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低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响机制
1
作者 吕梦姣 杨毅 +6 位作者 田晓寒 廖礼彬 阿不都热西提·库提彼丁 王梦慈 周晓丹 袁孙强 白生宾 《中国现代医学杂志》 2025年第5期24-31,共8页
目的探究低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响机制。方法将鼠源性巨噬细胞系(RAW264.7)与鼠源性BMSCs系CP-M131细胞培养至第3代,用白细胞介素-4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,提取并鉴定常氧与低氧... 目的探究低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响机制。方法将鼠源性巨噬细胞系(RAW264.7)与鼠源性BMSCs系CP-M131细胞培养至第3代,用白细胞介素-4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,提取并鉴定常氧与低氧培养条件下M2型巨噬细胞的外泌体。将CP-M131细胞分为PBS组、N-M2 exo组与H-M2 exo组,分别与PBS、90 ng/mL N-M2 exo及90 ng/mL H-M2 exo共孵育72 h。孵育结束后,通过免疫荧光观察BMSCs系CP-M131细胞对不同氧气条件下M2型巨噬细胞外泌体的摄取情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western blotting检测BMSCs中摄取不同实验组外泌体后骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)、成骨特异性转录因子(Runx)基因和蛋白表达,以及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达。采用ALP染色评估不同氧气条件M2型巨噬细胞外泌体对BMSCs成骨能力的影响。结果成功诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,且提取到不同处理组的外泌体。qRT-PCR和Western blotting结果表明,与N-M2 exo组比较,H-M2 exo组的CP-M131细胞BMP-2、ALP、Runx基因和蛋白表达均上调(P<0.05);H-M2 exo组的ERK与p-ERK蛋白表达均上调(P<0.05)。ALP染色观察到低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体促进CP-M131细胞成骨分化。结论低氧条件下M2型巨噬细胞外泌体可以促进BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 M2型巨噬细胞 外泌体 骨分化 氧条件
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肺癌细胞外泌体诱导M2型巨噬细胞的极化促进肺癌细胞迁移和侵袭作用及其机制研究
2
作者 周薇 李金权 +2 位作者 马文卓 王有德 童红梅 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期362-366,373,共6页
目的:探究肺癌细胞外泌体对M2型巨噬细胞诱导的肺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:提取并鉴定16HBE、A549、H522细胞所分泌的外泌体(16HBE exo、A549 exo、H522 exo),将10μg/ml 16HBE exo、A549 exo、H522 exo、等体积PBS与M0型巨噬细胞... 目的:探究肺癌细胞外泌体对M2型巨噬细胞诱导的肺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:提取并鉴定16HBE、A549、H522细胞所分泌的外泌体(16HBE exo、A549 exo、H522 exo),将10μg/ml 16HBE exo、A549 exo、H522 exo、等体积PBS与M0型巨噬细胞共孵育(16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、PBS组),qRT-PCR检测各组巨噬细胞Arginase-1、CD206、CD163、TGF-β、iNOS、IL-1β表达,流式细胞术检测各组巨噬细胞中CD206+CD163+的表达,Western blot检测ERK1/2和STAT3磷酸化水平。将A549和H522细胞与上述各组巨噬细胞共孵育(16HBE exo+M0组、A549 exo+M0组、H522 exo+M0组、PBS+M0组),使用Transwell检测A549和H522细胞迁移和侵袭能力。结果:相比于PBS组,A549 exo组和H522 exo组巨噬细胞Arginase-1、CD206、CD163、TGF-β表达显著上调(P<0.001),iNOS和IL-1β表达显著下调(P<0.001),CD206+CD163+巨噬细胞比例显著增加(P<0.001),ERK1/2和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。16HBE exo组上述指标与PBS组相比差异无统计学意义(P>0.05)。A549 exo+M0组和H522 exo+M0组A549和H522细胞迁移和侵袭能力均显著增加(P<0.001)。结论:肺癌细胞外泌体可通过激活ERK1/2/STAT3信号通路诱导M2型巨噬细胞极化而促进肿瘤的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 肺癌 外泌体 M2型巨噬细胞 迁移 侵袭
