减毒鼠伤寒沙门菌体内定位分析 被引量：3

1

作者 张辉 胡茂志 +4 位作者 顾志强 焦新安 耿士忠 张晓明 潘志明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期80-84,共5页

分析减毒鼠伤寒沙门菌口服感染后在小鼠体内定位的情况。将构建的红色荧光蛋白(RFP)原核质粒pYA33-DsRed,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,重组菌命名为X4550(33-DsRed)。重组菌分别感染巨噬细胞RAW264.7和骨髓源树突状细胞(BMDC)... 分析减毒鼠伤寒沙门菌口服感染后在小鼠体内定位的情况。将构建的红色荧光蛋白(RFP)原核质粒pYA33-DsRed,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,重组菌命名为X4550(33-DsRed)。重组菌分别感染巨噬细胞RAW264.7和骨髓源树突状细胞(BMDC),并用流式细胞术检测红色荧光细胞荧光强度。此外,以不同剂量重组菌口服免疫BALB/c小鼠,并于免疫后1d、2d、3d、5d、7d取小鼠脾、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、派伊尔氏结(PP)、腹股沟淋巴结(ILN)细胞,检测各组织器官中的红色荧光阳性细胞百分率。重组菌对RAW264.7细胞和BMDC均具有良好的侵袭力。口服小鼠后,第1d,仅在MLN及PP中检测到RFP阳性细胞,其中PP中阳性细胞达到1.4%;第2d,在ILN中达到0.4%;第3d,各个组织器官中RFP阳性细胞均有上升趋势,此时在脾、肝中也检测到RFP阳性细胞。第5d,RFP阳性细胞均减少,第7d则未检测到任何RFP阳性细胞。减毒鼠伤寒沙门菌具有良好的侵袭力,其黏膜移行方式以及对免疫组织器官靶向定位性,在优化黏膜疫苗以及提高疫苗免疫效力等方面都具有重要作用。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 红色荧光蛋白 定位 黏膜免疫

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携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白活减毒鼠伤寒沙门菌口服重组DNA疫苗株的构建 被引量：3

2

作者 孙波 何苗 +6 位作者 杨骅 金晶 满晓华 龚燕芳 屠振兴 杜奕奇 李兆申 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第6期1317-1320,共4页

目的:构建携带人幽门螺杆菌(H pylori)中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)基因(napA)的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA 疫苗. 方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化... 目的:构建携带人幽门螺杆菌(H pylori)中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)基因(napA)的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA 疫苗. 方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌. 结果:重组质粒经PCR及双酶切,证实成功构建了携带HP-NAP基因的重组真核表达质粒pIRES-napA,后者成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207.所克隆435bp napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均为98%. 结论:成功构建并鉴定了携带HP-NA2P基因的重组活减毒鼠伤寒沙门菌口服DNA疫苗,为多价抗H pylori口服DNA疫苗的研制奠定了基础. 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 中性粒细胞激活蛋白 活减毒鼠伤寒沙门菌 重组DNA疫苗株 HP-NAP

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人CTLA-4Ig融合基因减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体的构建及表达 被引量：2

3

作者 周春丽 郝进 +4 位作者 唐书谦 钟白玉 吴军 贺伟峰 郝飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期243-246,共4页

目的构建能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定。方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4 Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA... 目的构建能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定。方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4 Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig,用电穿孔仪转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207。将表达质粒转染COS-7细胞,SDS-PAGE、W estern b lot检测转染细胞裂解上清中目的蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig质粒转染后48 h细胞裂解上清中,检测到CTLA-4 Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。结论成功构建了能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,并在哺乳动物细胞中成功表达有生物学活性的重组人CTLA-4 Ig蛋白。 展开更多

关键词 CTLA-4IG 减毒鼠伤寒沙门菌 真核表达载体 基因表达

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携带禽流感病毒DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门菌的免疫效力 被引量：1

4

作者 潘志明 唐丽华 +4 位作者 程宁宁 黄金林 胡青海 焦新安 刘秀梵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期125-130,共6页

