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HCG嵌合肽CP12基因的构建和原核系统表达
1
作者 徐万祥 熊艳 +5 位作者 孙志达 廖矛川 顾少华 应康 刘建平 谢毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期96-97,共2页
关键词 HCG嵌合肽 CP12基因 基因构建 原核系统表达
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原核表达系统中HPV16L1蛋白的表达与纯化 被引量：3
2
作者 包广宇 谷鸿喜 +3 位作者 林道虹 庄敏 隋丽华 王静 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第2期280-283,共4页
为了建立 HPV16 L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白 ,我们构建了 p GEX4 T- HPV16 L1表达质粒。在大肠杆菌 BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8M尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果显示 ,HPV16 L1蛋白... 为了建立 HPV16 L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白 ,我们构建了 p GEX4 T- HPV16 L1表达质粒。在大肠杆菌 BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8M尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果显示 ,HPV16 L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的 HPV16 L1蛋白 ,为 HPV16 展开更多
关键词 原核表达系统 HPV16 L1蛋白 纯化
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人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定 被引量：3
3
作者 庄敏 谷鸿喜 +4 位作者 孔卫兰 李迪 魏兰兰 李金梁 林道红 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-165,共3页
目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄HPV11L1,表达HPVL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质... 目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1原核表达系统pBAD(B)鄄HPV11L1,表达HPVL1蛋白,为进一步制备基因工程疫苗奠定基础。方法PCR法从尖锐湿疣组织标本中扩增人乳头瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript质粒,并测序。将其从克隆重组质粒中切下连入表达载体,建立pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达重组质粒,在大肠杆菌宿主菌Top10中,经阿拉伯糖诱导,表达融合蛋白L1,经SDS鄄PAGE电泳和Westernblot进行鉴定。结果3株HPV11L1经测序发现变异一致,每株均有2个核苷酸变异,但未影响氨基酸变化。经SDS鄄PAGE鉴定L1蛋白相对分子质量为59×103,与预期值相同,Westernblot证明表达蛋白能与单克隆抗体反应,成功构建了pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统。结论所构建的pBAD(B)鄄HPV11L1原核表达系统能够高效表达HPV11L1蛋白。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒11型 L1基因 原核表达系统 HPV11 基因表达 疫苗
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淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2
4
作者 王俊丽 陈金顶 +2 位作者 卢荣华 雒燕婷 聂国兴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期970-976,共7页
为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)... 为揭示淇河鲫(Carassius auratus var.Qihe)白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的功能,本研究构建了原核表达系统,并制备了兔抗鲫IL-8多克隆抗体。首先采用RT-PCR法扩增淇河鲫IL-8基因编码序列中不含信号肽的基因片段,克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta菌株构建原核表达系统。经IPTG诱导表达出相对分子质量约27.8 kD的目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,效价达1︰10~5。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异性识别重组和天然的淇河鲫IL-8蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR结果,IL-8蛋白量和mRNA的表达量在不同组织间变化趋势一致,在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量,肠道的表达量较低。本研究为进一步探讨淇河鲫IL-8的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 淇河鲫 白细胞介素-8 原核表达系统 多克隆抗体 组织表达 免疫组化
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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化 被引量：3
5
作者 温见翔 吴少庭 +8 位作者 陈群 秦莉 袁仕善 林绮萍 雷明军 潘晖榕 张仁利 高世同 黄达娜 《中国热带医学》 CAS 2004年第6期897-899,925,共4页
