坍塌反应调节蛋白5促进海马神经元突起生长

1

作者 陈克恩 王圆圆 +2 位作者 张吉凤 李斌 郭国庆 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期297-303,共7页

目的探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3个复孔,用时差成像技术和突起提取技术观察和检测原代培养海马... 目的探讨坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)对神经元突起生长的作用。方法构建CRMP5真核表达载体,采用基因转染、实时定量PCR和免疫印迹技术评估CRMP5基因表达;以空载体为对照组,设3个复孔,用时差成像技术和突起提取技术观察和检测原代培养海马神经元突起的生长。结果成功构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签蛋白的CRMP5的真核表达载体。脂质体转染技术可成功把CRMP5基因导入细胞,转染的细胞CRMP5表达高于空载体对照组;CRMP5蛋白表达于神经元的胞体和突起,尤其是胞体、突起起始处和突起末端高表达。过表达CRMP5可明显促进突起生长,主要表现为突起的生长,并形成丰富的侧枝;定量结果显示,CRMP5过表达的细胞突起的长度逐渐延长,而且较空载体转染细胞增多,差异显著(P<0.01)。导入CRMP5的细胞突起提取液的吸光度较对照细胞明显升高(P<0.01)。结论 CRMP5能促进神经元突起及其分支的生长。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白5 神经元 突起 生长 基因转染 真核表达 免疫印迹法 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

七氟醚对发育期大鼠海马神经元树突发育及坍塌反应调节蛋白表达的影响 被引量：2

2

作者 柳垂亮 廖朝霞 +2 位作者 刘延辉 刘雅芳 李玉娟 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期122-127,共6页

目的研究七氟醚（sevoflurflne，Sevo）麻醉对发育期大鼠海马神经元树突发育以及海马组织坍塌反应调节蛋白（collapsin response mediatorprotein，CRMP）的影响。方法24只出生后7天（P7）的新生大鼠随机分为对照组（Con组）和七氟醚组... 目的研究七氟醚（sevoflurflne，Sevo）麻醉对发育期大鼠海马神经元树突发育以及海马组织坍塌反应调节蛋白（collapsin response mediatorprotein，CRMP）的影响。方法24只出生后7天（P7）的新生大鼠随机分为对照组（Con组）和七氟醚组（Sevo组），每组12只。Con组吸人空气，SeVO组吸入2．8％七氟醚4h。麻醉结束后6h，部分幼鼠取新鲜脑海马，Westernblot法检测CRMPl、CRMP2与CRMP4蛋白表达以及CRMP2Ser522、Thr514、Thr555位点的磷酸化蛋白表达的变化如=6）；部分幼鼠继续饲养至P30天，一半大脑取新鲜海马组织，Westernblot法检测CRMP1、CRMP2与CRMP4蛋白表达的变化0=6），另一半大脑进行高尔基（Golgi）染色，检测海马DG区神经元树突形态的变化（n=6）。结果麻醉处理后6h，Sevo组海马CRMP1、CRMP2与CRMP4蛋白的表达比Con组分别降低了35．0％（P=0．004）、27．5％（P=0．015）、12．0％（P=0．003）；Sevo组海马CRMP2Ser522、Thr514位点磷酸化蛋白表达比Con组分别增加了68．3％（P〈0．01）、74．5％（P〈0．01），而CRMP2Thr555佗点磷酸化蛋白表达无变化（P=0．09）；在P30天，Sevo组海马DG区神经元的第二、三级树突和树突总氏度均降低（P=0．033，P〈0．01，p=0．001），以及在距神经元120、140、160um直径同心圆交点处树突分支减少（P=0．009，P=0．028，P=0．048），而海马组织CRMP1、CRMP2与CRMP4蛋白的表达与Con组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论七氟醚抑制了发育期大鼠海马DG区神经元树突发育，该作用可能与其抑制短期CRMP1、CRMP2与CRMP4蛋白表达，促进CRMP2Ser522、Thr514位点磷酸化有关。 展开更多

关键词 七氟醚 树突 坍塌反应调节蛋白 海马

原文传递

CRMP1基因慢病毒干扰质粒构建及其对SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体蛋白表达的影响

3

作者 王松豪 秦坤 +3 位作者 韩雨 张微微 徐绍业 邵晓云 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期433-438,共6页

