 MAPK和Caspase-3磷酸化也明显减少(n=3,P<0.05)。结论在PC12细胞中HRE介导的低氧反应性调控NT-3的表达上调可以对PC12细胞产生保护作用。 展开更多

关键词 低氧反应元件 神经营养因子-3 低氧 免疫印迹法

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构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体 被引量：1

7

作者 聂小维 孙立军 +2 位作者 郝跃文 杨广笑 王全颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期278-280,283,共4页

目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF... 目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。 展开更多

关键词 低氧反应元件(HRE) 重组腺伴随病毒 载体 低氧诱导

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低氧反应元件对低氧复氧状态下心肌细胞转染人血管内皮生长因子_(165)基因表达的调控作用 被引量：8

8

作者 张中明 姜波 +1 位作者 董红燕 张宜乾 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1510-1512,共3页

目的研究9拷贝低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞转染人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞进行培养,将在 HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。心肌细胞分为8组,... 目的研究9拷贝低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞转染人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞进行培养,将在 HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。心肌细胞分为8组,采用无血清培养基,分别在低氧(氧浓度5％)、正常氧(氧浓度21％)条件进行培养,取低氧／复氧不同时段的心肌细胞或培养液,采用细胞免疫荧光法、ELISA法分别测定心肌细胞及培养液中hVEGF165蛋白表达情况;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定心肌细胞hVEGF165 mRNA的表达。结果病毒转染率约为87％;转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P<0．01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR结果亦显示,转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)可见484 bp目的条带。结论在低氧状态下,9 拷贝HRE作为氧敏感调控开关,可促使心肌细胞转染的hVEGF165基因高度表达,而在复氧(正常氧浓度)状态下,hVEGF165因的表达即行中止。 展开更多

关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 心肌细胞 基因调控 基因表达

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低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用 被引量：2

9

作者 董红燕 姜波 +3 位作者 张中明 王伟 张宜乾 徐夏红 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1095-1097,共3页

目的观察低氧反应元件（HRE）对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞，采用不同氧条件进行培养；建立猪心肌缺血-复灌动物模型，将在HEK293T细胞包装后... 目的观察低氧反应元件（HRE）对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞，采用不同氧条件进行培养；建立猪心肌缺血-复灌动物模型，将在HEK293T细胞包装后获得的rAVV-9HRE-hVEGF165病毒分别转染心肌细胞及动物缺血心肌。取培养心肌细胞及培养液，另取缺血区心肌组织，采用细胞免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot方法分别测定hVEGF砌蛋白表达；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定hVEGF165 mRNA表达；Ⅷ因子染色，计数缺血心肌新生血管变化。结果病毒转染率为87％；心肌细胞A、B及E组培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高（P〈0．01），细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性；RT-PCR检测显示，心肌细胞A、B及E组可见484bp目的条带；在动物整体水平，与转基因缺血组比较，转基因复灌组hVEGF165 mRNA及蛋白表达显著减弱（P〈0．01），心肌毛细血管密度亦减少。结论HRE作为氧敏感基因调控开关能有效地调控缺血心肌转染hVEGF165基因的表达。 展开更多

关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 心肌 基因表达

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低氧反应元件操控血管内皮细胞生长因子表达协同骨骼肌成肌细胞移植治疗急性心肌梗死 被引量：1

10

作者 刘成硅 徐磊 +2 位作者 张凯伦 夏家红 洪昊 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2051-2053,共3页

