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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用
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作者 张丽 李海 +7 位作者 曹蕾 胡宏俏 王娜 李海鑫 江洁 毛乃颖 李晓梅 张燕 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期959-966,共8页
目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素... 目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 免疫染色 噬斑减少中和实验 中和抗体
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