将从重组质粒pVAX1-HA中扩增的HA基因和从pVAX1-HA-CpG中切出的HA-CpG基因分别克隆入pcDNA3.1(+)载体中,获得重组质粒pcDNA3.1-HA和pcDNA3.1-HA-CpG。将上述重组质粒分别转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验检测发现HA基因可在COS-7细胞... 将从重组质粒pVAX1-HA中扩增的HA基因和从pVAX1-HA-CpG中切出的HA-CpG基因分别克隆入pcDNA3.1(+)载体中,获得重组质粒pcDNA3.1-HA和pcDNA3.1-HA-CpG。将上述重组质粒分别转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验检测发现HA基因可在COS-7细胞中表达。将重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,构建成携带DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pcDNA3.1-HA)和SL7207(pcDNA3.1-HA-CpG)。将重组菌分别以5×109CFU口服免疫1日龄鸡2次,重组菌免疫组产生的小肠黏膜抗体效价与空载体组及油乳剂灭活疫苗组间存在显著差异。攻毒免疫保护结果表明,SL7207(pcDNA3.1-HA-CpG)免疫组与空载体组之间存在显著差异,而SL7207(pcDNA3.1-HA)免疫组则与空载体组间无显著差异,说明CpG可增强DNA疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 禽流感病毒 减毒鼠伤寒沙门菌 DNA疫苗 CPG 免疫效力

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HCV核心蛋白核酸疫苗转化的减毒鼠伤寒沙门菌在小鼠的免疫原性 被引量：1

5

作者 赵平 柯金山 +1 位作者 曹洁 戚中田 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期464-467,共4页

目的 :观察以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的丙型肝炎病毒 (HCV)口服型核酸疫苗在BALB C小鼠的免疫原性 ,探讨用该免疫方法预防丙型肝炎的可行性。方法 :将HCV核心蛋白真核表达质粒pcDNA3 1core(核酸疫苗 )转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,... 目的 :观察以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的丙型肝炎病毒 (HCV)口服型核酸疫苗在BALB C小鼠的免疫原性 ,探讨用该免疫方法预防丙型肝炎的可行性。方法 :将HCV核心蛋白真核表达质粒pcDNA3 1core(核酸疫苗 )转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,将重组沙门菌和pcDNA3.1core分别口服或肌注接种BALB C小鼠 ,检测小鼠的体液和细胞免疫应答及观察其安全性。结果 :口服重组沙门菌或肌注接种核酸疫苗均在小鼠诱导相似水平的抗HCV核心蛋白IgG ,但口服重组沙门菌诱导的细胞免疫应答明显强于肌注接种核酸疫苗 ,未见小鼠出现明显毒副反应。结论 :减毒沙门菌作为HCV核酸疫苗的载体能增强其诱导的细胞免疫应答 ,这为研制高效免疫、成本低廉、接种方便的HCV疫苗提供了一个新的可行途径。 展开更多

关键词 HCV 核心蛋白 核酸疫苗 转化 减毒鼠伤寒沙门菌 小鼠 免疫原性

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表达pCDR1 Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建 被引量：1

6

作者 周春丽 郝进 +5 位作者 唐书谦 钟白玉 叶庆佾 邓军 曾韦锟 郝飞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-202,共4页

目的构建表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法全基因合成pCDR1两条核苷酸链,在C端加上6-His标签,退火互补后插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pR1,将该重组质粒转入鼠沙门菌终宿主菌株X4550,获得杂合菌株X4550(pR1... 目的构建表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法全基因合成pCDR1两条核苷酸链,在C端加上6-His标签,退火互补后插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pR1,将该重组质粒转入鼠沙门菌终宿主菌株X4550,获得杂合菌株X4550(pR1)。体外诱导表达后斑点印迹鉴定表位肽的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。体外诱导后6 h细菌裂解上清液中,检测到表位肽的表达,该蛋白能与鼠抗His单克隆抗体特异结合。重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。 展开更多

关键词 pCDR1 TH表位 减毒鼠伤寒沙门菌

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携带幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建 被引量：1

7

作者 徐灿 李兆申 +7 位作者 屠振兴 杜奕奇 龚燕芳 金晶 满晓华 孙波 杨哗 许国铭 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期308-311,共4页

