期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到68篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
基于FMDV IRES的双顺反子载体的构建及体外表达分析 被引量：1
1
作者 郑海学 郭慧琛 +2 位作者 靳野 刘湘涛 谢庆阁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期29-33,共5页
利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重... 利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点(IRES)序列,并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体,构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA,在IRES起始密码(ATG)下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp),把重组质粒转染BHK-21细胞,培养20～48h,在紫外显微镜下观察,能够看到典型的绿色荧光,表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪,与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础,并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 IRES 双顺反子 双顺反子载体
在线阅读 下载PDF
猪γ-干扰素双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：11
2
作者 曹瑞兵 蔡梅红 +1 位作者 陈德胜 陈溥言 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期52-55,共4页
提取经 Con A诱导培养的猪外周血白细胞总 RNA,RT- PCR扩增出猪 IFN- γ基因并克隆到 p GEM- T- easy载体 ,测序结果表明 ,扩增片段为含有信号肽的猪 IFN-γ完整基因。亚克隆猪 IFN-γ成熟蛋白编码基因 ,并对其 5′段前 2个稀有密码子... 提取经 Con A诱导培养的猪外周血白细胞总 RNA,RT- PCR扩增出猪 IFN- γ基因并克隆到 p GEM- T- easy载体 ,测序结果表明 ,扩增片段为含有信号肽的猪 IFN-γ完整基因。亚克隆猪 IFN-γ成熟蛋白编码基因 ,并对其 5′段前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。通过引入 SD序列 ,成功构建了猪 IFN- γ原核双顺反子表达载体 p L CS-po IFN2 G,并实现了猪 IFN-γ在大肠杆菌中的高表达 ,约占菌体总蛋白的 5 6 .5 %。表达产物以包涵体形式存在 ,用含 7mol/L 盐酸胍的变性液溶解及含 0 .5 mol/L盐酸胍复性液复性处理 ,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后 ,细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪 展开更多
关键词 猪γ—干扰素 双顺反子 表达载体 大肠杆菌 基因表达 基因克隆
在线阅读 下载PDF
一种双顺反子表达载体的构建及应用的研究 被引量：8
3
作者 刘新平 陈苏民 +4 位作者 陈南春 赵忠良 柴玉波 崔有宏 薛泳涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第2期156-159,共4页
将表达载体ｐＥＣ３４中的一段寡核苷酸序列，其中包括翻译增强子序列、ＳＤ序列、终止码、起始码及两端的限制性内切酶位点，插入ＧＳＴ基因后，构建成双顺反子的表达载体．利用此载体表达了非融合的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）... 将表达载体ｐＥＣ３４中的一段寡核苷酸序列，其中包括翻译增强子序列、ＳＤ序列、终止码、起始码及两端的限制性内切酶位点，插入ＧＳＴ基因后，构建成双顺反子的表达载体．利用此载体表达了非融合的人骨形成蛋白２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）和人骨形成蛋白３（ｈＢＭＰ３）Ｃ端肽段，将第一顺反子基因（ＧＳＴ基因）切小到原来的１／３时，则位于下游的第二顺反子基因编码的蛋白质在大肠杆菌中的表达量增加一倍。 展开更多
关键词 双顺反子 基因表达 表达载体
在线阅读 下载PDF
青蟹呼肠孤病毒和青蟹双顺反子病毒-1双重巢式PCR检测方法的建立 被引量：11
4
作者 张迪 杨铿 +2 位作者 苏友禄 冯娟 郭志勋 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期808-815,共8页
青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus,MCRV)和青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)是从近年发生大规模死亡的养殖拟穴青蟹体内分离的、对青蟹具有致病性的两种病毒。它们常常同时存在,给青蟹养殖业带来巨大经济损失。在... 青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus,MCRV)和青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)是从近年发生大规模死亡的养殖拟穴青蟹体内分离的、对青蟹具有致病性的两种病毒。它们常常同时存在,给青蟹养殖业带来巨大经济损失。在疾病的防治中,快速高效的病毒检测方法对疾病诊断以及及时采取有效地防治措施具有重要的意义。本研究利用MCRV和MCDV-1基因保守区设计4对引物,建立了可同时检测这两种病毒的双重巢式PCR(duplex-nested PCR)检测方法。研究发现该方法对两种病毒的检测限都可以达到10个拷贝,并与鲍肌肉萎缩病毒(AbSV)、虾类传染性表皮与造血组织坏死症病毒(IHHNV)、大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)、鱼类神经坏死病毒(NNV)和贝类急性病毒性坏死症病毒(AVNV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性地检测两种病毒。本方法具有高灵敏度、高特异性和简便快捷等特点,可作为一种快速诊断工具,检测拟穴青蟹中的MCRV和MCDV-1基因。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 青蟹呼肠孤病毒 青蟹双顺反子病毒-1 双重巢式PCR