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2型糖尿病来源外泌体转运circ_001895对高糖胁迫下内皮祖细胞功能的影响
3
作者 张洁 张丽 +1 位作者 王晨菲 罗荔 《河北医学》 CAS 2024年第10期1592-1597,共6页
目的:探讨2型糖尿病(T2DM)来源的外泌体(EXO)中转运环状RNA_001895(circ_001895)对高糖胁迫下内皮祖细胞的增殖、凋亡、迁移及血管生成标志物的影响。方法:从T2DM患者中获取血清样本,分为血清组和EXO组。采用RT-qPCR技术检测血清和EXO中... 目的:探讨2型糖尿病(T2DM)来源的外泌体(EXO)中转运环状RNA_001895(circ_001895)对高糖胁迫下内皮祖细胞的增殖、凋亡、迁移及血管生成标志物的影响。方法:从T2DM患者中获取血清样本,分为血清组和EXO组。采用RT-qPCR技术检测血清和EXO中circ_001895的表达水平。将T2DM患者血清来源的EXO中circ_001895表达显著升高的EXO命名为EXO-circ。使用武汉普诺赛公司提供的内皮祖细胞进行培养,并分为以下3组:Ctrl组:常规培养24h,不进行额外处理。高糖(HG)组:以30mmoL/L葡萄糖处理细胞24h。HG+EXO-circ组:以30mmoL/L葡萄糖联合100μg/mL的EXO-circ处理细胞24h。采用RT-qPCR技术检测各组细胞中circ_001895的表达。使用CCK-8法检测细胞增殖活力。通过流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用Western blot技术检测血管生成标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。通过Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力。结果:与血清组相比,EXO组中circ_001895的相对表达量显著上调(P<0.05)。与Ctrl组相比,HG组中circ_001895和E-cadherin的相对表达量及细胞凋亡率均显著上调(均P<0.05),而细胞增殖活力、迁移能力以及N-cadherin和Vimentin的相对表达量均显著下调(均P<0.05)。与HG组相比,HG+EXO-circ组中circ_001895和E-cadherin的相对表达量及细胞凋亡率均显著上调(均P<0.05),而细胞增殖活力、迁移能力以及N-cadherin和Vimentin的相对表达量均显著下调(均P<0.05)。结论:T2DM来源的EXO转运circ_001895抑制高糖胁迫下内皮祖细胞的增殖、迁移以及血管生成,并促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 2型糖尿病 外泌体 环状RNA_001895 内皮祖细胞 迁移 血管生成
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过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞外泌体调控小胶质细胞M2型极化对脑卒中的影响 被引量：3
4
作者 郝磊 卢柳西 +3 位作者 李琼莉 孙洋 秦翠玲 展群岭 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期458-466,共9页
目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)过表达miR-124-1基因(Exo/124-1)调控小胶质细胞(microglia,MG)的M2型极化对脑卒中的影响。方法分离培养大鼠BMMSCs,收集其Exo(BMMSC... 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)过表达miR-124-1基因(Exo/124-1)调控小胶质细胞(microglia,MG)的M2型极化对脑卒中的影响。方法分离培养大鼠BMMSCs,收集其Exo(BMMSCs-Exo),采用流式细胞术、Western blot与透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)分别对其进行检测鉴定。30只大鼠简单随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、Exo移植组(Exo组)、空病毒(Empty lentivirus,Elv)转染Exo移植组(Exo-Elv组)及Exo/124-1移植组(Exo/124-1组),每组6只。Sham组仅行假手术,其余各组均复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)模型。模型复制1 d与14 d后,各移植组动物于右侧脑室植入相应移植物,Sham组、模型组注入相同剂量生理盐水作对照。