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巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 被引量:65
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作者 欧阳立明 张惠展 +1 位作者 张嗣良 刘志敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页
巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型。
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 载体 受体
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乳酸菌食品级基因表达系统 被引量:15
2
作者 张振中 陈秀珠 +2 位作者 贾士芳 陈美玲 还连栋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期516-520,共5页
乳酸菌是一类重要工业菌株。最近 ,乳酸菌遗传学和分子生物学的研究取得长足进步 ,导致发展了乳酸菌食品级基因表达系统。通过介绍乳酸菌食品级基因表达系统的基本要求、食品级选择性标记、食品级诱导物及该系统的研究进展 ,展示了乳酸... 乳酸菌是一类重要工业菌株。最近 ,乳酸菌遗传学和分子生物学的研究取得长足进步 ,导致发展了乳酸菌食品级基因表达系统。通过介绍乳酸菌食品级基因表达系统的基本要求、食品级选择性标记、食品级诱导物及该系统的研究进展 ,展示了乳酸菌食品级基因表达系统的建立对研究乳酸菌的基因表达调控和它的深层次的开发利用所具有的重要意义。 展开更多
关键词 乳酸菌 食品级 基因表达系统 研究进展
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丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建 被引量:8
3
作者 汪天虹 吴志红 +1 位作者 刘世利 曲音波 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期736-742,共7页
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,... 采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 . 展开更多
关键词 瑞氏木霉 外源基因表达系统 cbhI启动子 构建 表达
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杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装 被引量:5
4
作者 龙虎 姚伦广 +3 位作者 王姗姗 陈士新 谭佩婵 孙京臣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1491-1495,共5页
目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿... 目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。 展开更多
关键词 轮状病毒样颗粒 家蚕杆状病毒 基因表达系统 BmN细胞 疫苗
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甲醇酵母基因表达系统的研究进展 被引量:19
5
作者 李晶 赵晓祥 +2 位作者 沙长青 张淑梅 田洁萍 《生物工程进展》 CSCD 1999年第2期17-20,共4页
在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统——甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母——巴斯德毕赤酵母(Pichiapa... 在大肠杆菌这一传统表达系统被频繁用作研究各种基因表达时,一种新型且有效的基因表达系统——甲醇酵母正逐渐引起人们的注意。此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母——巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)具有高密度生长的特性。因此近年来此表达系统的研究得到迅速发展,在其中表达了多种具有商业价值的外源蛋白。本文对甲醇酵母基因表达系统的特点及研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 甲醇酵母 基因表达系统 外源性 蛋白质
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多形汉逊酵母外源基因表达系统 被引量:11
6
作者 陈凤菊 卢善发 胡敦孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-249,共4页
多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一... 多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一系统中得到成功表达 ,有的已投入市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特性、基因工程操作技术。 展开更多
关键词 多形汉逊酵母 甲醇酵母 外源基因表达系统
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一种简单有效的T7 RNA聚合酶调控的植物基因表达系统 被引量:5
7
作者 路子显 魏晓丽 +2 位作者 伍晓丽 常团结 朱祯 《自然科学进展》 北大核心 2002年第7期702-707,共6页
T7 RNA聚合酶在原核系统的基因表达与调控中起重要作用。将T7 RNA聚合酶基因的5’端与来自SV40大T抗原基因的核定位信号编码序列融合在一起,利用rolC启动子控制修饰的T7 RNA聚合酶基因,与Φ10启动子控制的β-葡萄糖醛酸酶基因串联在一起... T7 RNA聚合酶在原核系统的基因表达与调控中起重要作用。将T7 RNA聚合酶基因的5’端与来自SV40大T抗原基因的核定位信号编码序列融合在一起,利用rolC启动子控制修饰的T7 RNA聚合酶基因,与Φ10启动子控制的β-葡萄糖醛酸酶基因串联在一起,构建了植物表达载体,通过基因枪介导法转化了烟草叶片。结果表明,这一表达系统能够增加β-葡萄糖醛酸酶基因的瞬时表达,这为提高外源基因在转基因植物中的高效表达提供了新的工具。 展开更多
