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分枝杆菌噬菌体基因组学研究概况
1
作者 刘珂君 张海鹏 王鹏 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1283-1292,共10页
分枝杆菌感染给全球带来了很大的健康负担,尤其是耐多药结核病(MDR-TB)对公共卫生和卫生安全的威胁,寻找一种有效对抗分枝杆菌感染的方法成为亟待解决的问题。分枝杆菌噬菌体是特异性感染分枝杆菌的病毒,可以通过裂解宿主菌导致其死亡... 分枝杆菌感染给全球带来了很大的健康负担,尤其是耐多药结核病(MDR-TB)对公共卫生和卫生安全的威胁,寻找一种有效对抗分枝杆菌感染的方法成为亟待解决的问题。分枝杆菌噬菌体是特异性感染分枝杆菌的病毒,可以通过裂解宿主菌导致其死亡。目前,大量的分枝杆菌噬菌体已被分离和完成全基因组测序,可以帮助我们深入了解噬菌体的遗传多样性和基因组结构,并推动其应用和发展。因此,本文综述了分枝杆菌噬菌体基因组学的一般特征及基因功能与表达,以提供分枝杆菌噬菌体治疗新思路。 展开更多
关键词 分枝杆菌感染 分枝杆菌噬菌体 基因组学 基因表达 综述文献(主题)
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分枝杆菌噬菌体Chy2的分离及生物学特性 被引量：5
2
作者 刘平 邬亭亭 +2 位作者 彭丽 郭述良 罗永艾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1176-1180,共5页
目的分离鉴定新分枝杆菌噬菌体并研究其生物学特性。方法以平板法从泥土中分离纯化噬菌体,紫外线诱导法鉴定溶原性,从噬菌斑大小、颗粒形态和限制性内切酶分析三方面比较Chy2、D29、TM4异同;以不同感染复数(MOI)扩增Chy2,测定最佳MOI;... 目的分离鉴定新分枝杆菌噬菌体并研究其生物学特性。方法以平板法从泥土中分离纯化噬菌体,紫外线诱导法鉴定溶原性,从噬菌斑大小、颗粒形态和限制性内切酶分析三方面比较Chy2、D29、TM4异同;以不同感染复数(MOI)扩增Chy2,测定最佳MOI;通过一步生长实验测出Chy2潜伏期、裂解期和裂解量;采用单斑法测定MOI的裂解谱;检测MOI在不同pH值培养基中裂解耻垢分枝杆菌mc2155的能力。结果成功分离纯化1株分枝杆菌噬菌体,命名为Chy2,其噬菌斑圆形透明,紫外线诱导法处理宿主菌后不能形成噬菌斑,头部呈椭圆形,长尾,基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ及XbaⅠ切开,大小约49 kb,与D29、TM4差异大;Chy2最佳MOI为9.58×10-5;Chy2一步生长周期为270 min,潜伏期210 min,裂解期60 min,裂解量为23;Chy2能裂解耻垢分枝杆菌mc2155、结核菌标准株H37Rv、多数临床耐药株;在7H9固体培养基pH值为5.0和7.4时,Chy2均能裂解耻垢分枝杆菌mc2155。结论 Chy2属长尾噬菌体科,基因组为双链DNA,宽噬谱广,是一种潜在的抗结核药物资源。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 耻垢分枝杆菌 结核分枝杆菌 生物学特性 耐药结核病
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以分枝杆菌噬菌体为例探索生命科学研究型教学 被引量：5
3
作者 樊祥宇 何颖 谢建平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期842-846,共5页
综合多学科技术手段研究生物体系复杂问题,是目前生物医学研究的显著特征之一,这为本科生教学改革提出了新的更高的要求。噬菌体是开展生命科学研究型教学改革的理想生物材料。文章借鉴美国匹斯堡大学牵头的美国大学生物学教学改革项目&... 综合多学科技术手段研究生物体系复杂问题,是目前生物医学研究的显著特征之一,这为本科生教学改革提出了新的更高的要求。噬菌体是开展生命科学研究型教学改革的理想生物材料。文章借鉴美国匹斯堡大学牵头的美国大学生物学教学改革项目"噬菌体猎人"的实践,总结了本课题组近5年来将分枝杆菌噬菌体科研成果转化为本科生命科学研究型教学的经验。 展开更多
关键词 生物学 研究型教学 噬菌体 分枝杆菌噬菌体
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不同类型土壤中分枝杆菌噬菌体分离率的比较 被引量：2
4