术后2 h及1、3、7、14、21、28 d,分别对各组动物行改良神经系统严重程度评分(modified neurological severity scores,mNSS)。三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色检测其梗死体积。在基因与蛋白水平分别检测各组28 d脑组织MG的M1型分子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]、M2型分子(CD206)的表达情况。结果成功获取并鉴定了BMMSCs及其Exo。Exo/124-1显著表达miR-124-1。所有动物(假手术组除外)术后出现神经功能缺损。术后7~28 d,Exo/124-1组的mNSS明显低于MCAO/R组(P<0.05)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01);术后28 d,Exo/124-1组的脑梗死体积、TNF-α的表达明显小于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01),CD206的表达显著高于MCAO/R组(P<0.01)与Exo组、Exo-Elv组(P<0.01)。结论BMMSCs-Exo携带miR-124-1基因可能调控MG的M2型极化,抑制M1型介导的炎症反应,促进脑卒中大鼠神经功能的恢复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 miR-124-1基因 大脑中动脉栓塞/再灌注 M2型极化
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外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌的表达及其诱导巨噬细胞M2型极化的临床意义
5
作者 杜艾浓 唐妮 +2 位作者 陈旭祥 周爽 曾江正 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2024年第5期417-423,共7页
目的探讨外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,及其诱导巨噬细胞M2极化对HCC预后的影响。方法基于GSE97332联合HCC患者血清外泌体环状RNA(cirRNAs)测序数据筛选出circ_0003759。透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定及检测... 目的探讨外泌体来源的circ_0003759在肝细胞癌(HCC)中的表达情况,及其诱导巨噬细胞M2极化对HCC预后的影响。方法基于GSE97332联合HCC患者血清外泌体环状RNA(cirRNAs)测序数据筛选出circ_0003759。透射电镜及蛋白质免疫印迹法鉴定及检测外泌体,荧光定量PCR检测外泌体circ_0003759表达水平。PKH26标记HCC外泌体与人巨噬细胞共培养,流式细胞术检测巨噬细胞M2型极化标记物CD206和CD209。构建sh_circ_0003759慢病毒并转染至肝癌HCCLM3细胞,抽提外泌体与人巨噬细胞共培养,检测巨噬细胞M2型极化情况。CIBERSORT分析HCC微环境免疫细胞浸润丰度,Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分析M2型巨噬细胞对HCC预后的影响。基因集富集分析(GSEA)巨噬细胞M2型极化的相关信号通路。结果circ_0003759在HCC组织和HCC血清外泌体中表达显著增加(P<0.05)。将HCC外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著上升(P<0.05)。肝癌HCCLM3细胞转染sh_circ_0003759,将其外泌体与人巨噬细胞共同培养后,巨噬细胞CD206和CD209阳性细胞比率显著下降(P<0.05)。此外,HCC组织中M2型巨噬细胞的浸润相对丰度明显高于对照组(P<0.001),生存分析结果表明M2型巨噬细胞相对丰度高的HCC患者预后较差(P<0.05)。GSEA分析显示巨噬细胞M2型极化与补体、炎性反应、干扰素γ及抗肿瘤坏死因子α/细胞核因子κB免疫信号通路的抑制相关。结论HCC外泌体高表达circ_0003759并诱导巨噬细胞M2型极化,与HCC预后差、免疫抑制状态相关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 外泌体 circ_0003759 巨噬细胞M2型极化 肿瘤微环境
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M2型巨噬细胞来源外泌体对食管癌细胞生长行为及人脐静脉血管内皮细胞血管生成的影响
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作者 王玉萍 刘约瑟 +2 位作者 张玉珂 李登科 王玲玲 《中国老年学杂志》 北大核心 2024年第2期407-412,共6页