目的　构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。　方法　用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性... 目的　构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。　方法　用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a(+ ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。　结果　从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。　结论　利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ESAT-6 ET 结核分枝杆菌 原核表达系统 结核病 蛋白 纯化 重组表达质粒 阳性克隆 IPTG
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HPV 6b L1基因原核表达系统的构建及鉴定 被引量：2
6
作者 刘希君 庄敏 +4 位作者 商庆龙 王燕 魏兰兰 李迪 谷鸿喜 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期25-27,共3页
克隆、构建人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)L1基因重组质粒,并进行表达和鉴定。用PCR方法,从尖锐湿疣标本中扩增出HPV6b型L1基因,构建重组克隆质粒pblue-HPV6bL1,测序分析其基因变异。将本地株HPV6b型L1基因酶切后连接到原核表达质粒pBAD,构建... 克隆、构建人乳头瘤病毒6b型(HPV6b)L1基因重组质粒,并进行表达和鉴定。用PCR方法,从尖锐湿疣标本中扩增出HPV6b型L1基因,构建重组克隆质粒pblue-HPV6bL1,测序分析其基因变异。将本地株HPV6b型L1基因酶切后连接到原核表达质粒pBAD,构建原核表达系统pBAD-HPV6bL1/Top10,酶切鉴定证明重组质粒的正确性。经L-Arobinose诱导后表达HPV6b型L1蛋白,利用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定。经酶切及序列分析鉴定,重组质粒pBAD-HPV6bL1构建成功,诱导后能够表达L1融合蛋白。HPV6bL1重组质粒构建成功,并获得HPV6bL1蛋白,为该蛋白的功能及HPV的基因工程疫苗研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒6b型 L1基因 基因克隆 基因表达 原核表达系统 酶切鉴定 质粒构建 HPV 基因重组质粒
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葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究 被引量：1
7
作者 毛亚飞 徐水凌 +1 位作者 罗冬娇 严杰 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-558,共6页
构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SE... 构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础． 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B SEB基因/克隆 原核表达系统/构建 重组蛋白/表达 细胞毒性 淋巴细胞/增殖 肿瘤细胞/抑制
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HPV16 L1蛋白在原核表达系统中的表达与纯化
8
作者 包广宇 林道虹 +4 位作者 庄敏 隋丽华 王静 李迪 谷鸿喜 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2001年第4期235-237,共3页
目的　建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法　构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果　HPV16L1蛋白在原核... 目的　建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法　构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果　HPV16L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的蛋白。结论　建立了一套纯化HPV16L1蛋白的方法。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 原核表达系统 晚期蛋白 纯化 HPV16L1蛋白 宫颈癌
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人肝再生增强子原核表达系统的构建与筛选
9
作者 俞海英 刘骏 +1 位作者 李君 盛吉芳 《浙江预防医学》 2007年第3期5-6,18,共3页
目的构建多个人肝再生增强子(hALR)的原核表达系统进行原核表达、鉴定及筛选,得出理想的系统用于进一步的研究。方法构建4个重组表达质粒pET28a(+)/hALR、pET23a/hALR、pGEX-5x-1/hALR、pGEX-5x-2/hALR,分别转化3种宿主菌,诱导表达重组h... 目的构建多个人肝再生增强子(hALR)的原核表达系统进行原核表达、鉴定及筛选,得出理想的系统用于进一步的研究。方法构建4个重组表达质粒pET28a(+)/hALR、pET23a/hALR、pGEX-5x-1/hALR、pGEX-5x-2/hALR,分别转化3种宿主菌,诱导表达重组hALR蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westem blotting鉴定重组蛋白。结果双酶切和DNA测序证实hALR cDNA正确插入4种表达载体并成功转化宿主菌,仅pET28a(+)/hALR的BL21(DE3)菌株成功表达相对分子质量为23kDa的重组蛋白。结论筛选得出人肝再生增强子的原核表达系统,成功表达并鉴定重组hALR蛋白。 展开更多
关键词 人肝再生增强子 原核表达系统 筛选
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原核表达系统T7RNA聚合酶/启动子在真核细胞中表达目的基因的实验研究 被引量：4
10
作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 储以微 王缨 徐薇 熊思东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期182-186,共5页
将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶 启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达... 将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶 启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达系统在真核细胞高效表达目的基因 ,且能适应不同的真核细胞环境 ,是一良好的细胞类型非依赖的表达体系。 展开更多