目的　构建含幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法　抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术从基因组DNA扩增ureB基因,克隆入pUCmT载体,检测ureB基因序列,经过酶切、连接反... 目的　构建含幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)基因重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法　抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)技术从基因组DNA扩增ureB基因,克隆入pUCmT载体,检测ureB基因序列,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,通过PCR和酶切反应进行鉴定。重组载体pIRES ureB转入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再次转入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。通过脂质体法将构建好的重组载体pIRES ureB转染COS 7细胞,SDS PAGE Western 印迹法检测pIRES ureB表达蛋白的免疫原性。结果　扩增出长约1700 bp的ureB基因,测序结果表明扩增出的ureB基因与基因库Hp ureB序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实ureB基因克隆入真核表达载体pIRES,并成功构建了Hp ureB基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,重组核酸疫苗稳定,并且Western印迹法检测到特异性的蛋白条带。结论　构建了具有免疫反应性的Hp UreB减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗,为进一步探索其体内的免疫作用奠定了基础。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 聚合酶链反应(PCR) ureB基因 WESTERN印迹法 幽门螺杆菌(Hp) Westem印迹法 SDS-PAGE 真核表达载体 重组核酸疫苗 COS-7细胞 基因组DNA 重组载体 DNA扩增 免疫反应性 基因重组

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减毒鼠伤寒沙门菌在雏鸡体内的安全性与免疫原性研究 被引量：1

8

作者 曹斌 王冬梅 +2 位作者 朱淑斌 方希修 乐国伟 《中国家禽》 北大核心 2009年第18期25-28,共4页

通过鸡接种不同剂量的SL8132、SL8786、SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s,测定其致病力与免疫效果,检测了诱导乙肝表面抗体(抗-HBs)的动态变化。结果表明减毒鼠伤寒沙门菌原菌SL8132、SL8786接种后连续观察雏鸡10d,不同剂量组的感染均未... 通过鸡接种不同剂量的SL8132、SL8786、SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s,测定其致病力与免疫效果,检测了诱导乙肝表面抗体(抗-HBs)的动态变化。结果表明减毒鼠伤寒沙门菌原菌SL8132、SL8786接种后连续观察雏鸡10d,不同剂量组的感染均未引起死亡。接种后7周,肝脏、脾脏中已没有菌落,粪便中仅有极少量的菌落。口服减毒鼠伤寒沙门菌在完成抗原呈递后即被鸡体免疫系统所清除,未发现雏鸡出现明显毒副作用。SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s疫苗诱导的抗-HBs动态检测发现,抗-HBs在免疫后水平逐渐升高,到第8周最高,此后逐渐下降。原菌SL8132与SL8786与重组菌株SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s均具有良好的安全性与免疫原性。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 雏鸡 安全性 免疫原性

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表达HCV核心蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服免疫小鼠的研究 被引量：1

9

作者 赵平 曹洁 +2 位作者 曹明媚 朱诗应 戚中田 《自然科学进展》 北大核心 2002年第9期997-1000,共4页

构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核... 构建了丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白原核表达质粒pQE-HCV,转化到减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,SDS-PAGE和Western blot检测到该重组菌能表达3种分子量的HCV核心蛋白,以该重组菌作为口服型活疫苗灌胃接种BALB/c小鼠,检测到小鼠产生的抗HCV核心蛋白IgG及迟发型超敏反应、T细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应,结果表明该重组菌能有效诱导免疫应答,尤其能高效诱导细胞免疫应答,这为研制高效免疫、成本低廉、接种方便的HCV疫苗提供了一个新的可行途径。 展开更多

关键词 HCV核心蛋白 小鼠 丙型肝炎病毒核心蛋白 减毒鼠伤寒沙门菌 口服活疫苗 免疫原性 免疫应答 基因表达 重组菌

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表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌免疫治疗作用的研究

10

作者 白杨 陈烨 +4 位作者 王继德 唱韶红 张兆山 周殿元 亚历 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第1期65-72,共8页