目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(Exo)对食管癌细胞生长及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响。方法采用佛波酯(PMA)和白细胞介素(IL)-4将人单核细胞系THP1细胞诱导为M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨... 目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(Exo)对食管癌细胞生长及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响。方法采用佛波酯(PMA)和白细胞介素(IL)-4将人单核细胞系THP1细胞诱导为M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨噬细胞相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、重组人精氨酸酶(Arg)1、转化生长因子(TGF)-β及CD206的表达变化;超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的Exo,透射电镜观察形态,粒径分析仪检测粒径分布,Western印迹法检测Exo标志蛋白表达;利用PKH67标记Exo后再与食管癌细胞株EC9706共培养,细胞免疫荧光染色检测Exo被EC9706细胞摄取情况;将分离的Exo与EC9706细胞共培养,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,细胞成管实验检测HUVEC血管生成情况。结果经PMA和IL-4诱导后的细胞内M1型巨噬细胞相关基因TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达水平显著下调(P<0.05),M2型巨噬细胞相关基因Arg1、TGF-β和CD206的mRNA表达水平均显著上调(P<0.05);分离的颗粒物为直径100 nm的典型球状小囊泡,Exo标志蛋白CD9、CD63和TSG101均高水平表达,由此说明成功分离到M2型巨噬细胞来源的Exo,且该Exo可被EC9706细胞摄取;将EC9706细胞与M2型巨噬细胞来源的Exo共培养后,细胞增殖活性显著升高(P<0.05),EdU阳性细胞数显著增加(P<0.05),细胞的迁移数目与侵袭数目均显著增加(P<0.05),此外,HUVEC的血管生成能力显著提高(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞可通过Exo途径促进食管癌细胞的生长,并促进肿瘤血管的形成。 展开更多
关键词 食管癌 M2型巨噬细胞 外泌体 血管生成
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Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体miR-21-5p靶向SKP2缓解支气管肺发育不良
7
作者 蒋焰 王小勤 +5 位作者 梅鸿 刘鑫鑫 廖贞亮 余琨 冯帮海 覃松 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第23期3298-3305,共8页
目的探讨来源于Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)外泌体(exosomal,Exos)-miR-21-5p(简称miR-21)靶向S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,SKP2)对支气管肺泡发育不良(bronchopulmonary dysp... 目的探讨来源于Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC-Ⅱ)外泌体(exosomal,Exos)-miR-21-5p(简称miR-21)靶向S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,SKP2)对支气管肺泡发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保护效应及作用机制。方法使用60只6~8周龄的SD大鼠,其中30只通过差速贴壁离心法提取原代AEC-Ⅱ并进行培养。密度梯度离心法用于获得AEC-Ⅱ来源的外泌体,密度梯度离心法用于提取AEC-Ⅱ培养基中囊泡,并通过透射电镜及粒径分析对其验证,双荧光素报告基因实验以确认miR-21与SKP2的靶向关系。剩余的30只大鼠按照3∶1的雌雄比例混合,以便于进行怀孕检测。将这些新生小鼠随机分为4个不同的实验组:空气对照组(Con组)、高氧处理组(BPD+PBS组)、接受高氧和外泌体治疗的小鼠(BPD+Exos-miR-21组),以及高氧联合外泌体miR-21抑制剂处理组(BPD+Exos-AV-miR-21组)。新生SD大鼠将暴露于85%的氧气环境中,以此建立BPD模型。经过14 d高氧处理后,使用RTq-PCR技术检测肺组织和外泌体中miR-21的表达水平。肺组织经HE染色观察其病理学变化,并计算了平均肺泡线性截距(MLI)和放射状肺泡计数(RAC)。分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的水平,荧光分光光度法测定活性氧簇(ROS)水平。此外,利用Western blot技术检测了SKP2、NR2F2和VEGF-A蛋白的表达水平。结果电镜及粒径分析结果显示AEC-Ⅱ细胞提取的小泡结构物质属于外泌体,miR-21在外泌体中表达显著上调(P<0.01),双荧光素酶基因报告实验证实SKP2为miR-21的作用靶标。与Con组比较,BPD+PBS组及BPD+Exos-AVmiR-21组肺组织HE可见肺组织结构紊乱,肺泡增大、简化,ROS、MDA、MLI增高及SKP2蛋白表达升高(P<0.01);而RAC、SOD、T-AOC、miR-21下调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达降低(P<0.01);与BPD+PBS组比较,BPD+Exos-miR-21组肺组织HE可见无肺泡数目增加,肺泡简化程度好转,同时MLI、ROS、MDA降低及SKP2蛋白表达降低(P<0.01);而ROC、SOD、T-AOC、miR-21上调及NR2F2、VEGF-A蛋白表达升高(P<0.01)。结论AEC-Ⅱ来源的Exos-miR-21可能靶向SKP2通过促进NR2F2、VEGF-A蛋白表达抑制氧化应激促进肺泡发育改善BPD。 展开更多