作者 徐凤宇 苏胜兵 +7 位作者 马红霞 高云航 么乃全 康元环 刘洪岩 周鹏 陆承平 刘永杰 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期4616-4622,共7页
为了解分枝杆菌噬菌体在自然界的生存环境,深入研究噬菌体在微生态环境中的作用奠定基础。以含柠檬酸和磷酸氢二钠的溶液为提取剂,从50份不同性质土壤中分离、纯化分枝杆菌噬菌体,电镜观察初步确定其分类;统计分析土壤类型、酸碱度、含... 为了解分枝杆菌噬菌体在自然界的生存环境,深入研究噬菌体在微生态环境中的作用奠定基础。以含柠檬酸和磷酸氢二钠的溶液为提取剂,从50份不同性质土壤中分离、纯化分枝杆菌噬菌体,电镜观察初步确定其分类;统计分析土壤类型、酸碱度、含水量、阳离子交换量、有机碳含量对噬菌体分离率的影响。共分离纯化到13株尾病毒目肌尾病毒科的分枝杆菌噬菌体。3种类型土壤的分枝杆菌噬菌体分离率分别为暗棕壤(41.2%)>黄棕壤(25.0%)>褐土(16.7%);土壤pH值、含水量、阳离子交换量对分离率影响呈规律性:pH值和含水量分别在7.45—7.95和13.7%—21.7%时分离率最高;当阳离子交换量为20.8—28.6 cmol/kg时,分离率随之升高而升高;未见有机碳含量对分离率的影响有明显规律。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 土壤 分离率
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分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征 被引量：2
5
作者 江莉莎 邬亭亭 +1 位作者 刘平 郭述良 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期506-511,共6页
目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用P... 目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口。采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树。结果噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm。其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株。Leo基因组全长39 981bp,GC含量66.86%,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区。Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高。结论噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体Leo 基因组 结核分枝杆菌
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小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29生物安全性的初步研究 被引量：3
6
作者 高健齐 廖云君 傅冰川 《医学综述》 2010年第15期2397-2399,共3页
目的探讨小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29的生物安全性,及噬菌体D29在小鼠肺组织中的活性变化规律,旨在为临床治疗肺结核提供一新途径。方法 8只小鼠分成两组,实验组4只超声雾化吸入分枝杆菌噬菌体D29,对照组4只超声雾化吸入空... 目的探讨小鼠超声雾化吸入结核分枝杆菌噬菌体D29的生物安全性,及噬菌体D29在小鼠肺组织中的活性变化规律,旨在为临床治疗肺结核提供一新途径。方法 8只小鼠分成两组,实验组4只超声雾化吸入分枝杆菌噬菌体D29,对照组4只超声雾化吸入空白培养基,观察不同时间肺的组织学改变,并检测不同时间肺组织冲洗液中噬菌体D29的活性。结果小鼠超声雾化吸入噬菌体D29后1、2、3、24h与对照组比较,肺组织结构正常,无任何炎症性改变,肺组织冲洗液中噬菌体D29活性1h后开始急剧下降,24h后无活性。结论小鼠超声雾化吸入噬菌体D29具有较高的生物安全性,噬菌体D29在小鼠肺内的存活具有高度时间依赖性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌噬菌体D29 超声雾化吸入 生物安全性