关键词 植物基因表达系统 T7 RNA聚合酶基因 φ10启动子 β-葡萄糖醛酸酶基因 串联表达载体 基因调控
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毕赤酵母外源基因表达系统研究进展 被引量:8
8
作者 杜中军 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 翟衡 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第4期7-11,共5页
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、... 巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源基因表达系统 研究进展 甲醇营养型酵母
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Tet-on基因表达系统反应质粒P^(TRE-HIF-1α)的构建和表达鉴定 被引量:2
9
作者 徐宗全 陈孝平 +3 位作者 张万广 王其 关剑 李高鹏 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2008年第12期887-891,共5页
目的克隆和构建携带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α。方法以缺氧的肝癌细胞株HepG2总RNA为模板,进行RT-巢式PCR,获得HIF-1α的cDNA,克隆入Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE2hyg,酶切重组子鉴定。... 目的克隆和构建携带人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α。方法以缺氧的肝癌细胞株HepG2总RNA为模板,进行RT-巢式PCR,获得HIF-1α的cDNA,克隆入Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE2hyg,酶切重组子鉴定。将构建好的PTRE-HIF-1α用脂质体法转入HepG2Tet-on细胞,在强力霉素的作用下,用RT-PCR及Westernblot法鉴定重组质粒的表达。结果扩增出HIF-1α的cDNA测序结果与Genbank记载完全一致,并成功克隆入PTRE2hyg,将反应质粒PTRE-HIF-1α转入HepG2Tet-on细胞,可以完整有效表达HIF-1α且受强力霉素的调控。结论成功克隆和构建携带HIF-1α基因的Tet-on基因表达系统反应质粒PTRE-HIF-1α,并证明其表达能在HepG2Tet-on细胞中受强力霉素调控。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 巢式PCR Tet-on基因表达系统 反应质粒 克隆
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一种值得注意的基因表达系统——巴斯德毕赤氏酵母 被引量:16
10
作者 戴秀玉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期483-485,共3页
正当我们热衷于利用大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)等传统表达系统来研究各种基因表达时,国外一些新型表达系统正在悄然兴起。这些系统有着独特的优点,潜力很大,可能对今后基因工程产品的开发和生物技... 正当我们热衷于利用大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cervisiae)等传统表达系统来研究各种基因表达时,国外一些新型表达系统正在悄然兴起。这些系统有着独特的优点,潜力很大,可能对今后基因工程产品的开发和生物技术的发展产生重要作用。其中巴斯德毕赤氏酵母(Pichia Pastoris)特别值得引起我们的注意。本文对该系统作一简要评述。 展开更多
关键词 基因表达 基因表达系统 酵母 毕赤氏酵母
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利用爪蟾卵母细胞建立人类低密度脂蛋白受体基因表达系统 被引量:2
11
作者 沃兴德 范春雷 +3 位作者 罗艳 钱颖 卢德赵 唐利华 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2005年第2期138-142,共5页
目的 在爪蟾卵母细胞中建立人类低密度脂蛋白受体基因的表达系统,此系统可被用于降血脂和抗动脉粥样硬化的研究。方法和结果 冰块麻醉爪蟾,切取卵巢,获得V、VI期卵母细胞,经用1g/L胶原酶孵育过夜除去卵母细胞外层的卵巢膜和滤泡膜,培... 目的 在爪蟾卵母细胞中建立人类低密度脂蛋白受体基因的表达系统,此系统可被用于降血脂和抗动脉粥样硬化的研究。方法和结果 冰块麻醉爪蟾,切取卵巢,获得V、VI期卵母细胞,经用1g/L胶原酶孵育过夜除去卵母细胞外层的卵巢膜和滤泡膜,培养3天后存活率仍可达95 %以上。用DiI标记的低密度脂蛋白荧光配体测定膜上结合荧光,发现V、VI期卵母细胞膜上未见有内源性低密度脂蛋白受体,如将人低密度脂蛋白受体的表达质粒p3.7低密度脂蛋白导入爪蟾卵母细胞核中,培养后用DiI标记的低密度脂蛋白配体测定可见膜上发出红色荧光,用抗低密度脂蛋白受体的抗体经免疫荧光检测法测定可见膜上有绿色荧光,免疫胶体金标记透射电镜检测可见膜上有内吞的胶体金颗粒。结论 外源性的人类低密度脂蛋白受体基因能在爪蟾V、VI期卵母细胞中表达,此低密度脂蛋白受体基因表达系统可用于中药降血脂抗动脉粥样硬化机理的研究。 展开更多
关键词 细胞生物学 低密度脂蛋白受体基因表达系统 细胞核显微注射 爪蟾卵母细胞 低密度脂蛋白 动脉粥样硬化 质粒构建
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常用基因表达系统的特点及其在寄生虫抗原制备中的应用 被引量:3
12
作者 言慧 陈晓光 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2003年第2期118-122,共5页
关键词 基因表达系统 特点 寄生虫 抗原制备
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甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立 被引量:3
13
作者 杨凯 庞义 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期412-418,共7页