探讨表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)粘附素保守区 (AB)的减毒鼠伤寒沙门菌X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)的免疫治疗效果 ,以及可能的免疫治疗机制 ,以确定X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)在Hp疫苗研制中的应用价值 .建立Hp感染小鼠模型 ,在该... 探讨表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)粘附素保守区 (AB)的减毒鼠伤寒沙门菌X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)的免疫治疗效果 ,以及可能的免疫治疗机制 ,以确定X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)在Hp疫苗研制中的应用价值 .建立Hp感染小鼠模型 ,在该模型中评价X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)治疗Hp感染的效果 ,运用细菌培养法观察Hp根除率及定植量的改变 ,流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型 ,IL 2和IL 4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子 ,ELISA法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况 .结果表明 ,免疫治疗后疫苗治疗组根除率为 5 3 3% ,显著高于X4 0 72 (pYA2 4 8)和PBS对照组 (P <0 0 1 ) .未根除Hp的小鼠 ,疫苗治疗组Hp的定植密度明显低于其他两组 (P <0 0 1 ) .应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4 + /CD8+ T淋巴细胞的比值时 ,发现疫苗治疗组和鼠伤寒菌对照组的比值均显著高于PBS对照组 (P <0 0 5 ) ,而疫苗治疗组的比值又显著高于鼠伤寒菌对照组 (P <0 0 5 ) .进一步对细胞因子进行分析发现 ,与PBS对照组相比免疫治疗组和鼠伤寒菌对照组IL 2和IL 4明显升高(P <0 0 5 ) .同时 ,免疫治疗组与鼠伤寒菌对照组相比 ,IL 4增高明显 (P <0 0 5 ) .针对AB的抗体测定结果发现 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 粘附素保守区 减毒鼠伤寒沙门菌 治疗性疫苗

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三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性研究

11

作者 梁恩涛 陈杰 +4 位作者 黄小波 文心田 曹三杰 吴学婧 朱书权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期279-287,共9页

为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N... 为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N末端499—650位氨基酸)、SL7207(pVAX-S499-789)(长873bp,编码S蛋白N末端499—789位氨基酸)和前期构建的菌株SL7207(pVAXD-S1-789)(长2 367bp,编码S蛋白N末端1—789位氨基酸)的生物学特性研究,包括生长曲线测定、携带质粒的体内/外稳定性、回肠组织内的转录、在小鼠体内动态增殖规律、小鼠口服的安全性等。结果表明:SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207(pVAX-S499-789)、SL7207(pVAXDS1-789)3种口服菌株均具有较高的稳定性;携带的目的基因可在肠道组织内转录;菌株在小鼠肝、脾中增殖约5周后逐渐被机体清除;小鼠口服具有良好的安全性。本研究结果表明减毒鼠伤寒沙门菌SL7207可递呈不同长度的S基因抗原片段,为后续开展3种菌株的实际口服免疫效果比较研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 减毒鼠伤寒沙门菌 口服 生物学特性

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减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin对肿瘤细胞糖酵解的影响

12

作者 郁川 石胜丽 +4 位作者 朱文文 胡立中 宋敏杰 李静雅 张春杰 《河南农业科学》 北大核心 2023年第12期136-141,共6页

为进一步探讨重组减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin对肿瘤细胞糖酵解的影响,将重组减毒鼠伤寒沙门菌∆crp∆asdSL1344(pYA3493-SopE-Apoptin)和互补菌株∆crp∆asdSL1344(pYA3493-SopE)分别于体外感染黑色素瘤B16F10细胞,于感染后1... 为进一步探讨重组减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin对肿瘤细胞糖酵解的影响,将重组减毒鼠伤寒沙门菌∆crp∆asdSL1344(pYA3493-SopE-Apoptin)和互补菌株∆crp∆asdSL1344(pYA3493-SopE)分别于体外感染黑色素瘤B16F10细胞,于感染后12 h和24 h收集细胞,检测细胞内丙酮酸、乳酸含量以及丙酮酸激酶、己糖激酶的活性。结果显示,重组菌感染组能极显著下调丙酮酸含量(P<0.01);在感染24 h后,重组菌组乳酸含量极显著低于互补菌组和细胞对照组(P<0.01)。丙酮酸激酶和己糖激酶活性检测结果显示,重组菌组丙酮酸激酶活性和己糖激酶活性均显著低于互补菌组和细胞对照组(P<0.05)。以上结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin能抑制肿瘤细胞糖酵解的能力,通过下调丙酮酸和乳酸含量,降低丙酮酸激酶和己糖激酶活性,导致肿瘤细胞发生明显的代谢变化。 展开更多

