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哺乳动物细胞表达系统研究进展 被引量：1
1
作者 蔡美娜 王佑春 《中国医药生物技术》 2024年第3期254-259,共6页
哺乳动物细胞表达系统具有强大的翻译后修饰功能,表达的重组蛋白更接近人源构象,因此被广泛用于治疗性重组蛋白的生产,其中应用最广泛的是中华仓鼠卵巢细胞。基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等研究的不断深入促进了哺乳动... 哺乳动物细胞表达系统具有强大的翻译后修饰功能,表达的重组蛋白更接近人源构象,因此被广泛用于治疗性重组蛋白的生产,其中应用最广泛的是中华仓鼠卵巢细胞。基因组学、转录组学、蛋白质组学以及代谢组学等研究的不断深入促进了哺乳动物细胞表达系统的不断完善。本文立足于哺乳动物细胞表达系统的研究现状,对表达载体的优化、宿主细胞和位点特异性重组等方面的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 重组蛋白 哺乳动物细胞表达系统 中华仓鼠卵巢细胞 UCOE 位点特异性整合
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禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定 被引量：2
2
作者 李子璇 韦莉 +7 位作者 王菁 朱姗姗 张春燕 柳舒航 全荣 阎旭 陈武 刘爵 《北京农学院学报》 2014年第4期49-53,共5页
利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检... 利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检测N蛋白的表达,并用Western blot检测表达蛋白的抗原性。结果显示,禽偏肺病毒核衣壳N蛋白主要表达在细胞浆中,在转染后48h后表达量最高;与抗N蛋白抗体有抗原性,所表达核衣壳N融合蛋白大小为72kDa左右,与预期结果一致。结论,本试验成功应用哺乳动物表达系统表达了禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白,表达蛋白具有抗原性,为与禽偏肺病毒核衣壳N蛋白的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒核衣壳N蛋白 哺乳动物细胞表达系统 显微镜观察 WESTERN BLOTTING
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哺乳动物细胞表达系统及其研究进展 被引量：6
3
作者 刘定燮 周晓巍 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2003年第4期308-311,共4页
从表达载体、宿主细胞、表达系统的类型及选择等四个方面对哺乳动物细胞系统进行了综述。对相关的研究进展,如高效启动子的发现和改构、新型细胞株的建立及诱导表达调控系统亦作了简要介绍。通过这些阐述,期望能建立一个简洁而清晰的有... 从表达载体、宿主细胞、表达系统的类型及选择等四个方面对哺乳动物细胞系统进行了综述。对相关的研究进展,如高效启动子的发现和改构、新型细胞株的建立及诱导表达调控系统亦作了简要介绍。通过这些阐述,期望能建立一个简洁而清晰的有关该表达系统的框架,对在实验中决定选取何种载体、细胞株或何种表达方式时能够有所提示。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 表达系统 宿主细胞 表达载体
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哺乳动物细胞高效表达系统研究进展 被引量：6
4
作者 张国强 刘志刚 俞炜源 《生物技术通讯》 CAS 2005年第1期56-59,共4页
哺乳动物细胞高效表达系统是基因工程制药研究中的一个重要内容,而表达载体和宿主细胞是哺乳动物细胞表达系统的2个基本组成部分。近年来通过降低目的基因的位置效应、提高目的基因的转录和翻译水平以及目的基因的拷贝数等方面构建哺乳... 哺乳动物细胞高效表达系统是基因工程制药研究中的一个重要内容,而表达载体和宿主细胞是哺乳动物细胞表达系统的2个基本组成部分。近年来通过降低目的基因的位置效应、提高目的基因的转录和翻译水平以及目的基因的拷贝数等方面构建哺乳动物细胞高效表达载体。与此同时,研究者也对宿主细胞进行了多方面的改造,使之能更好地适应工业化大规模培养的要求,从而降低细胞培养和产品纯化的成本。本文就哺乳动物细胞高效表达载体的构建及宿主细胞的改造等方面的最新进展作一简述。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞高效表达载体系统 生物工程制药 基因工程制药 表达载体 宿主细胞
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哺乳动物细胞表达系统 被引量：1
5
作者 沈孝宙 《生物科学信息》 CSCD 1991年第4期17-19,共3页
(一)重要性在基因工程领域,哺乳动物细胞表达系统日益受到人们重视。许多重要的具医疗价值的蛋白在大肠杆菌表达系统中无生物活性或活性很低。这是由于在此系统中许多真核蛋白不能完成转译后修饰,如糖基化、酰胺化、二硫键的正确连接和... (一)重要性在基因工程领域,哺乳动物细胞表达系统日益受到人们重视。许多重要的具医疗价值的蛋白在大肠杆菌表达系统中无生物活性或活性很低。这是由于在此系统中许多真核蛋白不能完成转译后修饰,如糖基化、酰胺化、二硫键的正确连接和亚基的正确装配。而在哺乳动物细胞表达系统中,这些转译后修饰过程能正常进行,产生与天然蛋白完全相同的分子。因此,哺乳动物细胞表达系统正在逐渐形成产业。在理论研究上,哺乳动物细胞表达系统也十分重要,它是研究真核基因调控的必不可少的模型。这个系统不仅对检验基因的同域作用(cis-acting)序列(如启动子)非常有用,而且对研究跨域作用因子(如一些调控蛋白)也极有价值。 展开更多