目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构... 目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构建CRMP1重组干扰质粒。将重组正确的shCRMP1质粒转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得的慢病毒上清浓缩后感染SH-SY5Y细胞,Western blot检测SH-SY5Y细胞内CRMP1的干扰效果及其对NLRP3炎症小体各组分蛋白表达的影响。结果:DNA测序结果显示,pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒构建成功;转染HEK-293T细胞包装慢病毒后,细胞内CRMP1蛋白表达下降;慢病毒浓缩液感染SH-SY5Y细胞经嘌呤霉素筛选,Western blot发现shCRMP1慢病毒能显著下调SH-SY5Y细胞中CRMP1蛋白表达。同时稳定敲减CRMP1的SH-SY5Y细胞系中发现,MPP^(+)诱导下,抑制CRMP1表达可有效抑制NLRP3炎症小体活化。结论:成功构建pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒,且干扰CRMP1可抑制MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体活化,为进一步研究CRMP1在帕金森病等神经退行性疾病中的发生机制奠定基础。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白1 慢病毒干扰 人神经母细胞瘤细胞 NLRP3炎症小体

在线阅读 下载PDF 职称材料

Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节 被引量：1

4

作者 尹义臣 张吉凤 +2 位作者 龚晓兵 张文斌 郭国庆 《解剖学研究》 CAS 2013年第4期296-299,304,共5页

目的探讨Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节。方法体外培养新生大鼠海马神经元5d后,用Rho激酶激动剂LPA和抑制剂Y27632改变细胞内Rho激酶的活性,采用突起提取试剂盒提取神经元的突起,检测突起生长的变化,并应用实时荧光定量... 目的探讨Rho激酶对大鼠海马神经元CRMPs mRNA表达的调节。方法体外培养新生大鼠海马神经元5d后,用Rho激酶激动剂LPA和抑制剂Y27632改变细胞内Rho激酶的活性,采用突起提取试剂盒提取神经元的突起,检测突起生长的变化,并应用实时荧光定量PCR方法检测CRMPs mRNA的表达。结果对照组细胞突起提取液吸光度值为0.0426±0.0062,用LPA处理后的细胞突起提取液吸光度值较对照组明显降低(P<0.05);Y27632组细胞突起提取液的吸光度值较对照组明显升高(P<0.05)。各基因在培养的大鼠海马神经元中均能检测到,对照组分析显示CRMP 1、2、4、5 mRNA表达水平相近且较高,CRMP3 mRNA表达水平相对较低;LPA处理后,CRMP1与CRMP3 mRNA表达水平与对照组相比明显上调(P<0.05),CRMP5 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),CRMP2与CRMP4 mRNA表达水平与对照组相比无明显差异(P>0.05);Y27632处理后,CRMP1与CRMP3 mRNA表达水平与对照组相比明显下调(P<0.05),CRMP2、CRMP4和CRMP5 mRNA表达水平与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论 Rho激酶通过影响CRMP1、CRMP3和CRMP5 mRNA的表达调控神经元突起生长。 展开更多

关键词 RHO激酶 坍塌反应调节蛋白 实时荧光定量PCR 突起生长

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP2蛋白促进海马神经元树突野的形成

5

作者 李素梅 李炯 +3 位作者 张家琪 陈立 张吉凤 郭国庆 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期391-397,共7页

目的:探讨坍塌反应调节蛋白2(CRMP2)对海马神经元树突野形成的作用.方法:培养大鼠海马神经元,用基因转染的方法检测CRMP2蛋白的作用,免疫荧光显示树突,全细胞膜片钳检测微小兴奋性突触后电流(mEPSCs).结果:过表达CRMP2促进树突的生长以... 目的:探讨坍塌反应调节蛋白2(CRMP2)对海马神经元树突野形成的作用.方法:培养大鼠海马神经元,用基因转染的方法检测CRMP2蛋白的作用,免疫荧光显示树突,全细胞膜片钳检测微小兴奋性突触后电流(mEPSCs).结果:过表达CRMP2促进树突的生长以及分支形成,而敲减CRMP2抑制树突的生长和形成新的分支,CRMP2基因促进树突野的形成,促使树突野变得复杂(P<0.05);全细胞膜片钳检测显示:CRMP2促进形成的树突能够表达AMPA受体,而且可以诱导出mEPSCs,而敲减CRMP2抑制树突AMPA受体,以及降低mEPSC的幅度和频率,其改变有统计学差异(P<0.05).结论:CRMP2促进功能性树突形成,并提高树突野的复杂性. 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白 树突野 突起生长 神经元