关键词 凋亡素 糖酵解 减毒鼠伤寒沙门菌 凋亡 肿瘤细胞

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减毒鼠伤寒沙门菌对雏鸡免疫原性初步研究

13

作者 李正 张明亮 程相朝 《河南畜牧兽医（综合版）》 2018年第1期7-8,共2页

研究减毒鼠伤寒沙门菌SL1344△crp△cya株对雏鸡的免疫原性。用SL1344△crp△cya口服免疫4日龄雏鸡后，利用间接ELISA法检测雏鸡血清中IgG抗体含量，观察免疫雏鸡IgG抗体水平的动态变化。结果表明：雏鸡免疫后，与对照组相比较，免疫组... 研究减毒鼠伤寒沙门菌SL1344△crp△cya株对雏鸡的免疫原性。用SL1344△crp△cya口服免疫4日龄雏鸡后，利用间接ELISA法检测雏鸡血清中IgG抗体含量，观察免疫雏鸡IgG抗体水平的动态变化。结果表明：雏鸡免疫后，与对照组相比较，免疫组血清抗体IgG显著高于对照组。免疫组雏鸡的血清抗体IgG含量呈逐渐上升趋势，在第2～3周左右抗体IgG含量达到高峰，在免疫后的第21天开始逐渐下降。初步表明鼠伤寒沙门菌SL1344△crp△cya雏鸡有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 雏鸡 免疫原性 抗体IGG

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携带兔斯氏艾美耳球虫MIC-5基因减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗的安全性、稳定性与免疫原性 被引量：9

14

作者 孟庆玲 乔军 +3 位作者 才学鹏 闫鸿斌 田广孚 骆学农 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期659-662,共4页

对携带兔斯氏艾美耳球虫微线蛋白-5基因(MIC-5)真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验。结果显示,重组菌在109CFU剂量以下对家兔安全;连续培养30代重组菌... 对携带兔斯氏艾美耳球虫微线蛋白-5基因(MIC-5)真核表达质粒asd-pBMIC-5-IL-15的减毒鼠伤寒沙门菌X4550(X4550/asd-pBMIC-5-IL-15)进行了安全性、稳定性与免疫原性试验。结果显示,重组菌在109CFU剂量以下对家兔安全;连续培养30代重组菌,重组表达质粒可稳定存在于X4550内,具有良好的遗传稳定性;用重组菌2次免疫动物后,既能诱导机体产生抗兔斯氏艾美耳球虫抗体,也能显著增强淋巴细胞增殖水平,抗球虫指数为164.4。试验表明,减毒沙门菌介导的兔球虫调节型DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。 展开更多

关键词 斯氏艾美耳球虫 微线蛋白-5基因 减毒鼠伤寒沙门菌 免疫原性

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减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性 被引量：3

15

作者 郁川 翟崇凯 +6 位作者 廖成水 余祖华 何雷 贾艳艳 李静 张春杰 程相朝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1664-1675,共12页

为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌Δ... 为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 三型分泌系统 SOP E基因 平衡致死系统 活疫苗载体

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稳定携带TAT-Apoptin融合基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌的构建及其基本生物学特性的测定 被引量：4

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作者 陈桂华 郁川 +8 位作者 程相朝 余祖华 何雷 贾艳艳 翟崇凯 廖成水 张春杰 李银聚 尚珂 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期560-566,共7页