关键词 哺乳动物 细胞 表达系统
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哺乳动物细胞高效表达系统研究进展 被引量：3
6
作者 柏家林 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2013年第1期43-51,共9页
哺乳动物细胞高效表达系统是生物制药工业中十分关键的环节,而表达载体和宿主细胞又是哺乳动物细胞表达系统的两个重要组成部分.文章较详细综述了通过目的基因整合位点的优化、增加目的基因拷贝数、提高目的基因的转录和翻译水平等构建... 哺乳动物细胞高效表达系统是生物制药工业中十分关键的环节,而表达载体和宿主细胞又是哺乳动物细胞表达系统的两个重要组成部分.文章较详细综述了通过目的基因整合位点的优化、增加目的基因拷贝数、提高目的基因的转录和翻译水平等构建哺乳动物细胞高效表达载体的研究进展.同时,为使宿主细胞更好地适应工业化大规模培养要求,对通过抗凋亡、细胞周期调控、糖基化、细胞增殖控制技术和多基因代谢等细胞代谢工程对其进行改造的研究进展也作了介绍. 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 高效表达载体 细胞代谢工程 生物工程制药
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四环素调控表达系统调节EGFP和HBV前核心蛋白在哺乳动物细胞中表达 被引量：1
7
作者 朱晓东 姚丰 田波 《自然科学进展》 北大核心 2002年第11期1209-1212,共4页
构建新型四环素调控的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和乙肝病毒(HBV)前核心蛋白基因的表达载体,利用脂质体转染哺乳动物细胞,流式细胞术检测结果说明:应用此系统四环素可使EGFP在CHO细胞中的表达提高18倍,在SSMC-7721细胞与HEK293细胞中... 构建新型四环素调控的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和乙肝病毒(HBV)前核心蛋白基因的表达载体,利用脂质体转染哺乳动物细胞,流式细胞术检测结果说明:应用此系统四环素可使EGFP在CHO细胞中的表达提高18倍,在SSMC-7721细胞与HEK293细胞中的表达分别提高5倍和接近2倍,并且,四环素可有效地诱导HBV的前核心蛋白基因在肝癌细胞系中的表达。 展开更多
关键词 EGFP HBV 前核心蛋白 哺乳动物 基因治疗 四环素诱导表达系统 增强绿色荧光蛋白 乙肝病毒 反式显性负调蛋白 基因表达
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杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究 被引量：8
8
作者 许辰煜 程通 +5 位作者 卢五迅 陈敏 吴婷 王颖彬 张军 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期73-77,共5页
研究已证实杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞 ,这提示了可将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。利用已构建的重组杆状病毒BacV CMV EGFPA ,以含病毒的Sf9细胞培养上清同时孵育多种哺乳动物细胞 ,利用流式细胞术检... 研究已证实杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞 ,这提示了可将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。利用已构建的重组杆状病毒BacV CMV EGFPA ,以含病毒的Sf9细胞培养上清同时孵育多种哺乳动物细胞 ,利用流式细胞术检测报告基因在不同细胞株中的转移效率及表达效率。共使用了 2 0种哺乳动物细胞株 ,其中有 12种人类组织细胞 ,7种小鼠组织细胞 ,1种猴组织细胞。实验结果显示携带CMV启动子的重组杆状病毒可有效进入多数哺乳动物细胞 ,其中对人、猴来源细胞的基因转移效率显著高于对鼠源细胞 ,对贴壁细胞的基因转移效率显著高于对悬浮细胞。同时 ,通过脂质体LipofectAMINE将携带有CMV启动子和EGFP基因的哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3 1 EGFP分别转染部分特别是被认为杆状病毒进入能力较低的细胞株 ,结果显示CMV启动子在这些细胞中均可有效引导EGFP基因的表达 ,因此认为携带了CMV启动子的重组杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移效率能基本反映出杆状病毒对不同种哺乳动物细胞的进入能力。通过综合比较携带CMV启动子的杆状病毒对不同种属及组织来源细胞的基因转移及表达效率 ,可看出杆状病毒对灵长类动物贴壁细胞的基因转移及表达效果是较好的 。 展开更多
关键词 杆状病毒 哺乳动物细胞 基因转移 表达效率
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哺乳动物悬浮细胞表达系统进行膜蛋白制备的优化 被引量：1
