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双抗体夹心酶联免疫吸附试验在肺炎支原体抗原检测中的建立与应用
1
作者 张凤莲 钏鸿云 +3 位作者 童菲 袁广波 李诚伟 廖国阳 《中国医药导报》 2025年第6期165-170,共6页
目的构建用于检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,并应用其检测不同耐药表型临床分离株抗原。方法鉴定抗肺炎支原体单克隆抗体4G4、8H6的抗体结合位点竞争性及结合活性;以4G4为包被抗体,8H6为酶标抗体建立双抗体... 目的构建用于检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,并应用其检测不同耐药表型临床分离株抗原。方法鉴定抗肺炎支原体单克隆抗体4G4、8H6的抗体结合位点竞争性及结合活性;以4G4为包被抗体,8H6为酶标抗体建立双抗体夹心ELISA法,优化其线性范围、稳定性、特异性、广泛适用性与准确度。结果单克隆抗体4G4、8H6具有不同的抗原结合位点,半数最大效应浓度(EC50)分别为0.4113、0.1881μg/ml;最佳反应体系为包被抗体浓度4μg/ml,酶标抗体1∶4000稀释,封闭液为含2%BSA、2%蔗糖的0.01 mol/L PBS。该方法线性范围为1~32 U,线性回归方程Y=0.0742X+0.073,R2=0.9969;批间变异系数为0.4784%~7.9613%,批内变异系数为1.6158%~13.1754%;特异性与广泛适用性佳,不与新型冠状病毒感染、流感、猴痘病毒及多种细菌交叉反应,可检测不同耐药株抗原;与肺炎支原体抗原检测商用试剂盒(ELISA法与胶体金法)检测结果符合率96.7%~103.3%。结论该双抗体夹心ELISA法线性范围优、稳定性强、特异性好、适用广、准确度高,可用于肺炎支原体疫苗生产中的抗原定量。 展开更多
关键词 肺炎支原体 双抗体夹心酶联免疫吸附试验法 抗原检测 单克隆抗体
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A型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
2
作者 周函蓉 苏世博 +8 位作者 孙明霞 蒙靓 杨巍 史鑫琪 李鑫 安同庆 蔡雪辉 王海伟 孟凡丹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1034-1042,共9页
为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5... 为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批间和批内重复性试验的变异系数均在10%以下,重复性较好。对采集的205份疑似SVA感染的猪扁桃体组织、鼻咽拭子及血清样品分别采用DAS-ELISA及RT-PCR方法检测。DAS-ELISA的检测结果显示,36份样品为阳性,169份样品为阴性;RT-PCR检测结果显示,50份样品为阳性,155份样品为阴性。经计算两种方法的阳性符合率为72%(36/50),总符合率为93%(191/205)。以上结果表明,本研究建立的DAS-ELISA适用于大规模多种临床样品的检测,为SVA的检测及流行病学调查提供技术支撑。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA方法
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检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用
3
作者 万志敏 龚简汐 +7 位作者 赵喆泓 汤婷 李亚锋 谢泉 李拓凡 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期34-39,共6页
为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检... 为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。结果显示:该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应,而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12等其他亚型禽流感病毒,血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒均无交叉反应;该ELSIA方法可检测2.32×10^(4)TCID50/mLH6亚型禽流感病毒,批间和批内重复试验变异系数均小于10%;该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品检测结果一致,进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中H6亚型禽流感病毒。研究表明,基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。 展开更多
关键词 H6亚型禽流感病毒 单克隆抗体 血凝素蛋白 双抗体夹心ELISA
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裂谷热病毒NP蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立
4
作者 郭瑶 单逢缘 +5 位作者 陆阳 陶丽红 王欣慧 蒋永伦 步志高 钟功勋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1043-1048,1056,共7页
为建立裂谷热病毒(RVFV)的快速检测方法,本研究选取RVFV高度保守的核蛋白(NP)基因,采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白(r NP),经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔,按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体(MAb)5D... 为建立裂谷热病毒(RVFV)的快速检测方法,本研究选取RVFV高度保守的核蛋白(NP)基因,采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白(r NP),经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔,按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体(MAb)5D8和兔源NP多克隆抗体(PAb)rab NP-1,经ELISA检测二者效价均为1:51200。以rab NP-1 PAb作为捕获抗体,5D8 MAb经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化后结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为1.56 mg/mL,0.2μg/孔;检测抗体浓度为1.17 mg/mL,2.24 ng/孔,初步建立RVFV双抗体夹心ELISA抗原检测方法。利用该方法分别对克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)、拉沙病毒(LSV)、新冠病毒(SARS-CoV-2)和RVFV的NP以及RVFV Gn蛋白样品进行检测,结果显示,仅RVFV NP蛋白检测结果呈阳性,其余几种病毒蛋白均为阴性,无交叉反应;利用该方法检测2倍倍比稀释(2^(1)~2^(16))的RVFV复制缺陷型灭活病毒样品,结果显示经214倍稀释后的RVFV检测结果仍为阳性,该方法对RVFV检测限为6.1×10^(-1)FFU/mL;利用同一批次和不同批次包被的ELISA板进行批内和批间重复性检测,结果显示批内和批间变异系数均小于8%。使用RVFV灭活病毒对建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行验证,结果符合预期。本研究建立的RVFV双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于RVFV的快速检测,也可为NP蛋白功能的研究提供技术支撑。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 核蛋白 双抗体夹心ELISA