目的观察pcDNA3．1／血管内皮细胞生长因子（VEGF）及pEGFP—C3-9低氧反应元件（HRE）-MV-VEGF的骨骼肌成肌细胞移植对急性心肌梗死的治疗作用。方法建立急性心肌梗死模型，分别将无血清培养基（A组）、未转染骨骼肌成肌细胞（B组）、转... 目的观察pcDNA3．1／血管内皮细胞生长因子（VEGF）及pEGFP—C3-9低氧反应元件（HRE）-MV-VEGF的骨骼肌成肌细胞移植对急性心肌梗死的治疗作用。方法建立急性心肌梗死模型，分别将无血清培养基（A组）、未转染骨骼肌成肌细胞（B组）、转染pcDNA3．1／VEGF的成肌细胞（C组）以及转染pEGFP-C3-9HRE—CMV—VEGF的成肌细胞（D组）注射到梗死区，4周后检测死亡率、心脏功能、心肌梗死面积、移植细胞形态、梗死区VEGF的表达及毛细血管密度的变化。结果术后4周死亡率C（10．0％）、D（13．3％）组与B组（26．7％）差异有统计学意义（P〈0．01）。C组（32．9±1．4）％、D（33．1±1．4）％组心脏功能指标及心肌梗死面积均好于A组（44．54-1．7）％、B组（38．2±1．5）％（P〈0．01）。B、C、D组染色结果可见新生骨骼肌样组织。C、D组VEGF灰度值均明显低于A、B组（P〈0．01）。C、D组毛细血管数目明显多于A、B组（P〈0．01）。结论转基因骨骼肌成肌细胞移植后对急性心肌梗死的治疗作用明显优于对照组及未转染成肌细胞，移植后转基因成肌细胞分泌VEGF明显增强，可以促进血管发生与形成，从而有效的建立一种有助于移植细胞增殖、分化和形成功能的微环境，证明了转基因骨骼肌成肌细胞移植治疗心肌梗死的可行性。 展开更多

关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 基因治疗 细胞移植 急性心肌梗死

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低氧反应元件对大鼠骨骼肌成肌细胞转染表达血管内皮生长因子基因的调控作用

11

作者 徐磊 张凯伦 +1 位作者 谢艾妮 夏家红 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期441-444,共4页

目的:研究低氧反应元件(HRE)对血管内皮生长因子(VEGF)基因121在原代培养大鼠骨骼肌成肌细胞中转染表达的调控作用。方法:利用分子生物学方法,构建pEGFP-C3-9HRE-CMV-VEGF121载体,通过脂质体介导将其转染到原代培养的大鼠骨骼肌成肌细... 目的:研究低氧反应元件(HRE)对血管内皮生长因子(VEGF)基因121在原代培养大鼠骨骼肌成肌细胞中转染表达的调控作用。方法:利用分子生物学方法,构建pEGFP-C3-9HRE-CMV-VEGF121载体,通过脂质体介导将其转染到原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞中。在不同低氧浓度及不同缺氧时间下培养,通过RT-PCR、Western-Blot及荧光显微镜检测转基因成肌细胞的基因表达情况。结果:低氧浓度组可见明显目的基因条带,且随着氧浓度的降低及缺氧时间的延长,目的基因表达增强;低氧环境下,转染后的成肌细胞表达VEGF121蛋白产物明显增加;低氧环境下可见报告基因EGFP表达,常氧环境下未见报告基因表达。结论:以多拷贝HRE构建低氧启动子插入VEGF基因上游,可作为控制VEGF基因表达的开关,这对于防止VEGF基因转染的成肌细胞移植后VEGF基因过度表达所引起的安全问题,提高基因治疗的安全性有重要意义。 展开更多

关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 转染 骨骼肌成肌细胞

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低氧反应元件荧光素酶报告载体的构建及鉴定

12

作者 屈野 陈晓 +3 位作者 杨静 郭小芹 李玲 王越 《武警后勤学院学报（医学版）》 CAS 2015年第12期942-945,共4页

【目的】构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达。【方法】化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入p GL3-BASIC,经PC... 【目的】构建低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)荧光素酶报告载体,以检测和分析细胞内低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF-1)表达。【方法】化学合成HRE的核心启动子序列(6×HRE),将其定向克隆入p GL3-BASIC,经PCR、酶切和测序鉴定,获得p GL3-HRE荧光素酶报告载体;然后以p GL3-HRE和β-gal DNA共转染MG63细胞,通过物理和化学低氧来检测其活性,并western blotting分析转染细胞HIF-1表达水平。【结果】获得了p GL3-HRE荧光素酶报告载体,PCR、酶切和测序鉴定均与预期一致;物理低氧(1%O2)和化学低氧(不同浓度Co Cl2)均可诱导转染MG63细胞荧光素酶表达水平的升高(P<0.05),其中以Co Cl(3002μmol/L)组最为显著,western blotting结果也显示Co Cl2(300μmol/L)组HIF-1表达水平更为显著(P<0.05),与荧光素酶表达趋势一致。【结论】成功构建了HRE荧光素酶报告载体,为进一步研究HIF-1的表达调控作用及筛选抗低氧药物提供了工具。 展开更多