9
作者 马骋 宫彩霞 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2022年第7期42-49,67,共9页
为提高哺乳动物悬浮细胞表达系统用于日常膜蛋白表达制备的实用性、可控性及效率,改善传统工艺缺乏快速检测和质控的方法、缺乏快速且高通量的目的蛋白及融合标签的筛选策略等方面的不足,设计了新的pf系列质粒,优化并建立关联的检测方法... 为提高哺乳动物悬浮细胞表达系统用于日常膜蛋白表达制备的实用性、可控性及效率,改善传统工艺缺乏快速检测和质控的方法、缺乏快速且高通量的目的蛋白及融合标签的筛选策略等方面的不足,设计了新的pf系列质粒,优化并建立关联的检测方法,实现了病毒滴度在转染和扩增阶段的随时监测,并缩短了定量测量病毒感染效力的周期;同时设计了新的筛选策略和ESNX质粒系列,实现了目的蛋白和融合标签质粒库的快速构建以及对其表达效果的快速、高通量检测筛选。基于新质粒和对应使用方案的膜蛋白表达制备新体系提高了效率、实用性和可控性,可以简单地再现并用于各实验室,为膜蛋白的结构、功能等各方面研究提供助力。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 悬浮培养 膜蛋白 表达制备
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重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达 被引量：9
10
作者 徐艳 李鹏 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期467-470,共4页
目的　检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法　采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ... 目的　检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法　采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ,获得稳定转染的细胞。酶联免疫吸附实验 (ELISA)对重组质粒在COS_1和CHO细胞表达产物的含量进行检测。结果　G4 18筛选获得稳定转染的COS_1和CHO细胞 ,对照组加压后第10～ 2 0天细胞全部死亡。转染组第 15～ 2 3天汇片达 80 %左右。转染组细胞培养液和冻融液中sIL_1R表达量均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　以sIL_1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系中具有表达功能。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 表达 人可溶性白细胞介素-1受体 基因治疗 体外转染
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杆状病毒用于哺乳动物细胞快速高效表达外源基因的研究 被引量：5
11
作者 程通 许辰煜 +5 位作者 王颖彬 陈敏 吴婷 谢小燕 张军 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期581-586,T004,共7页
现已发现杆状病毒可进入某些培养的哺乳动物细胞 ,这提示可将杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。对杆状病毒转移载体的改造及对哺乳动物细胞的基因转移方式进行了进一步的研究。以绿色荧光蛋白基因为报告基因 ,利用Bac... 现已发现杆状病毒可进入某些培养的哺乳动物细胞 ,这提示可将杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。对杆状病毒转移载体的改造及对哺乳动物细胞的基因转移方式进行了进一步的研究。以绿色荧光蛋白基因为报告基因 ,利用Bac to Bac系统构建了分别含有正向和反向CMV启动子表达盒的两种重组杆状病毒。可观察到CMV启动子在Sf9细胞中可启动报告基因的表达 ,但表达效率较低。用重组杆状病毒感染后Sf9细胞的培养上清直接与HepG2细胞作用 ,以流式细胞术检测基因转移效率及荧光表达强度 ,发现这两种病毒在相同的感染复数下对HepG2细胞具有相似的基因转移及表达效率。同时 ,利用流式细胞术进一步研究了直接使用重组杆状病毒感染 4d后Sf9细胞的培养上清对哺乳动物细胞进行基因转移的方法。通过对HepG2细胞的实验结果显示 ,将带毒Sf9细胞培养上清 (1.2× 10 7PFU mL)用哺乳动物细胞培养基 1倍稀释后 ,37℃下孵育靶细胞 12h(moi=5 0 ) ,可达到较高的基因转移及表达效率 ,同时不会对细胞造成明显损伤。将重组杆状病毒与脂质体和逆转录病毒这两种系统对HepG2及CV1细胞的基因转移效率进行了比较 ,结果发现在同样未经浓缩等特殊处理的条件下重组杆状病毒对这两种细胞的基因转移效率是最高的。因此可以认为 , 展开更多
关键词 杆状病毒 哺乳动物细胞 表达 外源基因 脂质体 重组逆转录病毒
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短双链RNA特异性抑制哺乳动物细胞中绿色荧光蛋白基因表达 被引量：2
12
作者 黄宇琛 李江 +2 位作者 谭琛 李小玲 李桂源 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第7期710-714,共5页