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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用
5
作者 魏蔷 李青梅 +3 位作者 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期128-135,共8页
为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心ELISA
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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
6
作者 刘文健 王帅雯 +5 位作者 吉梅 刘萌 汤智辉 张硕 宋素泉 闫丽萍 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第6期101-109,共9页
旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株... 旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株;以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体,通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果:本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性,可识别不同抗原表位;进一步发现,以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体,能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法;该方法具有良好的重复性,批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高,Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好,不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上,本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体,并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法,为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用 被引量：2
7
作者 张素娥 汤益 +1 位作者 施晓华 蒋健敏 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2002年第1期44-45,共2页
目的　探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 (S- DIGFA)在现场的应用价值。方法　在原已建立的以抗 2 6 k Da GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的 S- DIGFA的基础上 ,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清... 目的　探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 (S- DIGFA)在现场的应用价值。方法　在原已建立的以抗 2 6 k Da GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的 S- DIGFA的基础上 ,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共 1388份 ,并以双抗体夹心EL ISA(S- EL ISA)作对照。结果　用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清30 0份 ,阳性检出率分别为 15 .7%和 17.3% ;两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清 10 88份 ,阳性检出率分别为 3.9%和 3.7%。结论　 S- DIGFA检测循环抗原可在现场扩大应用和作血清流行病学调查。 展开更多
关键词 26kDaGST 双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 日本血吸虫 循环抗原
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单克隆与多克隆双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体 被引量：273
8
作者 富宁 王莉 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第5期278-281,共4页
建立了灵敏的酶标双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体(sIL-2R)。主要步骤为以单抗包被,加入待检抗原,再加多克隆兔抗IL-2 R血清作用,最后加酶标羊抗兔示踪并放大其反应。本法简便、重复性好、灵敏度达100u/ml.可适用于临床与基础研究。
关键词 双抗体夹心 ELISA IL-2 受体
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双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究 被引量：27
9
作者 王新平 任文陟 +4 位作者 朱维正 李佑民 宣华 常国权 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1995年第3期246-249,共4页
建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５... 建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％～８９．０％，羊为１４．６％～８３．３％，鹿为１９．６％～４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。 展开更多
关键词 牛病毒 腹泻 双抗体夹心 ELISA 抗原
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猪轮状病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：14
10
作者 黄小波 徐璐 +3 位作者 曹三杰 文心田 曾燕 余慧 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期723-727,共5页
用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV ... 用差速离心法纯化的猪轮状病毒(RV)分别免疫仔猪和兔,制备了猪抗RV和兔抗RV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测RV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:猪抗RV IgG包被浓度为4μg/mL,兔抗RV IgG最佳工作浓度为3.5μg/mL,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1∶8 000,以D450 nm≥0.161作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为1.25μg/mL,并与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪大肠杆菌和沙门菌等病原无交叉反应,该ELISA试剂在室温和4℃条件下至少可保存4个月。用该ELISA方法和RV金标检测卡检测70份临床粪便样品,结果显示,ELISA的阳性检出率为22.9%,而金标检测卡的阳性检出率为20.0%。表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于RV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 检测 建立