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP-1真核表达载体的构建及其突起生长抑制作用 被引量：3

6

作者 郭国庆 辛莉 +2 位作者 邱小忠 沈伟哉 原林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期297-304,共8页

为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行... 为研究坍塌反应调节蛋白-1(collapsin response mediator protein-1,CRMP-1)对神经元突起生长的作用,构建了CRMP-1真核表达载体,以神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞为模型,采用基因转染、突起生长时差成像、突起提取和免疫印迹技术进行观察.结果显示,NGF诱导的PC12细胞具有典型的神经元形态特征,脂质体转染技术可成功地把CRMP-1基因导入细胞.过表达CRMP-1可明显抑制突起生长,促进突起坍塌,首先是细小突起缩短,然后是长突起,细胞突起的长度随CRMP-1蛋白表达时间延长呈逐渐缩短的趋势.突起提取液的测定显示,CRMP-1过表达的细胞较NGF诱导的和转染空载体的细胞突起明显减少(P<0.01).说明CRMP-1具有明显的突起生长抑制作用. 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白 神经元 突起 生长 基因转染 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

Cdk5-CRMP通路在七氟醚抑制新生大鼠前额叶皮层树突发育中的作用 被引量：6

7

作者 刘延辉 夏淑轩 +2 位作者 刘雅芳 柳垂亮 李玉娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1729-1736,共8页

目的:探究七氟醚对新生大鼠前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)树突发育的影响及与细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5,Cdk5)-坍塌反应调节蛋白(collapsin response mediator protein,CRMP)通路的关系。方法:88只出生后... 目的:探究七氟醚对新生大鼠前额叶皮层(prefrontal cortex,PFC)树突发育的影响及与细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5,Cdk5)-坍塌反应调节蛋白(collapsin response mediator protein,CRMP)通路的关系。方法:88只出生后7 d的SD大鼠随机分为4组,每组22只:空白对照组(Air+NS组),Cdk5抑制剂roscovitine(Ros)对照组(Air+Ros组),Sevo+NS组,Sevo+Ros组。前2组吸入空气,后2组吸入2.8%七氟醚4 h。Air+Ros组和Sevo+Ros组在麻醉前15 min经腹腔注射10 mg/kg的Cdk5抑制剂roscovitine。其余2组则在麻醉前15min经腹腔注射150μL生理盐水。麻醉结束后,每组各取5只幼鼠,取出新鲜皮质组织,Western blot检测P35、P25、Cdk5,CRMP1、2、4的蛋白表达以及CRMP2 Ser 522的磷酸化水平。剩余幼鼠继续饲养,出生后30 d每组各取6只幼鼠,取脑进行高尔基染色,制备冰冻切片,镜下观察神经元形态。其余幼鼠在出生后25~27 d进行旷场试验,31~32 d进行情景依赖性恐惧记忆检测。结果:(1)与Air+NS组比较,Sevo+NS组的P35减少了47.32%,同时P25增加了173.77%(P<0.05);Sevo+Ros组的P35比Sevo+NS组增加了78.81%,其P25则减少了60.22%(P<0.05)。Cdk5表达组间差异尚无统计学意义。(2)与Air+NS组比较,Sevo+NS组的总CRMP1、2和4表达分别下降了36.22%、53.74%和51.28%(P<0.05),同时p-CRMP2 Ser522/CRMP2比值增加了96.20%(P<0.05);Sevo+Ros组的总CRMP1和4与Sevo+NS组比较分别增加了56.95%和88.91%(P<0.05),而pCRMP2 Ser522/CRMP2比值下降了43.58%(P<0.05)。(3)与Air+NS组比较,Sevo+NS组的树突总长度、第二级树突长度以及60和80μm直径圆环上的交点数均显著下降(P<0.01)。Sevo+Ros组的树突总长度、第二级树突长度以及60和80μm直径圆环上的交点数均比Sevo+NS组显著增加(P<0.05)。(4)在恐惧记忆实验中,与Air+NS组比较,Sevo+NS组大鼠的"木僵"时间比Air+NS组减少约21%(P<0.05)。Sevo+Ros组的"木僵"时间比Sevo+NS组显著增加(P<0.05)。各组幼鼠在旷场实验的结果均无统计学差异。结论:七氟醚抑制了新生大鼠前额叶皮层神经元树突的正常生长发育和幼鼠学习记忆能力,而Cdk5-CRMP通路激活可能是七氟醚引起神经发育毒性的机制之一。 展开更多