在线阅读 下载PDF
双顺反子表达质粒在DNA疫苗研究中的应用 被引量：8
5
作者 张淼涛 白华 童德文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期424-428,共5页
简述了DNA疫苗的研究概况,介绍了真核双表达质粒的结构特点及其在基因佐剂和二价DNA疫苗中的应用情况,总结分析了双表达质粒的优点和存在的问题,并对其今后在DNA疫苗中的研究方向和前景进行了展望。
关键词 双顺反子表达质粒 DNA疫苗 基因重组
在线阅读 下载PDF
IBV S1基因和IL-2基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性研究 被引量：2
6
作者 唐梦君 王红宁 +4 位作者 周生 黄勇 柳萍 胡慧琼 廖娟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1055-1059,共5页
为了研制更加有效的IBV DNA疫苗,将IBV的S1基因和禽白介素2(IL-2)基因插入双顺反子表达载体pIRES-EGFP/DsRed中,构建能分别或同时表达S1基因和IL-2基因的pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2质粒。通过脂质体转染Vero细胞,利用RT-PCR及... 为了研制更加有效的IBV DNA疫苗,将IBV的S1基因和禽白介素2(IL-2)基因插入双顺反子表达载体pIRES-EGFP/DsRed中,构建能分别或同时表达S1基因和IL-2基因的pIRES-S1、pIRES-IL2、pIRES-S1/IL-2质粒。通过脂质体转染Vero细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测表达。将构建的质粒用脂质体包裹后,通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄雏鸡,二免后两周用IBV肾型强毒进行攻毒。结果表明,pIRES-S1/IL-2在体外能够诱导Vero细胞表达S1蛋白和IL-2;pIRES-S1/IL-2和pIRES-S1+pIRES-IL2免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,能明显增强IBV DNA疫苗对同型强毒的攻击保护,但pIRES-S1/IL-2免疫组要优于pIRES-S1+pIRES-IL2混合免疫组及其它对照组,差异显著或极显著。以上结果表明禽IL-2能同时加强DNA疫苗的细胞免疫和体液免疫应答;但抗原基因和IL-2共表达DNA疫苗的免疫效果明显要优于混合注射的DNA疫苗。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 S1基因 IL-2 双顺反子 DNA疫苗
在线阅读 下载PDF
表达mFasL的新型双顺反子逆转录病毒基因转移体系的建立 被引量：2
7
作者 刘凌波 邹萍 +2 位作者 徐之良 王良利 胡中波 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期136-139,共4页
为建立表达小鼠 Fas配体 (m Fas L)的内部核糖体进入位点 (IRES)串联的双顺反子新型逆转录病毒基因转移体系 ,用基因重组技术将 m Fas L c DNA基因构建到 IRES双顺反子逆转录病毒载体 (PL XIN)中 ,脂质体法将此重组质粒 PL FIN和空载体 ... 为建立表达小鼠 Fas配体 (m Fas L)的内部核糖体进入位点 (IRES)串联的双顺反子新型逆转录病毒基因转移体系 ,用基因重组技术将 m Fas L c DNA基因构建到 IRES双顺反子逆转录病毒载体 (PL XIN)中 ,脂质体法将此重组质粒 PL FIN和空载体 PL XIN分别转染包装细胞 (PA317) ,经 G418筛选出抗性包装细胞克隆 ,基因组 DNA PCR测定基因整合情况。并将抗性 PA317克隆培养上清感染小鼠成纤维细胞系 (NIH3T3) ,筛选出高滴度的 PA317细胞系 ;用流式细胞术测定筛选的 NIH3T3细胞目的基因表达状况 ;以抗性 NIH3T3和 Fas+Yac- 1细胞共培养法检测目的基因的生物学活性。筛选出 12个 PL FIN转染的 PA317细胞克隆中 ,最高产毒效价为 8.5× 10 5CFU(colony- form ing- unit) ;经此上清感染、筛选出的 NIH3T3细胞 ,高表达 m Fas L (阳性率高于对照组 5 2 .5 4% ) ;且能显著诱导 Fas+Yac- 1细胞凋亡 (凋亡率高于对照组 49% )。说明成功建立了表达 m Fas L 展开更多
关键词 基因转移 细胞凋亡 mFasL 新型双顺反子逆转录病毒
在线阅读 下载PDF
GFAP启动子调控的双顺反子真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27的构建及表达分析 被引量：2
8
作者 朱舟 徐逸 +3 位作者 田学愎 潘邓记 谢敏杰 王伟 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期34-39,共6页