关键词 Ⅱ型肺泡上皮细胞 外泌体 微小RNA-21-5p 支气管肺发育不良 S期激酶相关蛋白2
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探讨血清外泌体miRNA-132及SIRT1在2型糖尿病伴轻度认知障碍中的诊断价值
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作者 魏静雯 刘辰 +1 位作者 陈茜 杨淑芳 《泰州职业技术学院学报》 2024年第6期65-69,共5页
目的本研究旨在探索血清外泌体miRNA-132及沉默信息调节因子1(SIRT1)在2型糖尿病(T2DM)伴轻度认知障碍(MCI)患者中的表达水平,以及作为诊断T2DM伴MCI的诊断价值。方法本实验选取泰州市人民医院内分泌科60例2型糖尿病患者,其中认知正常组... 目的本研究旨在探索血清外泌体miRNA-132及沉默信息调节因子1(SIRT1)在2型糖尿病(T2DM)伴轻度认知障碍(MCI)患者中的表达水平,以及作为诊断T2DM伴MCI的诊断价值。方法本实验选取泰州市人民医院内分泌科60例2型糖尿病患者,其中认知正常组(T2DM+NCI)30例,轻度认知障碍组(T2DM+MCI)30例,检测血清外泌体miRNA-132及SIRT1的表达水平。结果与T2DM+NCI组相比,T2DM+MCI组患者中性别、年龄、受教育程度、LPA有差异性,具有统计学意义(P<0.05);且血清外泌体miRNA-132、血清SIRT1表达水平降低,亦具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示血清外泌体miRNA-132在单独检测时,其灵敏度为0.933,特异度为0.5,曲线下面积(AUC)为0.727。血清SIRT1在单独检测时,灵敏度为0.433,特异度为1,曲线下面积(AUC)为0.673。两者联合检测时,灵敏度为0.867,特异度为0.6,曲线下面积(AUC)为0.752。结论与T2DM+NCI组相比,T2DM+MCI组患者中miRNA-132、SIRT1表达水平同向降低。血清外泌体miRNA-132及血清SIRT1对诊断T2DM伴轻度认知障碍具有一定的意义,二者联合检测时诊断价值更高。 展开更多
关键词 2型糖尿病 轻度认知障碍 外泌体miRNA-132 SIRT1
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2型糖尿病KKA^y模型小鼠肾脏中TGF-β及其受体和细胞外基质蛋白表达的关系 被引量：2
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作者 陈丽萌 李学旺 +2 位作者 黄利伟 林嘉友 李艳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第4期422-427,共6页
探讨 2型糖尿病动物模型KKAy 小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF β及其受体的关系。 15只KKAy 小鼠和 18只C5 7BL J小鼠 ,分成 3组 ,分别于 16、2 0和 2 4周处死动物 ,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白 ,取肾皮质常规切片、染色 ,观... 探讨 2型糖尿病动物模型KKAy 小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF β及其受体的关系。 15只KKAy 小鼠和 18只C5 7BL J小鼠 ,分成 3组 ,分别于 16、2 0和 2 4周处死动物 ,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白 ,取肾皮质常规切片、染色 ,观察肾脏病理改变。用免疫组化和免疫印迹法检测不同周龄的KKAy 小鼠及参照组C5 7BL J小鼠肾皮质TGF β1及TGF βⅠ、Ⅱ型受体的表达 ,并用RT PCR方法检测肾皮质细胞外基质Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)mRNA水平。KKAy 小鼠 16周龄以后便开始出现明显的肥胖、高血糖、高胰岛素血症和蛋白尿 ,符合2型糖尿病早期肾病特点。其FN和Ⅳ型胶原mRNA表达都比同龄参照组C5 7BL J小鼠高 2～ 4倍 ,其中以 16周时最为显著 ,FN为 1 5 3± 0 4 6比较 0 6 3± 0 16 (P <0 0 0 1) ;Ⅳ型胶原为 5 0 8± 1 92比较 1 2 1± 0 2 5 (P <0 0 1)。KKAy 小鼠肾小球内TGF β1及TGF βⅠ型受体的水平明显低于C5 7BL J小鼠 ,而Ⅱ型受体表达却高于C5 7BL J小鼠。2型糖尿病KKAy 小鼠早期肾病时 ,肾皮质细胞外基质合成增加 ,与TGF βⅡ型受体表达增加有关。 展开更多