关键词 七氟醚 前额叶皮层 细胞周期依赖性蛋白激酶5 坍塌反应调节蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMPs对神经元突起生长的调控 被引量：2

8

作者 郭国庆 张吉凤 纪志盛 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期557-561,共5页

神经元突起是建立神经网络的物质基础,其生长为生长信号启动胞内信号促使神经元不断极化的过程。作为Rho GTPases的下游信号,CRMPs富集于神经系统,参与神经元的发育过程,可作为不同信号通路的共同受体后分子,通过改变细胞骨架的运动调... 神经元突起是建立神经网络的物质基础,其生长为生长信号启动胞内信号促使神经元不断极化的过程。作为Rho GTPases的下游信号,CRMPs富集于神经系统,参与神经元的发育过程,可作为不同信号通路的共同受体后分子,通过改变细胞骨架的运动调控突起生长。其不同亚基的功能分化、不同亲和性特点显示其具有突起生长调控的分子开关特征,有效地控制突起的生长不仅是发育神经生物学的基本问题,也为重建因神经损伤和退行性疾病受到破坏的神经网络提供可行的作用靶点。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白 神经元 细胞骨架 突起 生长

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠海马发育过程中Rho GTPases相关信号分子mRNA的表达 被引量：1

9

作者 郭国庆 张吉凤 +4 位作者 辛莉 陈静 沈伟哉 原林 钟世镇 《解剖学研究》 CAS 2008年第2期81-85,共5页

目的探讨Rho GTPases相关信号分子的发育规律。方法RT-PCR法检测大鼠发育不同阶段Rho-A、Rac-1、CRMP-1和Tub β3mRNA的表达。结果RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在各个阶段均呈高表达。Rho-A和R... 目的探讨Rho GTPases相关信号分子的发育规律。方法RT-PCR法检测大鼠发育不同阶段Rho-A、Rac-1、CRMP-1和Tub β3mRNA的表达。结果RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在各个阶段均呈高表达。Rho-A和Rac-1的表达有相似的变化规律,随着海马发育呈明显的阶段性,表达的高峰在胚胎、幼年和老年阶段,而新生阶段和成年阶段处于相对低表达阶段;Rac-1的表达量在海马发育的各个阶段均超过Rho-A的表达量。CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年的各个阶段与CRMP-1的表达具有相似的变化趋势,以胎鼠、新生大鼠和幼年大鼠表达较多,但老年阶段CRMP-1的表达较成年阶段显著升高(P<0.05),而Tubβ3在老年阶段停留在成年阶段的水平。结论大鼠海马发育过程中,Rho-A和Rac-1呈阶段性高表达,CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年逐渐减少,但老年阶段CRMP-1表达再次增多。 展开更多

关键词 RHO GTPASES G蛋白 坍塌反应调节蛋白-1 微管 海马 发育 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP5在胃癌细胞的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量：1

10

作者 陈立冬 张连峰 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2020年第6期750-755,共6页

目的:研究胃癌细胞中坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)的表达,并探讨CRMP5对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法分别检测人胃黏膜上皮正常细胞(GES-1细胞)和胃癌细胞(AGS、MGC-803细胞)中CRMP5的... 目的:研究胃癌细胞中坍塌反应调节蛋白5(CRMP5)的表达,并探讨CRMP5对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR与Western blot法分别检测人胃黏膜上皮正常细胞(GES-1细胞)和胃癌细胞(AGS、MGC-803细胞)中CRMP5的表达水平。将si-con和si-CRMP5转染MGC-803细胞后,用MTT法检测细胞活力,双染法检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测细胞中CRMP5的表达及相关蛋白Ki-67、Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达情况;均以未处理细胞作对照。结果:与胃黏膜上皮正常细胞相比,胃癌细胞中CRMP5的表达水平升高(P<0.05)。沉默CRMP5后,MGC-803细胞增殖能力减弱(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),细胞的迁移和侵袭能力减弱(P<0.05),且MGC-803细胞中Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05),Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:CRMP5在胃癌细胞中高表达,干扰其表达可以明显抑制细胞增殖、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 胃癌 坍塌反应调节蛋白5 增殖 迁移 侵袭