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检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用 被引量：21
11
作者 汪招雄 何启盖 +3 位作者 刘丽娜 刘正飞 黄红亮 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期220-225,共6页
以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏... 以猪伪狂犬病病毒(PrV)Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体,纯化的抗PrVIgG为检测抗体,建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为,单克隆抗体576株的包被浓度为12.2μg/mL,IgG的工作浓度为16.0μg/mL,对PrV的检测灵敏度达15.6ng(0.156μg/mL),与乙型脑炎病毒(JEV)、猪瘟病毒(HCV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪流感病毒(SIV)等无交叉反应。批间和批内变异系数较小,分别为6.39%和4.1%。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测,发现二者的符合率可达到77.4%,比PCR敏感。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可广泛应用于动物组织中PrV的检测。 展开更多
关键词 双抗体夹心间接ELISA 单克隆抗体 猪伪狂犬病毒Ea株
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双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法检测相思子毒素 被引量：15
12
作者 穆晞惠 童朝阳 +3 位作者 郝兰群 许秀玲 刘冰 田艳慧 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期571-574,共4页
目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,... 目的建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法采用双抗体夹心生物素-亲和素ELISA法来检测微量abrin。结果该法检测abrin线性范围为0.125～31.25μg/L,线性回归方程为Y=0.52369X+0.51632(r=0.9816,P<0.0001,n=9),检测限为0.125μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素(SEB)对检测结果基本无干扰,表明该法检测abrin具有很好的特异性。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为2.35%～4.14%,具有较好的重现性。结论成功建立了夹心BA-ELISA法检测abrin,巧妙地将多克隆抗体的强富集能力、单克隆抗体的特异性以及生物素-亲和素系统的放大作用结合起来,达到了提高检测的灵敏度和特异性的目的,可适用于各种微量abrin样品的分析。 展开更多
关键词 相思子毒素 双抗体夹心法 生物素-亲和素 酶联免疫吸附试验
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双抗体夹心酶联免疫检测法测定蓖麻毒素 被引量：10
13
作者 杨运云 牟德海 +2 位作者 童朝阳 穆唏惠 郝兰群 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期439-442,共4页
建立了双抗体夹心酶联免疫法检测蓖麻毒素的方法。优化了最佳蓖麻毒素多克隆抗体包被浓度和包被方法、蓖麻毒素单克隆抗体工作浓度、酶标记二抗体工作浓度和显色时间等实验条件。方法的线性范围在1.2-10.0μg/L之间,线性回归方程y=0.05x... 建立了双抗体夹心酶联免疫法检测蓖麻毒素的方法。优化了最佳蓖麻毒素多克隆抗体包被浓度和包被方法、蓖麻毒素单克隆抗体工作浓度、酶标记二抗体工作浓度和显色时间等实验条件。方法的线性范围在1.2-10.0μg/L之间,线性回归方程y=0.05x＋0.42,相关系数为0.9962,检出限为0.2μg/L。将该方法用于检测实际水样蓖麻毒素加标样品,回收率为91.7%-104.0%;检测实际土壤加标样品,回收率为83.3%-98.0%;检测奶粉加标样品,回收率为83.3%~94.0%;检测实际血液加标样品,回收率为75.0%-82.0%。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 酶联免疫 双抗体夹心
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牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：30
14
作者 高存福 秦建华 +2 位作者 赵月兰 包永占 张宁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第8期620-622,共3页
将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/... 将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果,抗体的最佳包被量为150μg/mL,酶标抗体最适工作浓度为1∶200;封闭液为50mL/L的兔血清;待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃120min;底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测,结果,阳性检出率为42.6%。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 双抗体夹心ELISA 乳牛 检测
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Pfs25蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的建立 被引量：11
15
作者 李萍 马亚茹 +3 位作者 陆俭 雷清 陈勇 蒋琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1330-1334,共5页
目的:制备恶性疟原虫子孢子囊表面膜蛋白Pfs25的单克隆抗体(mAb),建立检测Pfs25蛋白的双抗体夹心ELISA方法。方法:纯化毕赤酵母表达的重组Pfs25蛋白,并免疫BALB/c小鼠,采用骨髓瘤细胞Sp2/0与免疫BALB/c鼠脾细胞杂交的细胞融合技术,通过... 目的:制备恶性疟原虫子孢子囊表面膜蛋白Pfs25的单克隆抗体(mAb),建立检测Pfs25蛋白的双抗体夹心ELISA方法。方法:纯化毕赤酵母表达的重组Pfs25蛋白,并免疫BALB/c小鼠,采用骨髓瘤细胞Sp2/0与免疫BALB/c鼠脾细胞杂交的细胞融合技术,通过间接ELISA检测获得分泌抗Pfs25抗体的阳性杂交瘤细胞株,通过免疫F1鼠诱生腹水,纯化腹水,并进行mAb的各项生物学鉴定。辣根过氧化物酶(HRP)标记纯化后的抗体,以4B7为包被抗体,1B4为酶标抗体,建立了双抗体夹心ELISA法。结果:获得3株抗Pfs25的杂交瘤细胞株,其中2株有良好的稳定性和特异性。并建立了双抗体夹心ELISA检测法,检测有效范围在0.07～1 mg/mL,其检测灵敏度为41.6 ng/mL。结论:成功制备抗Pfs25蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于Pfs25蛋白检测的双抗体夹心ELISA法,为Pfs25蛋白制备传播阻断型疟疾疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 Pfs25蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 传播阻断型疟疾疫苗