关键词 小鼠 2型糖尿病 肾皮质 TGF-Β 表达 Ⅱ型受体 Ⅳ型胶原 细胞外基质蛋白 BL MRNA水平
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外泌体与肥胖及其相关代谢性疾病研究进展
10
作者 高启敏 王晓丽 《医学综述》 CAS 2025年第1期1-6,共6页
人体内绝大部分细胞具备产生外泌体的能力,细胞外囊泡通过旁分泌和内分泌机制在不同器官、组织、细胞之间发挥信息传递及调控的关键作用。近年来,外泌体在胰岛素抵抗、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等肥胖相关代谢性疾病发生发展中的... 人体内绝大部分细胞具备产生外泌体的能力,细胞外囊泡通过旁分泌和内分泌机制在不同器官、组织、细胞之间发挥信息传递及调控的关键作用。近年来,外泌体在胰岛素抵抗、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等肥胖相关代谢性疾病发生发展中的作用受到关注,其参与多种疾病的病理生理学机制,可能作为代谢性疾病的生物标志物和药物载体。因此,深入研究外泌体有助于揭示肥胖及其相关代谢性疾病的发病机制,并在研发新型治疗药物中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 肥胖 外泌体 胰岛素抵抗 2型糖尿病 非酒精性脂肪性肝病
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外泌体在2型糖尿病发病机制及诊疗标志物开发中的研究进展 被引量：5
11
作者 刘森 葛金芳 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期237-244,共8页
外泌体是一种纳米级大小的细胞外分泌囊泡,具有脂质双分子层结构,可以携带多种DNA,RNA以及蛋白质等生物分子,是细胞间信号传递的重要载体。大量研究结果表明,外泌体及其内含物可通过多种途径影响胰岛素的分泌和组织敏感性,参与糖脂代谢... 外泌体是一种纳米级大小的细胞外分泌囊泡,具有脂质双分子层结构,可以携带多种DNA,RNA以及蛋白质等生物分子,是细胞间信号传递的重要载体。大量研究结果表明,外泌体及其内含物可通过多种途径影响胰岛素的分泌和组织敏感性,参与糖脂代谢和胰岛素抵抗的调控,在包括糖尿病在内的内分泌及代谢性疾病发生发展过程中发挥重要作用。本文就外泌体在2型糖尿病发病机制及诊疗标志物开发中的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 外泌体 MIRNAS 2型糖尿病 胰岛素抵抗 血清标志物
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骨髓间充质干细胞外泌体介导miR-124-1对小胶质细胞M2型极化调控的影响 被引量：4
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作者 郝磊 金戈 +4 位作者 杨涌涛 王军伟 孙洋 秦翠玲 展群岭 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期323-330,共8页
目的·探讨过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)对小胶质细胞(microglia,MG)M2型极化调控的影响。方法·分离、培养鼠BMMSCs,提取其Exo(BMMSCs-Ex... 目的·探讨过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)外泌体(exosomes,Exo)对小胶质细胞(microglia,MG)M2型极化调控的影响。方法·分离、培养鼠BMMSCs,提取其Exo(BMMSCs-Exo),并分别对BMMSCs及BMMSCs-Exo行流式细胞术、透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)与蛋白质印迹(Western blotting)检测及鉴定。合成miR-124-1基因,构建其慢病毒载体,观测过表达miR-124-1基因的BMMSCs及其Exo的miR-124-1基因的表达变化。将过表达miR-124-1基因的BMMSCs-Exo(BMMSCs-Exo+miR-124-1,Exo/124-1)与经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的HAPI小胶质细胞株(HAPI细胞)共培养。分别收集Exo组与Exo/124-1组细胞。用仅含LPS培养基培养的HAPI细胞(LPS组)与未处理的HAPI细胞(正常组)作对照。使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting分别检测其M1型分子[白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)]和M2型分子(CD206、IL-10)的mRNA及其蛋白的表达变化。结果·成功分离、培养、鉴定了BMMSCs及BMMSCs-Exo。Exo/124-1明显表达miR-124-1基因。