目的构建并鉴定带GFAP启动子的Flag-p27和EGFP双顺反子真核表达载体,观察其表达。方法利用IRES和GFAP启动子,通过质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,经多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的星形胶质... 目的构建并鉴定带GFAP启动子的Flag-p27和EGFP双顺反子真核表达载体,观察其表达。方法利用IRES和GFAP启动子,通过质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,经多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的星形胶质细胞特异性真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27。转染体外培养的星形胶质细胞,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功构建真核表达载体pGFAP-IRES2-EGFP-p27。转染星形胶质细胞后可见EGFP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中P27表达水平明显增高。结论GFAP启动子能启动目的基因p27和EGFP在星形胶质细胞的表达,连于Flag-p27的下游EGFP可作为报告基因,指示p27的表达情况。带启动子GFAP的Flag-p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究星形胶质细胞增生与神经系统疾病的关系,并为寻找神经系统疾病的有效基因治疗途径奠定基础。 展开更多
关键词 双顺反子 星形胶质细胞 真核表达载体 细胞周期
在线阅读 下载PDF
结核杆菌Ag85B与ESAT-6双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达 被引量：1
9
作者 刘焰 刘君炎 +3 位作者 马立新 居巍 彭剑虹 刘汉燕 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期33-36,共4页
目的　构建结核杆菌Ag85B与ESAT 6双顺反子真核表达质粒。方法　采用PCR的方法从结核杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B及ESAT 6基因 ,将其分别定向克隆入真核双表达载体pIRES ,构建同时表达两个目的基因的双顺反子重组质粒。进行酶切分... 目的　构建结核杆菌Ag85B与ESAT 6双顺反子真核表达质粒。方法　采用PCR的方法从结核杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B及ESAT 6基因 ,将其分别定向克隆入真核双表达载体pIRES ,构建同时表达两个目的基因的双顺反子重组质粒。进行酶切分析及序列测定后 ,用脂质体包裹体外转染A5 4 9细胞 ,RT PCR检测Ag85B及ESAT 6的表达。结果　核酸序列测定证实重组质粒构建正确 ;该重组质粒能在体外表达Ag85B及ESAT 6mRNA。结论　成功构建了结核杆菌Ag85B及ESAT 6双顺反子真核表达质粒 ,并在体外实现了共表达 。 展开更多
关键词 结核杆菌 AG85B ESAT-6 双顺反子
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌二硫键异构酶DsbA和脯氨酸异构酶PPIaseA双顺反子表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1
10
作者 华子春 许立 +1 位作者 孙爱龙 金冬生 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第2期251-254,共4页
用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌二硫键异构酶ＤｓｂＡ的编码基因ｄｓｂＡ和大肠杆菌脯氨酸异构酶ＰＰＩａｓｅＡ的编码基因ｒｏｔ，并将ＤｓｂＡ和ｒｏｔ以双顺反子形式克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＫＫ２３３－２中。在ＩＰＴＧ的... 用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌二硫键异构酶ＤｓｂＡ的编码基因ｄｓｂＡ和大肠杆菌脯氨酸异构酶ＰＰＩａｓｅＡ的编码基因ｒｏｔ，并将ＤｓｂＡ和ｒｏｔ以双顺反子形式克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＫＫ２３３－２中。在ＩＰＴＧ的诱导下，ＤｓｂＡ和ＰＰＩａｓｅＡ获得了表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：ＤｓｂＡ、ＰＰＩａｓｅＡ的表达水平分别为占菌体裂解上清液总蛋白质的４．３２％和４．０６％。 展开更多
关键词 脯氨酸异构酶 二硫键异构酶 双顺反子 PPIaseA
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌双顺反子表达载体中绿色荧光蛋白表达水平的研究 被引量：1
11
作者 张鲲 马媛媛 +4 位作者 邹少兰 洪解放 井欣 刘成 张敏华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期60-63,共4页
构建了一系列含有编码硫氧还蛋白(Trx)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子重组表达质粒,重点考察双顺反子间紧密相连和重迭的间隔序列。诱导表达后,对表达的GFP进行荧光检测,利用GFP的荧光强度来反映蛋白质的表达水平。结果表明各表达... 构建了一系列含有编码硫氧还蛋白(Trx)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子重组表达质粒,重点考察双顺反子间紧密相连和重迭的间隔序列。诱导表达后,对表达的GFP进行荧光检测,利用GFP的荧光强度来反映蛋白质的表达水平。结果表明各表达载体所表达的GFP的平均荧光强度差距很大,表明双顺反子间的间隔序列对报告基因表达水平有一定的影响,为实现不同功能基因表达的精确调控奠定了基础。 展开更多
关键词 双顺反子 间隔区 多基因表达
在线阅读 下载PDF
双顺反子表达技术在线虫神经元钙成像中的应用(英文) 被引量：1
12
作者 张海宁 黄文明 +1 位作者 杨松 徐涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第5期515-519,共5页