关键词 T7 RNA聚合酶 T7启动子 原核表达系统 真核细胞
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真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果 被引量：1
11
作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 王缨 储以微 徐薇 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,15,共6页
目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核... 目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P<0·05)。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P<0·01)。结论真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。 展开更多
关键词 真核化的原核表达系统 基因免疫 HBV
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牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p20的原核表达
12
作者 王婉怡 李娅婕 +1 位作者 王桂花 韩晓东 《动物医学进展》 北大核心 2024年第10期48-52,共5页
牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合... 牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合成后克隆到pET30表达载体上。测序鉴定成功的pET30-p20表达质粒转化大肠埃希氏菌表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导获得的p20蛋白经过Ni柱、分子筛纯化。最终,经过多重缓冲溶液的筛选,p20蛋白可以稳定存在于含有5 mmol/Lβ-巯基乙醇、5%甘油、150 mmol/L氯化钠(pH8.0)的Tris-HCl缓冲液中。高纯度均一性的p20蛋白获得,为后续p20晶体学研究以及单克隆抗体的制备提供原核表达纯化方案。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 原核表达系统 分子筛 p20蛋白质
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SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达 被引量：1
13
作者 郭妍伶 成姝婷 +8 位作者 李世平 后望 杨淑红 江舟 汪宇辉 肖静 郭慧玲 刘延友 王正荣 《四川生理科学杂志》 2013年第4期145-148,共4页
目的:通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-gami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础。方法:以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina3k基因的表达全... 目的:通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-gami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础。方法:以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定。结果:原核表达载体pET-41a-Serpina3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确。结论:成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶抑制因子 原核表达系统 SERPINA3K重组蛋白
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幽门螺杆菌鞭毛蛋白B亚单位原核表达系统的构建及其产物的免疫性
14
作者 孙爱华 邵浙新 严杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期193-195,213,共4页
目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)鞭毛蛋白B亚单位 (flaB)原核表达系统 ,并鉴定其表达产物的免疫性。方法　采用PCR从幽门螺杆菌基因组DNA中扩增全长flaB基因 ,T A克隆后测定核苷酸序列 ,构建pET32a flaB表达载体 ,以E .co... 目的　构建幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)鞭毛蛋白B亚单位 (flaB)原核表达系统 ,并鉴定其表达产物的免疫性。方法　采用PCR从幽门螺杆菌基因组DNA中扩增全长flaB基因 ,T A克隆后测定核苷酸序列 ,构建pET32a flaB表达载体 ,以E .coliBL2 1DE3为表达宿主菌 ,用SDS PAGE检测重组蛋白 (rFlaB)的表达水平。采用Hp全菌抗体的Westernblot和兔抗rFlaB血清的免疫扩散试验鉴定其免疫反应性和抗原性。结果　所克隆的flaB基因与文献报道的核苷酸序列同源性为 96 .31%～ 97.73% ,氨基酸序列同源性高达 99.4 1%～ 10 0 %。构建的原核表达系统pET32a flaB E .coliBL2 1DE3的rFlaB产量为细菌总蛋白的 4 0 %左右。Hp全菌抗体能识别rFlaB。rFlaB免疫家兔能获得高效价血清抗体。结论　已成功地构建了HpflaB高效原核表达系统 ,所表达的rFlaB有良好的免疫反应性和抗原性 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 鞭毛蛋白B 基因 原核表达系统 表达载体 免疫学
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原核表达系统的真核化
15
作者 袁志刚 熊思东 《生命的化学》 CAS CSCD 2001年第2期145-146,共2页
关键词 RNA聚合酶 原核表达系统 真核化 T7噬菌体
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真核基因在pET系统中表达出现的问题与拟解决的方案 被引量：23
16
作者 张锐 孙美榕 +1 位作者 欧阳红生 张玉静 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第2期62-63,共2页