为构建能稳定携带TAT-Apoptin融合基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌,以pMD19-T-Apoptin为模板,PCR扩增出TAT-Apoptin融合基因,将其连接至pYA3493,构建了重组质粒pYA3493-TAT-Apoptin;然后将其电转至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd,并对该... 为构建能稳定携带TAT-Apoptin融合基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌,以pMD19-T-Apoptin为模板,PCR扩增出TAT-Apoptin融合基因,将其连接至pYA3493,构建了重组质粒pYA3493-TAT-Apoptin;然后将其电转至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd,并对该重组减毒沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定。PCR和测序结果表明,成功构建了重组质粒pYA3493-TAT-Apoptin。进一步对重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-TAT-Apoptin)研究发现,其生长速度比强毒株SL1344明显减慢,与缺失株SL1344ΔcrpΔasd及互补菌株SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493)基本一致,且能够稳定遗传TAT-Apoptin融合基因。重组菌培养上清经SDS-PAGE能检测到TAT-Apoptin蛋白条带。以上结果证明,能稳定携带TAT-Apoptin融合基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-TAT-Apoptin)构建成功,且该重组菌能分泌性表达TAT-Apoptin蛋白。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 凋亡素 抗肿瘤

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幽门螺杆菌ureB及ureB-hspA融合基因在减毒鼠伤寒沙门菌中的表达及小鼠的免疫应答 被引量：2

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作者 李勣 刘纯杰 +3 位作者 李淑琴 陶好霞 刘秀丽 张兆山 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期513-516,共4页

目的　构建H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗候选株 ,并进行初步的免疫原性分析。方法　将H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因分别克隆入pTrc99A asd质粒的多克隆位点之内。挑取单菌落质粒鉴定后 ... 目的　构建H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗候选株 ,并进行初步的免疫原性分析。方法　将H .pyloriureB单基因及ureB和hspA融合基因分别克隆入pTrc99A asd质粒的多克隆位点之内。挑取单菌落质粒鉴定后 ,分别将其电击经中间宿主X3730转入最终宿主X4 0 72 ,SDS PAGE和Westernblot检测蛋白表达。将疫苗候选株经口或鼻免疫BALB c小鼠。结果　疫苗候选株能够分别表达出相对分子质量 (Mr)为 6 4× 10 3的UreB蛋白及 77× 10 3的UreB HspA融合蛋白。在免疫BALB c小鼠的肠液和血清中可以分别检测到针对H .pylori的特异性分泌型IgA和IgG抗体。结论　构建了能够表达幽门螺杆菌UreB及UreB HspA融合蛋白的活菌疫苗候选株 ,为探索制备H .pylori口服活菌疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 ureB单基因 ureB-hspA融合基因 减毒鼠伤寒沙门菌疫苗

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携带Survivin-△3(T34A)的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗与抗肿瘤效果初探 被引量：2

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作者 陈英利 祁冬冬 +5 位作者 李翀 朴金花 张霞 苏晓杰 林雪松 张涛 《实用预防医学》 CAS 2012年第1期8-12,共5页

目的探讨携带Survivin-△3(T34A)基因的减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗对乳腺瘤MCF-7注射细胞小鼠的保护作用及其效果。方法人工合成Survivin-△3(T34A)基因,先后将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pVAX1载体,获得pVAX1-Survivin-△3(T34A)-E... 目的探讨携带Survivin-△3(T34A)基因的减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗对乳腺瘤MCF-7注射细胞小鼠的保护作用及其效果。方法人工合成Survivin-△3(T34A)基因,先后将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1和pVAX1载体,获得pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP真核表达载体,电转化至减毒鼠伤寒沙门菌;小鼠分别口服pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP转染沙门菌(实验组)、pVAX1-EGFP转染沙门菌(空质粒组)、沙门菌(对照组)和PBS(空白对照组)后,再皮下注射MCF-7乳腺癌细胞,采用Western-blotting检测Survivin-△3(T34A)蛋白水平,以及测定注射部位瘤块的体积大小。结果成功构建了真核表达载体pVAX1-Survivin-△3(T34A)-EGFP并转化到减毒鼠伤寒沙门菌得到表达;在空质粒组、细菌组、空白对照组和实验组小鼠中,肿瘤瘤块平均直径分别为(25.813±0.108)mm、(25.627±0.117)mm、(26.257±0.213)mm、(9.124±0.086)mm;实验组与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且能在血清中检测到Survivin-△3(T34A)-EGFP融合蛋白的存在。结论小鼠口服携带Survivin-△3(T34A)真核质粒的沙门菌后,能够抑制MCF-7乳腺瘤细胞的增殖和扩散。 展开更多