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双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV 被引量：10
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作者 李一经 刘博 +4 位作者 姜艳平 崔文 唐丽杰 乔薪瑗 刘敏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期1-10,共10页
用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为... 用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 检测
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双抗体夹心ELISA法检测相思子毒素 被引量：13
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作者 穆晞惠 童朝阳 +3 位作者 郝兰群 许秀玲 刘冰 沈桦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期763-764,766,共3页
目的:建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法:采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin。结果:该法检测abrin线性范围为0.25～125μg/L,线性回归方程为Y... 目的:建立相思子毒素(abrin)的酶联免疫检测方法,为abrin临床诊断、中毒治疗、法医学鉴定等应用领域提供技术基础和参考依据。方法:采用双抗体夹心ELISA法来检测微量abrin。结果:该法检测abrin线性范围为0.25～125μg/L,线性回归方程为Y=0.51015X+0.4153(r=0.9880,n=10,P<0.0001),检测下限为0.25μg/L。不同浓度蓖麻毒素(ricin)、葡萄球菌肠毒素B(SEB)对检测结果基本无干扰。该法能用于abrin毒素污染水样、土样、食品、血液等模拟样品的分析,相对标准差为3.52%～4.86%,具有较好的重现性。结论:成功地建立了双抗体夹心ELISA法检测abrin,将多克隆抗体的强富集能力和单克隆抗体(mAb)的特异性结合起来,提高检测的灵敏度和特异性,可适用于各种微量abrin样品的分析。 展开更多
关键词 相思子毒素 双抗体夹心法 酶联免疫吸附试验
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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化 被引量：10
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作者 陈晨 曹红 +5 位作者 金英杰 雷霆 庞平 刘海霞 宋铁彬 陈福勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期535-539,共5页
利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制... 利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法。该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性。与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P>0.17为阳性判定标准。应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 单抗 双抗体夹心法ELISA
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双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价 被引量：7
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作者 张志强 何萍 +2 位作者 隋承光 孟凡东 姜又红 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1561-1564,共4页
目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法,并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异,以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中C... 目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法,并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异,以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRG1多克隆抗体(PcAb)、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶(HRP)标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1∶750,1∶1200,1∶350,标准蛋白曲线的回归方程为:y=0.53566+0.00046x,R2=0.9939,P<0.0001。应用该方法初步检测结果显示:肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组(P<0.01),且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组(P<0.01)。该方法的敏感度(SE)为84.51%,特异度(SP)为35.00%。结论建立了一种敏感度高,重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法;Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达,且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。 展开更多
关键词 Cap43蛋白 肺癌 双抗体夹心ELISA 定量 血清学检查
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双抗体夹心ELISA法检测养殖对虾病毒的研究 被引量：5
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作者 宋思扬 罗文新 +2 位作者 沈明山 陈晋安 苏文金 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期32-35,共4页
用纯化的长毛对虾球状病毒（PPSV）和日本对虾中肠腺坏死杆状病毒（BMNV）制备新西兰兔抗BMNV和抗PPSV抗血清及Balb／c小鼠抗BMNV和抗PPSV抗血清，建立检测PSV和BMNV的双抗体夹心ELISA检测法，结果表明，双抗体夹心ELISA法具有较高的灵... 用纯化的长毛对虾球状病毒（PPSV）和日本对虾中肠腺坏死杆状病毒（BMNV）制备新西兰兔抗BMNV和抗PPSV抗血清及Balb／c小鼠抗BMNV和抗PPSV抗血清，建立检测PSV和BMNV的双抗体夹心ELISA检测法，结果表明，双抗体夹心ELISA法具有较高的灵敏度，可以从100μl待测组织匀浆液中检测到50ng的PPSV蛋白，以及100ng的BMNV蛋白。不同病毒抗血清无交叉反应性，用该ELISA技术检测养殖对虾和多种采自养殖虾池及其附近的近海岸生物，发现相当比例的外观正常的对虾和近海岸生物已呈阳性反应，电镜观察结果证实了检测的特异性及可靠性。 展开更多
关键词 双抗体夹心 ELISA 对虾 病毒 养殖
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