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠海马发育过程中CRMPs家族mRNA的表达

11

作者 李斌 王圆圆 +3 位作者 张吉凤 龚晓兵 郭国庆 沈伟哉 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期623-627,共5页

目的:探讨大鼠海马发育过程中坍塌反应调节蛋白(CRMPs)家族mRNA的表达规律。方法:用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段CRMPs家族mRNA的表达。结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin电泳条带在发育各时期灰度无明显差异... 目的:探讨大鼠海马发育过程中坍塌反应调节蛋白(CRMPs)家族mRNA的表达规律。方法:用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段CRMPs家族mRNA的表达。结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin电泳条带在发育各时期灰度无明显差异。CRMP-1 mRNA以新生鼠和幼年鼠表达最多,成年大鼠弱表达(P<0.05)。CRMP-2从胚胎鼠至幼年鼠呈现逐渐增加的趋势,成年鼠相对较低(P<0.05)。CRMP-3以幼鼠和成年大鼠表达较多,其中幼鼠表达最多(P<0.05),新生鼠表达最少(P<0.05)。CRMP-4在胎鼠、新生鼠和幼年鼠表达量接近,成年鼠表达相对较低(P<0.05)。CRMP-5在各个阶段均呈较高表达,以新生鼠和成年鼠表达较多,其中成年大鼠表达最多(P<0.05),胎鼠表达最弱(P<0.05)。结论:从胚胎期至幼年期,CRMPs家族除CRMP-4稳定于高表达水平外,其余成员表达量均逐渐增多,其中CRMP-3和CRMP-5区别于其他成员,在成年期表达量继续增高。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白家族 基因 发育 海马 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠CRMP1基因siRNA的筛选

12

作者 张忠其 李斌 +3 位作者 陈万群 张文斌 龚晓兵 郭国庆 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期560-564,共5页

目的:筛选有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。方法:化学合成3对针对大鼠CRMP1基因的特异性siRNA,用脂质转染胺(lipofectamine)LTX转染大鼠海马神经元,通过流式细胞仪检测转染效率,使用RT-PCR与实时PCR检测CRMP1基因mRNA的表达,从... 目的:筛选有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。方法:化学合成3对针对大鼠CRMP1基因的特异性siRNA,用脂质转染胺(lipofectamine)LTX转染大鼠海马神经元,通过流式细胞仪检测转染效率,使用RT-PCR与实时PCR检测CRMP1基因mRNA的表达,从而筛选抑制效率最高的siRNA。结果:流式细胞仪检测转染效率为52.5%。通过RT-PCR的初步检测和实时PCR的定量检测结果显示,与对照组相比,所设计的3对siRNA均能不同程度抑制CRMP1基因mRNA的表达,其中CRMP1-249 siRNA抑制效果最佳,抑制率达84.3%。结论:成功筛选出1对能有效抑制大鼠CRMP1基因表达的siRNA序列。 展开更多

关键词 小干扰RNA 坍塌反应调节蛋白1 实时荧光定量PCR 大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP-1真核表达载体的构建