关键词 存活素 减毒鼠伤寒沙门菌 Survivin—△3 Survivin—△3(T34A) PVAX1

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携带幽门螺杆菌ureB和IL-2质粒DNA的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建

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作者 徐灿 李兆申 +6 位作者 杜奕奇 屠振兴 龚燕芳 金晶 孙波 杨骅 许国铭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期234-238,共5页

目的　构建编码幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (ureB)基因和小鼠IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,体外转染Cos 7细胞 ,鉴定其表达蛋白的免疫性。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)技术从H .pylor... 目的　构建编码幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (ureB)基因和小鼠IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,体外转染Cos 7细胞 ,鉴定其表达蛋白的免疫性。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)技术从H .pylori标准菌株CCUG1 7874基因组DNA扩增ureB基因 ,从重组质粒 pCIneo IL 2扩增小鼠IL 2基因 ,通过T A克隆分别插入 pUCmT载体 ,检测ureB及IL 2的核苷酸序列 ,通过酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体 pIRES ,PCR和酶切反应进行鉴定 ;重组载体 pIRES ureB和 pIRES ureB IL 2转入减毒鼠伤寒沙门菌LB50 0 0 ,抽提质粒 ,再次转入SL72 0 7,反复传代 ,鉴定核酸疫苗载体菌的稳定性。通过脂质体法将重组载体 pIRES ureB和pIRES ureB IL 2转染Cos 7细胞 ,SDS PAGE及Westernblot法检测表达蛋白的免疫性。结果　扩增出长约 1 70 0bp的ureB基因和 51 0bpIL 2 ,测序结果表明 ,扩增出的ureB基因与基因库H .pyloriureB序列一致 ,IL 2序列和小鼠的IL 2序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实ureB和IL 2基因克隆入真核表达载体 pIRES ,并成功构建了稳定的幽门螺杆菌ureB和IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,并且以Westernblot检测到特异性的相对分子质量 (Mr)为 6 6× 1 0 3的UreB蛋白? 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 质粒DNA 疫苗构建 聚合酶链式反应(PCR) H.pylori IL-2基因 编码幽门螺杆菌 Cos-7细胞 Western ureB基因 SDS-PAGE 真核表达载体 尿素酶B亚单位 pylori) 核酸疫苗 相对分子质量 BLOT检测 表达蛋白 重组载体

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携带Apoptin的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统的构建 被引量：2

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作者 石胜丽 郁川 +7 位作者 何雷 李琦 贾艳艳 廖成水 李静 程相朝 李银聚 张春杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期49-56,共8页

为研究减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin的特性,将Apoptin基因克隆入载体pYA3493-SopE,构建重组载体pYA3493-SopE-Apoptin,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,对该重组菌生长特性、生化特性、毒力和表达等特... 为研究减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统介导Apoptin的特性,将Apoptin基因克隆入载体pYA3493-SopE,构建重组载体pYA3493-SopE-Apoptin,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,对该重组菌生长特性、生化特性、毒力和表达等特性进行分析;同时将重组菌体外感染B16F10黑色素瘤细胞,分析其介导Apoptin对B16F10的作用。PCR、酶切检测表明,携带Apoptin的重组减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-SopE-Apoptin)构建成功;生物学特性分析发现,重组菌的生长特性、生化特性与缺失株ΔcrpΔasd SL1344和互补株ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-SopE)相近,与亲本株SL1344差异明显;腹腔感染重组菌的C57BL/6小鼠的LD50为1.69×10^7CFU;在重组菌培养上清和感染的B16F10细胞内均可检测到SopE-Apoptin蛋白条带。进一步研究其介导Apoptin对B16F10细胞的作用发现,重组菌可抑制该细胞增殖,且具有MOI浓度梯度和感染时间依赖性;用TUNEL法可观察到TUNEL阳性细胞;Western-blot可在重组菌感染的细胞内检测到Caspase-9凋亡信号蛋白表达。以上结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统能够介导Apoptin蛋白的分泌性表达,且能够诱导肿瘤细胞B16F10的凋亡。 展开更多

关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 Ⅲ型分泌系统 凋亡素 抗肿瘤

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