背景与目的:双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。本研究旨在探讨绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的短双链RNA(shortinterferingRNAs,siRNAs)是否能抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。方法:用... 背景与目的:双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。本研究旨在探讨绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的短双链RNA(shortinterferingRNAs,siRNAs)是否能抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。方法:用荧光显微镜和荧光分光光度计观察合成的GFPsiRNAs对绿色荧光蛋白表达基因pEGFPC2在HeLa细胞中表达的影响,同时观察长链GFPdsRNA、Cx26siRNAs和长链Cx26dsRNA对荧光蛋白表达的影响,并通过流式细胞仪观察上述不同种类的dsRNA对细胞凋亡的影响。结果:GFPsiRNAs能特异性抑制GFP基因在HeLa细胞中的表达,而Cx26siRNAs对荧光蛋白的表达没有影响。长链双链RNA可以诱导细胞的凋亡,而siRNAs对细胞的凋亡无影响。结论:siRNAs能在哺乳动物特异性抑制基因的表达,该研究将为利用siRNA作为一种治疗手段提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 基因表达 短双链RNA 基因转染 细胞凋亡 绿色荧光蛋白 GFP DSRNA
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变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区真核表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达 被引量：3
13
作者 韩琪 刘建国 +4 位作者 柴巧学 曲云鹏 管晓燕 白国辉 杨德琴 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第6期310-313,340,共5页
目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染... 目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达。结果:重组质粒pVAX1-GbpA/GBD经EcoR I和BamH I酶切证实携带1.2kb目的基因片段,经测序分析,目的基因正确插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-gbpA/GBD转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。结论:成功构建防龋基因疫苗真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。 展开更多
关键词 变异链球菌 葡聚糖结合蛋白A 哺乳动物细胞 真核表达 pVAXl
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端粒酶活性在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1
14
作者 阮承迈 陈守义 +4 位作者 吴东林 李鹏 马鹤雯 马永红 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期66-68,共3页
为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染... 为研究端粒酶活性在哺乳动物细胞中的激活 ,构建了端粒酶催化亚基 (human telomerase reverse transcriptase,h TERT)和端粒酶 RNA组分 (h TR)基因的真核表达载体 ,分别在无端粒酶活性的 DK细胞株和人肝癌细胞中进行表达 ,以 TRAP-银染和 TRAP- EL ISA定量方法测定转染细胞。结果显示 ,在人肝癌细胞株中仅 h TERT表达即可使端粒酶活性显著增加 ,而 DK细胞中 h TERT必须和 h TR同时转染才有端粒酶活性表达。这一结果表明 ,端粒酶活性表达主要和 h TERT/ h TR有关 ,采用人的端粒酶 h TERT/ h TR在其他哺乳动物细胞中表达端粒酶活性是可行的。 展开更多
关键词 端粒酶活性 哺乳动物细胞 表达 激活 DK细胞 人肝癌细胞
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以GFP为报告基因的酿酒酵母mRNA在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1
15
作者 王弘 郑文岭 +2 位作者 杨太成 冼江 马文丽 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期449-451,共3页
目的　研究酵母mRNA在哺乳动物细胞中的翻译表达。方法　半乳糖诱导GFP基因在酿酒酵母细胞中表达,提取其mRNA ,RT -PCR鉴定,并以脂质体为介导,对血管内皮细胞HUVEC以及绿猴肾细胞COS - 7进行体外转染。结果　被转染HUVEC和COS - 7细胞... 目的　研究酵母mRNA在哺乳动物细胞中的翻译表达。方法　半乳糖诱导GFP基因在酿酒酵母细胞中表达,提取其mRNA ,RT -PCR鉴定,并以脂质体为介导,对血管内皮细胞HUVEC以及绿猴肾细胞COS - 7进行体外转染。结果　被转染HUVEC和COS - 7细胞分别出现绿色荧光,报告基因GFPmRNA在动物细胞中被识别、翻译。结论　提示酵母mRNA可能作为基因治疗物质应用于口服基因治疗的研究。 展开更多