13

作者 乔宠 常瑞晶 王春辉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期293-296,共4页

目的构建人坍塌反应调节蛋白1(CRMP-1)基因表达载体,以研究CRMP-1蛋白在目的细胞中的生物学功能。方法从购买的人胚肾细胞株293T中提取总RNA,经过RT-PCR方法扩增含人CRMP-1基因的全长cDNA,将CRMP-1基因开放阅读框(ORF)cDNA序列,克隆到... 目的构建人坍塌反应调节蛋白1(CRMP-1)基因表达载体,以研究CRMP-1蛋白在目的细胞中的生物学功能。方法从购买的人胚肾细胞株293T中提取总RNA,经过RT-PCR方法扩增含人CRMP-1基因的全长cDNA,将CRMP-1基因开放阅读框(ORF)cDNA序列,克隆到真核表达载体p3x-FLAG-myc-CMV-24中,构建真核表达质粒CRMP-1-p3x-FLAG-myc-CMV-24。以酶切和基因序列测定方法鉴定重组质粒CRMP-1-p3x-FLAG-myc-CMV-24的正确性。结果酶切鉴定和基因序列测定均证实重组质粒CRMP-1-p3x-FLAG-myc-CMV-24构建正确。结论成功构建人CRMP-1基因真核表达载体。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白1 基因克隆 真核表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP2与Ubc9在电针缓解慢性压迫性损伤模型大鼠神经病理性疼痛中的作用

14

作者 樊远志 张峻峰 吴耀持 《针灸临床杂志》 2023年第12期71-76,共6页

目的:探讨电针对慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及相关机制。方法:选取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组与电针+激活剂组,每组10只。构建慢性压迫性损伤(CCI)大鼠模型,并按组别进行相应... 目的:探讨电针对慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的缓解作用及相关机制。方法:选取雄性SD大鼠40只,随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组与电针+激活剂组,每组10只。构建慢性压迫性损伤(CCI)大鼠模型,并按组别进行相应干预。测定大鼠痛觉敏感性,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中IL-1β、IL-6和IL-8表达水平,RT-qPCR检测大鼠脊髓中CRMP2、Ubc9 mRNA及Western bolting检测大鼠脊髓中坍塌反应调节蛋白2(CRMP2)、泛素结合酶9(Ubc9)蛋白水平。结果:CCI大鼠模型建成后,各组大鼠PWLD均显著升高且>4 s,差异具有统计学意义(P<0.05);在给予大鼠相应干预后,与假手术组比较,模型组大鼠患健侧PWLD显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠患健侧PWLD更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-8水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组和电针+激活剂组大鼠脊髓CRMP2、Ubc9 mRNA和蛋白表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05);电针+激活剂组各指标均优于电针组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针可有效缓解CCI模型大鼠神经病理性疼痛,其作用机制可能是电针刺激穴位后引起机体CRMP2、Ubc9表达水平增加,抑制炎症反应,诱导镇痛。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白2 泛素结合酶9 电针 慢性压迫性损伤 神经病理性疼痛

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP2对七氟醚诱导的发育大鼠远期记忆功能障碍的影响 被引量：1

15

作者 黄泽琪 张昆 《岭南急诊医学杂志》 2023年第6期527-530,共4页

目的:探究坍塌反应调节蛋白2对七氟醚诱导的发育大鼠远期记忆功能障碍的影响。方法:构建CRMP2靶基因的野生型腺病毒,进行SD幼鼠海马定位注射,应用Western Blot、免疫荧光验证过表达效果。腺病毒注射后将幼鼠养至第七天,进行空气与七氟... 目的:探究坍塌反应调节蛋白2对七氟醚诱导的发育大鼠远期记忆功能障碍的影响。方法:构建CRMP2靶基因的野生型腺病毒,进行SD幼鼠海马定位注射,应用Western Blot、免疫荧光验证过表达效果。腺病毒注射后将幼鼠养至第七天,进行空气与七氟醚暴露4 h,31-32天时进行场景恐惧记忆实验。结果:在场景恐惧记忆实验中,七氟醚暴露后的大鼠的“木僵”时间明显降低。然而,过表达CRMP2能够逆转七氟醚所致的大鼠“木僵”时间的下降,提示七氟醚能够导致大鼠远期记忆功能损害,而CRMP2能够逆转七氟醚所致的记忆功能障碍。结论:七氟醚诱导新生大鼠远期记忆功能障碍的机制可能与抑制CRMP2表达有关。 展开更多

关键词 七氟醚 坍塌反应调节蛋白2 场景恐惧记忆实验

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP-1在早发型先兆子痫妇女胎盘中的表达水平及临床意义 被引量：2