qPCR和Western blotting检测证实,BMMSCs-Exo能携带miR-124-1基因,其明显下调了HAPI细胞的IL-6(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别下调了55.71%、73.04%,在蛋白水平分别为52.32%、76.95%)和TNF-α(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别下调了51.95%、68.91%,在蛋白水平分别为52.14%、77.47%)。并且Exo/124-1上调了HAPI细胞的CD206(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别上调了46.90%、76.99%,在蛋白水平分别为65.13%、85.11%)和IL-10(与正常组和LPS组比较,在基因水平分别上调了43.09%、72.36%,在蛋白水平分别为55.19%、78.18%)的表达。结论·BMMSCs-Exo可介导miR-124-1调控HAPI细胞向M2型极化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 miR-124-1基因 HAPI细胞 M2型极化
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M2型巨噬细胞外泌体诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化 被引量：7
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作者 刘文涛 冯兴超 +1 位作者 杨毅 白生宾 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第6期840-845,共6页
背景:目前研究表明,M2型巨噬细胞能够促进成骨分化并呈网络状调控,外泌体可携带大量信息参与细胞间的信号传导,M2型巨噬细胞来源外泌体是否能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有待研究。目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对骨髓间充质干... 背景:目前研究表明,M2型巨噬细胞能够促进成骨分化并呈网络状调控,外泌体可携带大量信息参与细胞间的信号传导,M2型巨噬细胞来源外泌体是否能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有待研究。目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:培养鼠源性巨噬细胞系RAW264.7与鼠骨髓间充质细胞系CP-M131,培养至第3代,应用白细胞介素4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,从M2型巨噬细胞培养上清中提取外泌体,然后用终质量浓度为0,30,60,90 mg/L的外泌体与骨髓间充质干细胞共培养72 h后收集样本,以及60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞共培养24,48,72 h后收集样本,Western blot检测骨髓间充质干细胞中成骨相关因子RUNX2和碱性磷酸酶蛋白表达,茜素红染色检测矿物质沉积情况。结果与结论:①成骨相关因子RUNX2及碱性磷酸酶的表达水平与巨噬细胞外泌体质量浓度密切相关,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05),干预72 h RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05);②茜素红实验结果表明,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组钙结节含量较高(P<0.05),干预72 h钙结节含量较高(P<0.05);③结果表明,M2型巨噬细胞分泌的外泌体能够诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 外泌体 M2型巨噬细胞 成骨细胞 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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M2型巨噬细胞来源的外泌体对类风湿关节炎小鼠的作用及其机制研究 被引量：2
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作者 闻君侠 王瑾 +2 位作者 江彬锋 翟利锋 刘建 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第23期30-37,共8页