在线虫中,钙成像技术已被广泛用于检测不同神经元的活性.然而,对于准确记录爬行中的活体线虫神经元钙信号仍然存在许多挑战,其中一个困难即来自于标记目标神经元。在同一个目标神经元中共同表达基因编码的钙指示蛋白和常量参考值荧光蛋... 在线虫中,钙成像技术已被广泛用于检测不同神经元的活性.然而,对于准确记录爬行中的活体线虫神经元钙信号仍然存在许多挑战,其中一个困难即来自于标记目标神经元。在同一个目标神经元中共同表达基因编码的钙指示蛋白和常量参考值荧光蛋白常常具有无法共表达的不确定性.另外,光谱的串扰影响存在于目前最常用的绿色钙指示蛋白系列G-CaMP与其参考值荧光蛋白DsRed系列之间,光谱的串扰有时会给信号记录带来假阳性结果.综上所述,本文首次提出应用双顺反子表达技术用于同一神经元的双蛋白标记,这不仅提高了共表达效率,更简化了线虫神经元标记的工作量.同时,本文还首次采用mKate2,一种与G-CaMP没有串扰的红色荧光蛋白作为参考量.以上改进已在感觉神经元ASH中得到验证.希望本文提出的方法能给线虫神经回路的研究提供一个更为方便、有效的途径. 展开更多
关键词 双顺反子 钙成像 秀丽隐杆线虫
在线阅读 下载PDF
人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 被引量：1
13
作者 于田田 李敬达 +6 位作者 刘庆平 王仁军 乔辉 陈玉华 李明英 于柯楠 迟彦 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期25-31,共7页
目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据... 目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 c DNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体p IRES2-Ac GFP1-Nuc。利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况。采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性。结果成功构建p IRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞。进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达。最后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白。结论成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础。 展开更多
关键词 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 氧化型低密度脂蛋白 动脉粥样硬化 双顺反子真核表达载体
在线阅读 下载PDF
利用双顺反子结构提高人GM－CSF在大肠杆菌中的表达水平 被引量：1
14
作者 刘丽 郑莉 +1 位作者 谢宝树 王国志 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1996年第4期336-338,共3页
作者设计并构建了人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）双顺反子原核表达质粒，使ｈＧＭ－ＣＳＦ在大肠杆菌中的表达量从原来的５％提高到３０％。
关键词 巨噬细胞 集落刺激因子 双顺反子
在线阅读 下载PDF
结核杆菌Esat6与hGM-CSF双顺反子表达载体的构建及鉴定
15
作者 李君武 黄泽棋 +6 位作者 姚翠婵 林绍强 周曙光 李晓栋 宋东 黄清华 王珊 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期697-699,共3页
目的从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定。方法以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒。然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES... 目的从质粒pVAE中克隆目的基因Esat6,与hGM-CSF一起构建双顺反子表达载体pIEG,并进行鉴定。方法以质粒pVAE为模板扩增出Esat6基因,与pIRES的MCS A进行重组,构建pIEsat6重组质粒。然后再以pORF-hGM-CSF为模板扩增出hGM-CSF基因,与pIRES载体的MCS B进行重组,构建pIGM重组质粒,上述两重组质粒经PCR、限制性内切酶图谱及DNA序列测定分析等多种方法进行鉴定后,再通过酶切、连接把hGM-CSF构建于pIEsat6质粒中,形成双顺反子真核表达载体pIEG。结果通过PCR可克隆得到相应大小的产物,酶切鉴定所切下的两片段大小约为0.29 kb和0.47 kb,与预计相符。测序结果与报道一致。结论成功构建结核杆菌Esat6基因与hGM-CSF双顺反子真核表达载体,为进一步研究其结核融合DNA疫苗及其转染DC疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 ESAT6 hGM—CSF 双顺反子 DNA疫苗
在线阅读 下载PDF
NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析
16
作者 徐逸 朱舟 +3 位作者 吴轲 曾宁 田学俾 陈忠华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期708-711,F0003,共5页
目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(... 目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。 展开更多
关键词 核转录因子κB启动子 双顺反子 P27基因 真核表达载体 细胞周期
在线阅读 下载PDF
脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定