用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能... 用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制 ,称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成 ,每个bacmid携带了一种病毒基因型 ,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对 111个bacmid分析表明 ,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外 ,还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞 ,可产生子代病毒 ,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因 (Seph)被插入失活 ,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se3 0 1后 ,细胞出现典型的病理变化 ,核中出现多角体 ,证明SeMNPVBAC TO 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 BAC-TO-BAC外源基因表达系统 BAC文库 位点特异性重组 多角体蛋白基因
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Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统 被引量:1
14
作者 龚小卫 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期420-424,共5页
Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基... Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用 。 展开更多
关键词 诱导性基因表达系统 基因调控 基因治疗 Tetro-Tet 逆转录病毒
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 被引量:1
15
作者 全胜 严杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期14-15,20,共3页
从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨... 从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %~ 99.71%和 97.5 8%~ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 基因表达系统 构建
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乳酸菌食品级基因表达系统的研究进展 被引量:9
16
作者 王海英 祁克宗 彭开松 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第1期8-9,共2页
关键词 基因表达系统 乳酸菌 食品级 革兰氏阳性细菌 碳水化合物 分子遗传学 分子生物学 乳酸乳球菌
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基因表达系统与转基因动物乳腺反应器 被引量:1
17
作者 张旭晨 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 1999年第2期193-198,共6页
出于研究、医疗或工业目的,常常需要大量置备各种生物活性蛋白质,为此已经建立了多种基因工程表达系统,如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年,利用转基因动物作为生物反应器由乳... 出于研究、医疗或工业目的,常常需要大量置备各种生物活性蛋白质,为此已经建立了多种基因工程表达系统,如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年,利用转基因动物作为生物反应器由乳汁中生产蛋白药物的研究取得了很大进展,有多种动物可被用于转基因。基本过程是将基因构件显微注射到单细胞期受精卵,基因构件以一定几率整合到受体基因组中。通常转基因和其表达模式可忠实地遗传。许多蛋白将以高浓度低成本由转基因家畜的奶中生产。这些转基因动物与传统的动物细胞培养和细菌发酵技术相比尤显高效。乳腺能完成包括二硫桥形成、酰胺化、羧基化和糖基化在内的翻译后修饰,1头转基因羊就是1套发酵罐。据预测,到2010年由转基因动物生产的蛋白药物占全部基因工程药物的比率将增长到95%以上。 展开更多
关键词 基因表达系统 基因动物 乳腺反应器
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甲醇酵母基因表达系统研究
18
作者 王志方 艾秀莲 +4 位作者 李晨华 王玮 张伟 冯怀蓉 王成 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第4期222-224,共3页
甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的... 甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的内容。 展开更多
关键词 甲醇酵母 基因表达系统 发酵工艺 受体菌 表达载体
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四环素调控基因表达系统的研究新进展 被引量:2
19
作者 谢丽 覃文新 万大方 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期522-524,共3页
关键词 四环素 调控 基因表达系统 研究进展 肿瘤
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甲基营养型酵母基因表达系统 被引量:1
20
作者 汪德刚 李河民 《微生物学免疫学进展》 1998年第4期61-64,共4页
甲基营养型酵母为第二代酵母表达系统,具有表达水平高,产物活性好,培养成本低,易扩大为工业化生产等特点,近来得到越来越广泛的应用。本文就该系统的载体构件、外源基因与宿主染色体的整合、分泌表达。
关键词 甲基营养型酵母 酵母 基因表达系统 表达
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