关键词 GFP 报告基因 酿酒酵母 MRNA 哺乳动物细胞 表达
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成年哺乳动物中枢神经系统干细胞 被引量：3
16
作者 董艳 朱诚 江基尧 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期141-143,共3页
神经干细胞广泛存在于成年哺乳动物的中枢神经系统。神经干细胞的增殖和分化受生长因子及功能活动等的调节。
关键词 神经干细胞 成年哺乳动物 中枢神经系统
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基于抗体等重组蛋白表达产品的哺乳动物细胞大规模发酵技术 被引量：11
17
作者 陈志南 杨向民 《中国医药生物技术》 CSCD 2009年第5期325-328,共4页
抗体等重组蛋白产品是以基因工程和细胞工程为关键技术的生物技术产品，其特异性高、均一性好、靶点明确，广泛应用于各类重大疾病、尤其是对肿瘤治疗。目前，在FDA批准的32种抗体药物治疗疾病的分类中，肿瘤类疾病占32％、免疫性疾病... 抗体等重组蛋白产品是以基因工程和细胞工程为关键技术的生物技术产品，其特异性高、均一性好、靶点明确，广泛应用于各类重大疾病、尤其是对肿瘤治疗。目前，在FDA批准的32种抗体药物治疗疾病的分类中，肿瘤类疾病占32％、免疫性疾病占37％、器官移植疾病占11％、感染性疾病占8％、心血管疾病占4％、其他疾病占6％。 展开更多
关键词 生物技术产品 重组蛋白表达 哺乳动物细胞 发酵技术 抗体 重大疾病 肿瘤治疗 FDA批准
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宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达 被引量：1
18
作者 张茂 邹娴 +3 位作者 林纯 刘德武 吴珍芳 蔡更元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期23-27,共5页
本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。... 本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。 展开更多
关键词 宇佐美曲霉 木聚糖酶 哺乳动物细胞 分泌表达
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磷酸钙法转染哺乳动物细胞SP2/0及其表达产物检测 被引量：2
19
作者 秦山 黄春妍 +2 位作者 何芳 刘丽 赵连三 《生物技术通讯》 CAS 2000年第2期115-117,共3页
将真核细胞表达质粒以磷酸钙介导法导入小鼠骨髓瘤细胞SP2 0 ,转染细胞经超声破碎后 ,分别以显色法及化学发光法检测其目的蛋白 (HBsAg) ,证实化学发光法的检测灵敏度高于目前常用的显色法 ,且其结果易于保存。对化学发光法的实验条件... 将真核细胞表达质粒以磷酸钙介导法导入小鼠骨髓瘤细胞SP2 0 ,转染细胞经超声破碎后 ,分别以显色法及化学发光法检测其目的蛋白 (HBsAg) ,证实化学发光法的检测灵敏度高于目前常用的显色法 ,且其结果易于保存。对化学发光法的实验条件及磷酸钙转染法的有关影响因素进行了初步探讨。 展开更多
关键词 转染 哺乳动物细胞 表达产物 磷酸钙法
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一种在哺乳动物细胞中研究蛋白分子转录激活活性系统的建立 被引量：1
20
作者 张浩 周建光 +4 位作者 李杰之 王健 孙玉龙 陈珊 黄翠芬 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第11期983-989,共7页
为了在哺乳动物细胞中建立一套用于研究蛋白分子转录激活活性的系统 ,首先以质粒pTet Off和真核表达载体pCDNA3.1B( ) /myc his为基础 ,分别构建重组质粒pZHO1(用于插入待测基因并作为该系统的阴性对照 )、pZHO2(用于作阳性对照 ) ,此... 为了在哺乳动物细胞中建立一套用于研究蛋白分子转录激活活性的系统 ,首先以质粒pTet Off和真核表达载体pCDNA3.1B( ) /myc his为基础 ,分别构建重组质粒pZHO1(用于插入待测基因并作为该系统的阴性对照 )、pZHO2(用于作阳性对照 ) ,此外 ,该系统还包括质粒pTRE luc(编码Firefly荧光素酶报道基因 )和质粒pRL TK(编码Renilla荧光素酶基因 ,用作内参对照 )。为验证该系统的可行性 ,分别将质粒pZHO1、pZHO2、pZHO3(编码p5 3分子N端转录激活区 73个氨基酸片段 ,作为实验组 )与质粒pTRE luc和pRL TK共转染至C4 2、MCF 7、COS73种不同的细胞株中 ,通过检测各转染组细胞中Firefly荧光素酶相对活性的大小来判断该系统的可行性。结果表明 ,所构建的系统可以在哺乳动物细胞中检测目的分子的转录激活活性。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 蛋白分子 转录激活活性 双荧光素酶报道系统 TET-OFF
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