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重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究 被引量：1
7
作者 吕斌 徐顺清 +3 位作者 符志军 陈志飞 李开赏 周宜开 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期108-112,共5页
采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝... 采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件 .结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核分枝杆菌的发光值最低 ;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40 ,差异显著 .因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌 ,但Phage 88的效果优于Phage 40 . 展开更多
关键词 重组分枝杆菌噬菌体 生物发光 结构分枝杆菌 结构病
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分枝杆菌噬菌体的分子生物学研究进展及其应用 被引量：1
8
作者 刘文 胡巍 王洪海 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期58-62,共5页
关键词 分枝杆菌噬菌体 超感染免疫性 重组BCG疫苗
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分枝杆菌噬菌体DNAⅢ生物学特性及其抗耐药结核潜力 被引量：1
9
作者 邬亭亭 刘平 +2 位作者 郭术良 魏强 罗永艾 《西部医学》 2018年第9期1264-1268,共5页
目的研究分枝杆菌噬菌体DNAⅢ的生物学特性及抗耐结核潜力,筛选鸡尾酒疗法配方噬菌体。方法采用双层琼脂培养法制备噬菌体DNAⅢ,观察噬菌斑特点;透射电镜观察DNAⅢ形态;噬菌斑实验检测DNAⅢ最佳和最小感染复数(MOI);通过一步生长曲线实... 目的研究分枝杆菌噬菌体DNAⅢ的生物学特性及抗耐结核潜力,筛选鸡尾酒疗法配方噬菌体。方法采用双层琼脂培养法制备噬菌体DNAⅢ,观察噬菌斑特点;透射电镜观察DNAⅢ形态;噬菌斑实验检测DNAⅢ最佳和最小感染复数(MOI);通过一步生长曲线实验确定DNAⅢ潜伏期及裂解量;检测DNAⅢ对温度、酸碱度的耐受情况;检测DNAⅢ对分枝杆菌的裂解谱;血清中和实验检测DNAⅢ的抗原性,及其与其它8种分枝杆菌噬菌体之间的亲缘关系。结果 DNAⅢ噬菌斑圆形透明,直径约1mm;DNAⅢ尾长(208±28.7)nm;最佳MOI为10-4,DNAⅢ对耻垢分枝杆菌极度易感;DNAⅢ感染宿主菌的潜伏期约为165min,裂解量为28;DNAⅢ对热、酸碱均敏感;DNAⅢ能裂解耻垢分枝杆菌、结核分支杆菌标准株、多数结核分枝杆菌临床耐药株;DNAⅢK值为770.01,抗血清对非对应噬菌体的中和活性差。结论 DNAⅢ抗原性低,裂解谱广,具有抗耐药结核作用,可作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体DNAⅢ 生物学特性 耐药结核分枝杆菌
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分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其机制
10
作者 张红梅 梁梅 +2 位作者 刘平 乌亭亭 郭述良 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期230-235,共6页
目的:探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其在被吞噬了结核菌的巨噬细胞吞噬后分布于结核菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及临床治疗剂量的确定提供参考。方法:将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解... 目的:探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其在被吞噬了结核菌的巨噬细胞吞噬后分布于结核菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及临床治疗剂量的确定提供参考。