关键词 低氧诱导因子 低氧反应元件 荧光素酶 报告基因

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低氧诱导因子-1／低氧反应元件通路在心肌保护中的研究进展 被引量：2

13

作者 周雯静 王海英 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2016年第3期243-247,共5页

背景低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）是目前公认的在缺氧状态下发挥重要作用的核转录因子，其活化后可介导低氧反应保护作用，在一定程度上能够减轻心肌的缺血／再灌注损伤（ischemic reperfusion injury，I／RI）... 背景低氧诱导因子-1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）是目前公认的在缺氧状态下发挥重要作用的核转录因子，其活化后可介导低氧反应保护作用，在一定程度上能够减轻心肌的缺血／再灌注损伤（ischemic reperfusion injury，I／RI）.目的探究HIF-1/低氧反应元件（hypoxiaresponse element，HRE）通路是如何被激活并发挥心肌保护的作用。内容从HIF—I的概述、调节以及HIF-1／HRE通路的激活机制及其心肌保护作用方面进行综述，并以HIF-1为靶点探究后处理的心肌保护作用的机制，对其在心肌保护作用中与其他关键性的转录因子之间的内在联系作一简要综述。趋向后处理能否激活HIF-1／HRE通路诱导红细胞生成素（erythropoietin，EPO）、血红素加氧酶1（hemeoxygenasel，HO-1）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等保护性蛋白的表达，以减轻心肌I／RI，尚需进一步探讨。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1 低氧反应元件 心肌 缺血/再灌注损伤

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低氧诱导人VEGF基因表达载体的构建及其蛋白表达检测 被引量：2

14

作者 殷爱红 武文琦 +1 位作者 何丽明 郑少鹏 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第52期48-50,I0002,共4页

目的以人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因的低氧反应元件(HRE)作为增强子,构建含HRE的真核表达载体,探讨含HRE不同拷贝数的载体对低氧的反应状态。方法将人工合成的HRE串联后与CMV启动子连接,替换pcDNA3.1的启动子部分,构建成低氧诱导... 目的以人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因的低氧反应元件(HRE)作为增强子,构建含HRE的真核表达载体,探讨含HRE不同拷贝数的载体对低氧的反应状态。方法将人工合成的HRE串联后与CMV启动子连接,替换pcDNA3.1的启动子部分,构建成低氧诱导真核表达载体;将hVEGF基因重组到此载体中,转染BHK细胞。用免疫组化染色法检测VEGF的表达,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测低氧前后细胞hVEGF表达的变化。结果成功构建了含HRE的低氧诱导真核表达载体4HRE-pcDNA-VEGF和6HRE-pcDNA-VEGF。转染细胞后进行低氧培养,VEGF的表达均增高,含6HRE的低氧诱导作用高于4HRE。结论在含HRE的真核表达载体中,低氧时可诱导基因的表达,其拷贝数可影响诱导作用的强度。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子 低氧反应元件 真核表达载体 血管内皮细胞生长因子

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低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究

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作者 裴静娴 莫沛 王月刚 《广州医药》 2023年第1期25-29,共5页

目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技... 目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。 展开更多

关键词 低氧 p53RFP 启动子 低氧反应元件

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低氧诱导因子调控肾透明细胞癌进程的分子机制研究进展 被引量：1

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作者 陈延萍 吴果 +2 位作者 马孟丹 杨育宾 陈巍 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第10期1641-1645,共5页