16

作者 袁银花 冯双苗 张化莲 《中国实验诊断学》 2018年第11期1914-1918,共5页

目的检测早发型先兆子痫妇女胎盘中坍塌反应调节蛋白-1(CRMP-1)的表达,分析其与先兆子痫临床特点的关系。方法收集30例早发型先兆子痫、30例迟发型先兆子痫孕妇作为研究对象,另选取同时期因各种原因终止妊娠的健康孕妇60例,将其按照孕... 目的检测早发型先兆子痫妇女胎盘中坍塌反应调节蛋白-1(CRMP-1)的表达,分析其与先兆子痫临床特点的关系。方法收集30例早发型先兆子痫、30例迟发型先兆子痫孕妇作为研究对象,另选取同时期因各种原因终止妊娠的健康孕妇60例,将其按照孕周进行匹配分别作为早发型先兆子痫的对照组A、迟发型先兆子痫的对照组B。采用免疫组化法检测各组孕妇胎盘组织中CRMP-1的表达情况,并进行各分组间的分析。结果健康孕妇胎盘组织中CRMP-1的表达量随孕周呈下降趋势,妊娠早期CRMP-1的强阳性表达量明显高于妊娠晚期(P<0.05)。早发型先兆子痫孕妇胎盘CRMP-1阳性表达水平明显高于同孕周健康对照组A(P<0.05),但轻度组与重度组胎盘组织中CRMP-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);早发型先兆子痫孕妇胎盘CRMP-1阳性表达水平明显高于迟发型先兆子痫孕妇(P<0.05),但迟发型先兆子痫孕妇胎盘CRMP-1水平与对照组B并无显著差异(P>0.05)。结论CRMP-1在早发型先兆子痫孕妇胎盘中表达水平明显升高,可能参与早发型先兆子痫的发生。 展开更多

关键词 先兆子痫 早发型 胎盘 坍塌反应调节蛋白-1

在线阅读 下载PDF 职称材料

CRMP2对七氟醚诱导的大鼠原代海马神经元树突发育障碍的影响

17

作者 黄泽琪 黄武剑 +1 位作者 宋雯 李玉娟 《岭南急诊医学杂志》 2019年第2期102-105,121,共5页

目的:探究坍塌反应调节蛋白2对七氟醚所致原代海马神经元树突发育障碍的影响。方法:采用野生型CRMP2慢病毒转染原代海马神经元, RT-PCR、WesternBlot验证过表达效果。转染24 h后,处理组经过4.0%的七氟醚暴露8 h后,检测细胞活力,神经元... 目的:探究坍塌反应调节蛋白2对七氟醚所致原代海马神经元树突发育障碍的影响。方法:采用野生型CRMP2慢病毒转染原代海马神经元, RT-PCR、WesternBlot验证过表达效果。转染24 h后,处理组经过4.0%的七氟醚暴露8 h后,检测细胞活力,神经元细胞密度以及树突总长度和分支数。结果:七氟醚诱导的原代海马神经元,出现神经元细胞活力下降、密度降低以及树突总长度以及分支数减少。促进CRMP2表达,不能逆转七氟醚所致海马神经元数量减少和活力降低,但能减轻七氟醚所致树突总长度降低。结论:七氟醚干扰原代海马神经元树突发育的机制可能与抑制CRMP2功能有关。 展开更多

关键词 七氟醚 原代海马神经元 坍塌反应调节蛋白2

在线阅读 下载PDF 职称材料

年龄相关钙蛋白酶2上调C499促进前列腺间质细胞增生导致前列腺增生的发生机制 被引量：1

18

作者 梁伟聪 孙卓伦 +3 位作者 毛云华 王喻 李科 高新 《中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）》 2021年第5期367-372,共6页