17
作者 朱剑 许期年 +5 位作者 王秀云 左剑玲 周岱 王中 伏林山 陈旭仁 《山东医药》 CAS 2012年第26期10-13,共4页
目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段... 目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5'末端引入3×Flag标签;通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3'末端引入3×Flag标签;通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架;转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果 PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了hIDH1基因。结论成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1R132H/3×Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 颅内肿瘤 胶质瘤 异柠檬酸脱氢酶1 双顺反子 质粒 基因突变
在线阅读 下载PDF
结核分枝杆菌Ag85B与IL-2基因双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达
18
作者 刘焰 彭剑虹 +2 位作者 马立新 刘君炎 曹晓春 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2006年第6期691-694,共4页
目的:构建结核分枝杆菌Ag85B与白细胞介素2(IL-2)双顺反子真核表达质粒。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Ag85B基因。采用亚克隆的技术从pcDNA3.1-IL-2中获得小鼠IL-2基因的cDNA片段。将两者分别定向插入真核双表达... 目的:构建结核分枝杆菌Ag85B与白细胞介素2(IL-2)双顺反子真核表达质粒。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Ag85B基因。采用亚克隆的技术从pcDNA3.1-IL-2中获得小鼠IL-2基因的cDNA片段。将两者分别定向插入真核双表达载体pIRES,构建表达两个目基因的双顺反子重组质粒,然后用脂质体包裹体外转染A549细胞,RT-PCR检测Ag85B及IL-2的表达。结果:酶切分析及序列测定证实重组质粒构建正确;该重组质粒能在体外表达Ag85B及IL-2 mRNA。结论:成功构建了结核杆菌Ag85B及IL-2基因双顺反子真核表达质粒,为进一步在整体动物水平的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 AG85B 白细胞介素2 双顺反子
在线阅读 下载PDF
pDC316-hIL-12-IRES-CKb双顺反子重组腺病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达
19
作者 李子俊 刘于保 +5 位作者 李东风 秦玉璇 李保朋 马艳红 刘强 梁长虹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2180-2184,共5页
目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平。方法:将PCR扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入... 目的:构建含肌酸激酶(CK)基因和人白细胞介素12(hIL-12)基因的双顺反子重组腺病毒载体pDC316-hIL-12-IRES-CKb,并包装成重组腺病毒,检测其在肝细胞中蛋白表达和肝脏中磷酸肌酸的水平。方法:将PCR扩增的产物CK片段和hIL-12片段顺次插入双顺反子腺病毒载体(IES)中,经同源重组、包装和扩增获得重组腺病毒子。再用该病毒感染体外培养的兔肝细胞,经Western blotting检测到CK蛋白的表达和ELISA检测培养液中hIL-12水平。结果:体外实验在感染肝细胞后检测到CK和hIL-12蛋白的表达;同时体内实验应用核磁共振波谱(MRS)的方法能检测到肝脏特异性CK产物磷酸肌酸的水平。结论:携带CK和hIL-12基因的双顺反子重组腺病毒能使CK基因异源性地表达在肝脏并能用非侵袭性的MRS技术检测其表达。此载体的构建为进一步研究CK基因作为一个影像报告基因动态监测肝脏治疗基因hIL-12的表达奠定基础。 展开更多
关键词 双顺反子腺病毒载体 肌酸激酶 白细胞介素12 原代肝细胞
在线阅读 下载PDF
甘薯AGPase双顺反子表达载体的构建及其在E.coli中的表达
20
作者 王章英 房伯平 +2 位作者 陈景益 张雄坚 陈新亮 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第S1期88-90,6,共4页
提取甘薯块根总RNA,利用RT-PCR法克隆淀粉合成关键酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Pyrophosphorylase,AGPase)大小亚基基因的cDNA序列,通过引入SD序列,成功构建了甘薯AGPase大小亚基双顺反子表达载体,并实现了甘薯AGPase... 提取甘薯块根总RNA,利用RT-PCR法克隆淀粉合成关键酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Pyrophosphorylase,AGPase)大小亚基基因的cDNA序列,通过引入SD序列,成功构建了甘薯AGPase大小亚基双顺反子表达载体,并实现了甘薯AGPase在E.coli中的高效表达,为进一步研究甘薯AGPase功能奠定了基础。 展开更多
关键词 甘薯 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 双顺反子
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部