肾透明细胞癌(ccRCC)是泌尿系统最常见的肾恶性肿瘤之一,低氧诱导因子(HIF)在大多数肾透明细胞癌中高表达,是肿瘤生长过程中关键的调节因子。HIF通过与低氧反应元件(HER)结合介导其下游多个靶基因的转录,从而调控ccRCC发生、发展及多种... 肾透明细胞癌(ccRCC)是泌尿系统最常见的肾恶性肿瘤之一,低氧诱导因子(HIF)在大多数肾透明细胞癌中高表达,是肿瘤生长过程中关键的调节因子。HIF通过与低氧反应元件(HER)结合介导其下游多个靶基因的转录,从而调控ccRCC发生、发展及多种生物学行为。本文主要围绕HIF基因对ccRCC的调控作用及机制进行综述,以期进一步明确其对基础医学的科学价值及对临床研究的指导作用。 展开更多

关键词 肾透明细胞癌 低氧诱导因子 低氧反应元件 调控机制

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pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定 被引量：2

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作者 苏燕 李宏伟 +1 位作者 张静 修瑞娟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2006年第11期1220-1223,共4页

目的构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证。方法按照人促红细胞生成素(EPO)基因3′末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3′末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有M luⅠ和BglⅡ酶切位点的... 目的构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证。方法按照人促红细胞生成素(EPO)基因3′末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3′末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有M luⅠ和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体。构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-H IF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoC l2)作用24h后测定报告基因的活性。结果质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoC l2及pcDNA3-H IF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P<0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P<0.01)。结论pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(H IF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中H IF-1的表达及蛋白活性。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1Α 低氧反应元件 质粒构建 基因表达

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两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒获得及鉴定 被引量：2

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作者 魏强 李凡 +2 位作者 王健伟 郭丽 洪涛 《中国实验诊断学》 2004年第2期132-134,共3页

目的　构建及包装由全长 5 1kbAFP启动子和低氧反应元件 (HRE)与 0 3kbAFP启动子两者组合的杂合0 3kbAFP启动子控制下表达HIVvpr基因的两种重组非复制型腺病毒。方法　采用细菌内同源重组腺病毒载体制备方法和PacI酶切、PCR、Souther... 目的　构建及包装由全长 5 1kbAFP启动子和低氧反应元件 (HRE)与 0 3kbAFP启动子两者组合的杂合0 3kbAFP启动子控制下表达HIVvpr基因的两种重组非复制型腺病毒。方法　采用细菌内同源重组腺病毒载体制备方法和PacI酶切、PCR、SouthernBlot鉴定方法。结果　构建及包装出由这两种AFP启动子控制下表达HIVvpr基因的重组非复制型腺病毒 ,经PacI酶切、PCR和SouthernBlot基因整合分析证明构建成功。结论　我们成功构建了的全长5 1kbAFP启动子和HRE与 0 3kbAFP启动子两者组合的杂合 0 3kbAFP启动子控制下表达HIVvpr基因的重组非复制型腺病毒 。 展开更多

关键词 AFP启动子 HIV VPR基因 基因表达 非复制型腺病毒 低氧反应元件 HRE 治疗

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缺氧诱导因子-1与缺氧缺血性心肌损伤 被引量：1

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作者 黄锂新 吴星恒 《江西医学院学报》 CAS 2009年第4期137-138,共2页

关键词 缺氧诱导因子-1 低氧反应元件 缺氧缺血性心肌损伤

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氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF_(165)基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定

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作者 张宜乾 张中明 +1 位作者 闫英群 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2007年第2期71-74,共4页

目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)... 目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)。分离培养S-D大鼠心肌细胞,转染rAAV,细胞固定后做免疫细胞荧光染色,检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白的表达。结果pAAV-HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定,结果与NCBI GenBank公布的人VEGF165cDNA核苷酸序列(AB021221)完全一致,含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功,可感染原代培养的大鼠心肌细胞,缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV-HRE9-hVEGF165载体,可有效转染心肌细胞,VEGF165基因的适时表达,为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒 血管内皮细胞生长因子 低氧反应元件

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