目的探讨前列腺增生(BPH)的发病机制。我们前期发现塌陷反应调节蛋白4(CRMP4)受前列腺组织内钙调蛋白2切割产生两个片段,其中N端产物为C499(1-498aa),C499进入细胞核作用E2F1促进细胞增殖。我们认为C499上升促进前列腺间质细胞增生导致... 目的探讨前列腺增生(BPH)的发病机制。我们前期发现塌陷反应调节蛋白4(CRMP4)受前列腺组织内钙调蛋白2切割产生两个片段,其中N端产物为C499(1-498aa),C499进入细胞核作用E2F1促进细胞增殖。我们认为C499上升促进前列腺间质细胞增生导致BPH的发生。方法收集BPH病例按年龄建立队列。分别做CD86+M1巨噬细胞、钙蛋白酶2、C499、CRMP4的免疫组化(IHC),评估CD86+M1巨噬细胞、钙蛋白酶2与C499表达与年龄和BPH间质组织增生的联系。C499基因质粒转染RWPE-1细胞,观察细胞增殖。结果在60例BPH患者各年龄组,IHC检测显示CD86+M1巨噬细胞、钙蛋白酶2、C499在前列腺间质表达,随年龄增长而升高;而前列腺上皮细胞内CRMP4表达随年龄增加而逐渐减少。CCK-8实验显示C499促进RWPE-1生长。结论随着年龄增长,BPH患者前列腺间质细胞CD86+M1巨噬细胞增加,激活钙蛋白酶2活性;切割因上皮间质细胞转化至前列腺间质细胞的CRMP4,促使C499在前列腺间质表达升高,C499促进前列腺间质细胞增殖,导致BPH的发生。 展开更多

关键词 前列腺增生 老年医学 坍塌反应调节蛋白4 钙蛋白酶 巨噬细胞

原文传递

右美托咪定对异氟醚引起新生大鼠海马细胞凋亡及CRMP2表达的影响 被引量：8

19

作者 曾敏婷 李玉娟 +2 位作者 王飞 韩雪 柳垂亮 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期1165-1169,共5页

目的探讨右美托咪定预处理对异氟醚引起新生大鼠脑发育毒性的保护作用及与坍塌反应调节蛋白-2的关系。方法 60只出生后7 d的SD大鼠,随机分为对照组,右美托咪定预处理对照组,异氟醚组以及异氟醚复合不同剂量右美托咪定(25,50和75μg·... 目的探讨右美托咪定预处理对异氟醚引起新生大鼠脑发育毒性的保护作用及与坍塌反应调节蛋白-2的关系。方法 60只出生后7 d的SD大鼠,随机分为对照组,右美托咪定预处理对照组,异氟醚组以及异氟醚复合不同剂量右美托咪定(25,50和75μg·kg-1)预处理组。对照组吸入空气,异氟醚组吸入0.75%异氟醚6 h。在麻醉前20 min右美托咪定预处理组腹腔内注射不同剂量的右美托咪定,其他组注射150μL生理盐水。麻醉结束后即刻蛋白质印迹法检测海马激活型caspase-3、磷酸化坍塌反应调节蛋白-2(p-CRMP2)以及坍塌反应调节蛋白-2蛋白表达变化(n=6)。麻醉结束后2 h,TUNEL荧光染色检测海马CA1区神经细胞凋亡(n=4)。结果异氟醚组海马CA1区TUNEL阳性细胞数[(95.20±11.74)个·mm-2]较对照组[(17.80±5.09)个·mm-2]增加了434.99%(P<0.001),右美托咪定75μg·kg-1预处理[(39.57±15.49)个·mm-2]降低了异氟醚诱导的TUNEL阳性细胞数71.87%(P<0.001)。异氟醚组激活型caspase-3表达比对照组增加90.20%(P<0.001),右美托咪定25,50和75μg·kg-1预处理减少caspase-3的表达分别是30.54%,53.71%(P<0.05)和96.71%(P<0.001)。异氟醚增加了新生大鼠海马p-坍塌反应调节蛋白-2/坍塌反应调节蛋白-2比值119.41%(P<0.001),没有改变总坍塌反应调节蛋白-2的表达;右美托咪定50和75μg·kg-1预处理降低异氟醚诱导的p-坍塌反应调节蛋白-2/坍塌反应调节蛋白-2比值增加分别为63.75%(P<0.01)和77.70%(P<0.01),同时分别增加了坍塌反应调节蛋白-2的表达44.30%(P<0.05)和62.13%(P<0.01)。结论右美托咪定预处理能通过减少海马细胞凋亡来减轻异氟醚对新生大鼠的脑毒性作用,抑制坍塌反应调节蛋白-2磷酸化和增加坍塌反应调节蛋白-2的表达可能是保护作用的机制之一,为婴幼儿临床麻醉用药的选择提供参考。 展开更多

关键词 异氟醚 右美托咪啶 海马 坍塌反应调节蛋白-2

原文传递