pET表达系统是以噬菌体的T7为启动子 ,可以从各种基因 (包括原核、真核细胞 )生产大量的目的蛋白[1 ] ,然而一些真核基因在pET表达系统中的蛋白表达量却很少 ,有许多因素影响真核基因在该表达系统中的表达 ,如信号肽序列、毒性基因与质... pET表达系统是以噬菌体的T7为启动子 ,可以从各种基因 (包括原核、真核细胞 )生产大量的目的蛋白[1 ] ,然而一些真核基因在pET表达系统中的蛋白表达量却很少 ,有许多因素影响真核基因在该表达系统中的表达 ,如信号肽序列、毒性基因与质粒的稳定性、mRNA转录的二级结构和稀有密码子 ,以及实际操作过程中表达条件等均会影响真核基因在pET系统中的表达。该文旨在分析其主要原因 ,并提出拟解决的方案 ,以达到满意的高效表达。 展开更多
关键词 真核基因 原核表达系统 噬菌体 启动子
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人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备 被引量：3
17
作者 陈婷梅 俸家富 +2 位作者 曹炬 文阳安 涂植光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期938-940,共3页
目的构建人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备CysC抗血清。方法从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32(a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3... 目的构建人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备CysC抗血清。方法从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32(a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA、Western blot进行检测。结果测序证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符;SDS-PAGE、Western blot结果证实获得相对分子质量为35×103的Cys C融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶8000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论获得了Cys C重组蛋白及特异性多克隆抗体。 展开更多
关键词 胱抑素C 原核表达系统 蛋白纯化 抗血清
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枯草杆菌表达系统的研究进展 被引量：29
18
作者 彭清忠 张惟材 朱厚础 《生物技术通讯》 CAS 2001年第3期220-225,共6页
枯草杆菌由于具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础 ,是目前原核表达系统中分泌表达外源蛋白较理想的宿主。本文简述枯草杆菌基因表达的一般特点、表达载体。
关键词 枯草杆菌 载体 分泌表达 原核表达系统
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犬干扰素α2的原核表达及抗病毒活性分析 被引量：5
19
作者 姚凌云 王晶宇 +8 位作者 欧阳伟 钱晶 吴世妍 夏兴霞 诸玉梅 王晓丽 潘群兴 芮荣 王永山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第2期59-63,共5页
本研究将人工合成的犬干扰素α2成熟区序列插入原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-28a-Ca IFN-α2;然后将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,分子量约为23 k Da的... 本研究将人工合成的犬干扰素α2成熟区序列插入原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-28a-Ca IFN-α2;然后将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,分子量约为23 k Da的目的蛋白表达,表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量约占菌体总蛋白的52.5%。包涵体蛋白经变性、复性和纯化处理后,获得的重组Ca IFN-α2纯度为92%;用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性为3.16×106/m L。本研究结果为进一步研制新型犬用干扰素制品奠定了物质基础。 展开更多
关键词 重组犬干扰素α2 原核表达系统 抗病毒活性
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重组人干扰素大肠杆菌高效表达系统的建立 被引量：3
20
作者 刘新宇 梁东春 +2 位作者 左爱军 郭刚 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第1期29-32,共4页
目的:构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核表达系统,以获得rhIFN-α2b在大肠杆菌中的高效表达。方法:依据大肠杆菌遗传密码子频率表,在不改变氨基酸组成的情况下,人工半合成适于在大肠杆菌中表达的rhIFN-α2b编码序列;经PCR扩增后,... 目的:构建重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)原核表达系统,以获得rhIFN-α2b在大肠杆菌中的高效表达。方法:依据大肠杆菌遗传密码子频率表,在不改变氨基酸组成的情况下,人工半合成适于在大肠杆菌中表达的rhIFN-α2b编码序列;经PCR扩增后,克隆人表达型质粒载体pDH;筛选阳性菌落,温度诱导表达,表达产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(WesternBlot)鉴定,并以人羊膜细胞-水泡性口炎病毒(WISH-VSV)系统鉴定rhIFN-α2b抗病毒活性。结果:PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定可见与预期大小符合的512bp的DNA条带;重组质粒pDH/IFN-α2b经序列分析,证实含有与预期相符且读码框架正确的hIFN-2b编码序列;SDS-PAGE可见与IFN-α2b分子质量大小一致的蛋白质条带,WesternBlot鉴定此条带为rhIFN-2b,其比活性达(1.8～2)×108U/mg。结论:rhIFN-α2b在大肠杆菌中的高效表达系统构建成功,且能高水平地表达出具有生物活性的rhIFN-α2b。 展开更多
关键词 干扰素α-2b大肠杆菌 基因表达 原核表达系统 遗传密码
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