方法:将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解,测定D29滴度,同时在加入D29 12 h后收集细胞上清液,ELISA法检测一氧化氮(NO)和白细胞介素12(IL-12)水平;将D29加入到已吞噬结核菌的巨噬细胞中,于不同时间采用荧光定量PCR测定D29在结核菌内外分布的滴度。结果:1×108噬菌斑形成单位(PFU)D29加入巨噬细胞后,20 min时有2.5×104PFU被巨噬细胞吞噬,180 min后D29大量失活,190 min时巨噬细胞内已无存活的D29;细胞上清液中NO和IL-12水平与巨噬细胞空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显少于LPS阳性对照组(P<0.05);D29与吞噬了结核菌的巨噬细胞作用30 min时,即有D29进入结核菌内,作用40和50 min时,D29在结核菌内外滴度均有一过性升高,此后结核菌内外滴度均下降;作用190和210 min时D29量大幅度减少,48 h后几乎不能检测到D29。结论:D29被巨噬细胞吞噬后会失活,并且不影响巨噬细胞的免疫功能;D29能够进入被巨噬细胞吞噬的结核菌中,开始时随着时间延长结核菌中的D29数量增多;随后D29数量大量减少,最后消失。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 巨噬细胞 结核分枝杆菌
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应用分枝杆菌噬菌体试剂盒检测结核杆菌 被引量：1
11
作者 李志勇 浦永兰 《中国交通医学杂志》 2005年第6期696-696,共1页
目的:评价分枝杆菌噬菌体试剂盒(fastplaqueTBTM)对结核病的诊断价值。方法:应用fastplaqueTB法及涂片法分别检测结核病患者的临床标本。结果:45份结核标本中fastplaqueTB法阳性25份(55.6%),涂片法阳性13例(28.9%)。结论:FastplaqueTB... 目的:评价分枝杆菌噬菌体试剂盒(fastplaqueTBTM)对结核病的诊断价值。方法:应用fastplaqueTB法及涂片法分别检测结核病患者的临床标本。结果:45份结核标本中fastplaqueTB法阳性25份(55.6%),涂片法阳性13例(28.9%)。结论:FastplaqueTB法能快速简便、高效地检测结核分枝杆菌,可作为结核病诊断的重要方法。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 结核分枝杆菌 快速诊断
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分枝杆菌噬菌体整合及裂解的分子机理 被引量：2
12
作者 申严杰 胡昌华 +1 位作者 王洪海 谢建平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期808-811,共4页
结核病仍旧威胁着全球人类健康,中国是结核病高发国家之一,寻求新的药物和疫苗势在必行。随着对噬菌体研究的深入,分枝杆菌噬菌体成为结核病新型药物发现和药敏实验的研究热点之一。噬菌体进入宿主菌体内,以裂解和溶源两种途径进入循环... 结核病仍旧威胁着全球人类健康,中国是结核病高发国家之一,寻求新的药物和疫苗势在必行。随着对噬菌体研究的深入,分枝杆菌噬菌体成为结核病新型药物发现和药敏实验的研究热点之一。噬菌体进入宿主菌体内,以裂解和溶源两种途径进入循环。以分枝杆菌的溶源性噬菌体为例,综述了分枝杆菌噬菌体整合和裂解分子机理。分枝杆菌溶源性噬菌体的整合需噬菌体基因组的附着位点attachment site(attP),宿主菌分枝杆菌基因组的附着位点attachment site(attB),整合酶integrase(Int)和整合宿主因子integration host factor(mIHF)。部分溶源性噬菌体如Ms6进入裂解循环,复制转录组装成新的子代噬菌体,在裂解素(Lysin)和穿孔素(Holin)的协同作用下裂解宿主菌,释放子代噬菌体。目前国内未见对分枝杆菌噬菌体的研究报道。研究分枝杆菌噬菌体整合及裂解机理对结核病治疗新药开发有一定的启示。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 整合 裂解
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分枝杆菌噬菌体在抗结核研究中的作用 被引量：3
13
作者 滕铁山 谢建平 +1 位作者 李彦章 吉爱玲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期827-835,共9页
分子杆菌噬菌体是其宿主分枝杆菌的病毒,前者对于结核病控制及临床结核菌诊断有良好的应用前景。目前已有超过1000株分枝杆菌噬菌体进行了全基因组测序,结果显示分枝杆菌噬菌体基因组具有丰富的多样性和镶嵌结构,且都编码有噬菌体裂解... 分子杆菌噬菌体是其宿主分枝杆菌的病毒,前者对于结核病控制及临床结核菌诊断有良好的应用前景。目前已有超过1000株分枝杆菌噬菌体进行了全基因组测序,结果显示分枝杆菌噬菌体基因组具有丰富的多样性和镶嵌结构,且都编码有噬菌体裂解酶。裂解酶是噬菌体在感染宿主末期表达的蛋白,其能水解细胞壁以释放子代噬菌体。除裂解酶外,分枝杆菌噬菌体还编码其它有抗结核活性的多肽及蛋白。分枝杆菌噬菌体在临床耐药结核菌的检测中也发挥了巨大作用。本文综述了来源于分枝杆菌噬菌体的多肽与蛋白的抗结核活性,并系统阐述了分枝杆菌噬菌体在临床结核菌耐药性检测中的应用,并展望了工程噬菌体在杀死耐药病原菌研究中的应用前景。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 抗菌蛋白 结核菌检测
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分枝杆菌噬菌体的研究现状及应用进展 被引量：2
14
作者 杜毓 张海鹏 王鹏 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第9期897-903,共7页
结核病、麻风病、布鲁里溃疡等一系列分枝杆菌感染性疾病已成为亟待解决的严峻问题,然而耐药分枝杆菌的出现,加剧了临床领域对此类疾病治疗的困难。分枝杆菌噬菌体在分枝杆菌感染引起疾病的诊断与治疗中逐渐彰显出巨大的潜力。笔者对分... 结核病、麻风病、布鲁里溃疡等一系列分枝杆菌感染性疾病已成为亟待解决的严峻问题,然而耐药分枝杆菌的出现,加剧了临床领域对此类疾病治疗的困难。分枝杆菌噬菌体在分枝杆菌感染引起疾病的诊断与治疗中逐渐彰显出巨大的潜力。笔者对分枝杆菌噬菌体的表型、基因组学及其应用现状等进行归纳总结,为分枝杆菌噬菌体进一步的研究和临床应用提供参考。 展开更多
关键词 分枝杆菌感染 抗药性 分枝杆菌噬菌体 综述文献(主题)
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分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响
15
作者 熊欣 甘易玲 +3 位作者 徐莉 江莉莎 张莉 郭述良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1202-1206,共5页
目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测... 目的:探讨不同滴度的分枝杆菌噬菌体Chy3对人气道上皮细胞16HBE生长及功能的影响。方法:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞后,采用倒置显微镜观察细胞生长形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子分泌水平,RT-PCR和Western blot分别检测上皮细胞黏蛋白MUC5AC mRNA和蛋白表达水平。结果:不同滴度噬菌体Chy3作用于人气道上皮细胞一段时候后,细胞的生长形态、存活率、凋亡率、细胞因子分泌水平以及黏蛋白MUC5AC表达与正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:分枝杆菌噬菌体Chy3无论高低滴度对体外培养人气道上皮细胞生长和功能均无明显影响,有较好的安全性。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 人气道上皮细胞 安全性 白细胞介素-6/白细胞介素-8 MUC5AC
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分枝杆菌噬菌体CJAUS 5株lysA基因的克隆与表达
16
作者 蒋依倩 宋磊 +3 位作者 齐宇 姜秀云 高云航 徐凤宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期22-24,共3页
为了研究分枝杆菌噬菌体裂解酶lys A的生物学特性及对宿主菌的作用,对分枝杆菌肌尾噬菌体CJAUS5的lys A基因进行PCR扩增、克隆和原核表达,并利用生物信息软件对其序列进行分析。结果显示,CJAUS5-lys A基因与Gen Bank中分枝杆菌肌尾噬菌... 为了研究分枝杆菌噬菌体裂解酶lys A的生物学特性及对宿主菌的作用,对分枝杆菌肌尾噬菌体CJAUS5的lys A基因进行PCR扩增、克隆和原核表达,并利用生物信息软件对其序列进行分析。结果显示,CJAUS5-lys A基因与Gen Bank中分枝杆菌肌尾噬菌体的lys A基因具有高度同源性;克隆基因在大肠杆菌BL21中获得了成功表达,重组蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为52 k Da;lys A蛋白保守区域分析结果显示,lys A包含具有酰胺酶活性的肽聚糖识别蛋白(PGRP)超家族,表明Lys A可能具有裂解肽聚糖的能力。本研究克隆表达出分枝杆菌噬菌体CJAUS5裂解酶Lys A,为进一步研究其相关功能奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 lysA基因 克隆 原核表达
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分枝杆菌噬菌体重组体TM4-RpfE的构建
17
作者 杜丽娟 杨婷 +4 位作者 徐莉 邢爱英 刘忠泉 张宗德 郭述良 《上海交通大学学报（医学版）》 CSCD 北大核心 2017年第7期930-935,共6页
目的·构建分枝杆菌噬菌体(TM4)与复苏促进因子(Rpf)的重组体(TM4-RpfE),为联合抗结核药物实现杀灭结核休眠菌、缩短结核化疗疗程奠定实验基础。方法·电转化法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,制备重组工程菌;提取TM4基因组DNA;重... 目的·构建分枝杆菌噬菌体(TM4)与复苏促进因子(Rpf)的重组体(TM4-RpfE),为联合抗结核药物实现杀灭结核休眠菌、缩短结核化疗疗程奠定实验基础。方法·电转化法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,制备重组工程菌;提取TM4基因组DNA;重叠PCR扩增目的融合基因hsp60-RpfE,多步重叠PCR扩增插入长片段HHRH(homologous+hsp60-RpfE+homologous);电转化法将噬菌体DNA与插入长片段HHRH共同转入重组工程菌,挑取单噬菌斑进行PCR和测序验证;SDS-PAGE分析重组噬菌体的蛋白表达。结果·重叠PCR扩增出全长901 bp大小的目的融合基因hsp60-RpfE和1 873 bp大小的插入长片段HHRH;PCR验证重组后的噬菌斑,分别在955 bp和301 bp处出现特异性条带;SDS-PAGE分析显示重组型噬菌体在21 000处出现特异性蛋白条带。结论·分枝杆菌噬菌体重组体TM4-RpfE构建成功,初步验证目的基因RpfE得到表达。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 噬菌体重组 RpfE pJV53质粒 潜伏结核感染
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结核分枝杆菌噬菌体法直接药敏试验的临床应用 被引量：1
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作者 崔幸琨 田艳生 +4 位作者 杨宝财 孙莉 李红光 王江勇 张卫 《临床荟萃》 CAS 2010年第6期485-488,F0002,共5页
目的探讨噬菌体微孔纸片法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对4种抗结核药物耐药性的临床应用价值。方法用噬菌体微孔纸片法检测215例痰标本中的MTB,同时检测其对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性。MTB检测结果与改良罗... 目的探讨噬菌体微孔纸片法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对4种抗结核药物耐药性的临床应用价值。方法用噬菌体微孔纸片法检测215例痰标本中的MTB,同时检测其对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性。MTB检测结果与改良罗氏培养法、噬菌体生物扩增法(PhaB法)结果进行比较,药敏试验结果与比例法、PhaB法结果进行比较。结果①微孔纸片法的MTB检测阳性率33.0%,改良罗氏培养法32.8%,PhaB法34.8%。以改良罗氏培养法结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB的敏感度92.5%,特异度为94.9%,准确度94.1%,阳性预测值(PPV)为89.9%,阴性预测值(NPV)为96.3%。②微孔纸片法直接药敏试验成功率21.5%,涂阳痰标本成功率73.8%,均为痰菌(++)及以上标本。以比例法药敏结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB对4种药物耐药性的敏感度、特异度、PPV、NPV和准确度分别为:(链霉素)91.7%、90.9%、78.6%、96.8%和91.1%;(异烟肼)86.7%、96.7%、92.9%、93.5%和93.3%;(利福平)89.5%、91.7%、85.0%、94.3%和88.9%;(乙胺丁醇)87.5%、86.2%、77.8%、92.6%和88.9%。结论微孔纸片法直接检测痰标本中MTB及其耐药性快速、简便、价廉,且观察结果直观,不需特殊仪器设备,适于基层医院推广应用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌噬菌体 微生物药敏性试验
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高强度荧光分枝杆菌噬菌体Ф2GFP10检测结核分枝杆菌对抗结核药物耐药性的价值
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作者 罗晶晶 于霞 +4 位作者 马异峰 赵立平 尚媛媛 付育红 黄海荣 《结核病与胸部肿瘤》 2017年第4期250-255,共6页
目的探讨高强度荧光分枝杆菌噬菌体Ф2GFP10检测MTB对抗结核药物耐药性的价值。方法选取北京胸科医院2014年4-6月疑诊耐药结核病患者的MTB临床分离株128株，用Ф2GFP10噬菌体法测定其对异烟肼、利福平和链霉素的敏感度，并以罗氏药敏试... 目的探讨高强度荧光分枝杆菌噬菌体Ф2GFP10检测MTB对抗结核药物耐药性的价值。方法选取北京胸科医院2014年4-6月疑诊耐药结核病患者的MTB临床分离株128株，用Ф2GFP10噬菌体法测定其对异烟肼、利福平和链霉素的敏感度，并以罗氏药敏试验结果为对照评价其诊断价值。采用SPSS17．0软件绘制荧光酶标仪法的受试者工作曲线，并确定临界值。结果Ф2GFP10荧光噬菌体法检测异烟肼、利福平和链霉素的敏感度分别为100．0％（62／62）、98．1％（53／54）和92．6％（50／54），特异度分别为84．8％（56／66）、91．9％（68／74）和91．9％（68／74）。噬菌体法和传统检测方法对异烟肼、利福平和链霉素耐药性检测的一致性分别为0．92、0．95和0．92。噬菌体法检测利福平和链霉素的耐药性2d即可获得结果，而异烟肼为3d。结论Ф2GFP10噬菌体法检测利福平、异烟肼和链霉素耐药的敏感度和特异度较高，且耗时短、成本低，有望成为一种快速、简便、经济的耐药结核病筛选方法。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌噬菌体
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分枝杆菌噬菌体的基础与应用进展 被引量：1
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作者 李春艳 戴宗贤 +1 位作者 李炳娴 杨延辉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期116-127,共12页
由分枝杆菌引发的相关感染仍然是全球重大公共卫生问题,耐药性分枝杆菌的出现使其治疗愈发困难,寻找新的治疗方案迫在眉睫。在抗耐药菌方面,噬菌体的研究已经取得了显著进展。自然界中的噬菌体数量庞大,目前已有超过2 400株分枝杆菌噬... 由分枝杆菌引发的相关感染仍然是全球重大公共卫生问题,耐药性分枝杆菌的出现使其治疗愈发困难,寻找新的治疗方案迫在眉睫。在抗耐药菌方面,噬菌体的研究已经取得了显著进展。自然界中的噬菌体数量庞大,目前已有超过2 400株分枝杆菌噬菌体的基因组被测序,结果显示分枝杆菌噬菌体的基因组具有丰富的多样性和嵌合结构,其编码的抗结核活性多肽及蛋白质等物质在分枝杆菌感染引起的疾病诊断与治疗中具有巨大应用潜力。在实际应用中,噬菌体既可以直接治疗细菌感染,又可以作为基因编辑的递送工具。此外,噬菌体的特异性使其用于治疗时具有一定的安全性。综述了分枝杆菌噬菌体在疾病诊断、治疗和预防等方面的应用,展望了分枝杆菌噬菌体的应用前景,同时分析了其在基础应用研究中的优缺点。 展开更多
关键词 分枝杆菌噬菌体 耐药性 快速检测 治疗 噬菌体疫苗
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