目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2-Exo)对胶原诱导的类风湿关节炎(RA)小鼠的作用及可能机制。方法分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),收集白细胞介素-4(IL-4)诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Ex... 目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2-Exo)对胶原诱导的类风湿关节炎(RA)小鼠的作用及可能机制。方法分离提取C57BL/6J小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),收集白细胞介素-4(IL-4)诱导的M2型巨噬细胞培养的上清液,用超速离心法分离出M2-Exo。使用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察M2-Exo的形态结构及粒径分布;采用细胞免疫荧光染色及Western blotting法检测M2-Exo处理的M1型巨噬细胞的表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(Arginase)的表达。复制胶原诱导的DBA/1小鼠RA模型,随机分为模型组和M2-Exo组,以正常DBA/1小鼠为对照组。M2-Exo组在首次免疫后第16天及第26天关节腔注射M2-Exo(100μg/只),发病全过程监测关节炎病变并评分,于第42天安乐处死小鼠。对3组小鼠左后足拍照并测定厚度;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠关节中促炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)和白细胞介素-6(IL-6)的表达;采用RT-PCR检测3组小鼠关节中M1型和M2型巨噬细胞的表面标志物iNOS2、CD86、Arginase、CD206 mRNA的相对表达量。结果M2-Exo为类圆形、有完整的包膜的囊状结构,粒径均值为44.1 nm。M2-Exo处理24 h后的M1型巨噬细胞表达Arginase,不表达iNOS。在RA发病过程中,M2-Exo组小鼠平均关节炎指数(AI)低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,模型复制第42天M2-Exo组小鼠的足趾关节红肿不明显,活动障碍程度不高,差异无统计学意义(P>0.05);M2-Exo组小鼠关节IL-1β、TNF-ɑ和IL-6水平均降低(P<0.05)。M2-Exo组小鼠关节组织中iNOS和CD86 mRNA的相对表达量低于模型组(P<0.05),而CD206和Arginase mRNA的相对表达量高于模型组(P<0.05)。结论M2-Exo可能通过重编程炎症M1型巨噬细胞转换为M2型抗炎的巨噬细胞,以缓解RA病情。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 M2型巨噬细胞外泌体 重编程
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运动介导外泌体miRNA防治2型糖尿病合并肌少症的研究进展 被引量：5
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作者 邹琪 刘军 孙晓敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期919-927,共9页
糖尿病是以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,据2 021年国际糖尿病联盟数据,预计2 045年全球糖尿病患者人数将增至7.83亿人,中国患者将增至1.75亿,其中90%为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)[1]。肌少症(sarcopenia),是一种与年... 糖尿病是以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,据2 021年国际糖尿病联盟数据,预计2 045年全球糖尿病患者人数将增至7.83亿人,中国患者将增至1.75亿,其中90%为2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)[1]。肌少症(sarcopenia),是一种与年龄相关的肌肉质量下降和功能丧失的老年综合征,在T2DM患者中发病率已达21%,患者发生跌倒、骨折、残疾的风险显著增高[2]。 展开更多
关键词 外泌体 微小RNA 2型糖尿病 肌少症 运动
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猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析 被引量：1
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作者 上官琳晖 丁文文 +5 位作者 刘佳宇 范阔海 尹伟 孙娜 孙盼盼 李宏全 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第4期54-64,共11页
[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的M... [目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用。[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的MoDC来源外泌体(VDEX)为试验组,使用间接免疫荧光评估感染模型鉴定外泌体后,通过高通量测序技术分析两者中的差异miRNA。[结果]间接免疫荧光结果显示,与PCV2共孵育的MoDC中有特异性绿色荧光,表明PCV2感染MoDC模型建立成功。纳米颗粒追踪技术结果显示,超速离心法提取的外泌体直径分别为130 nm和120 nm。Western blot结果显示,两组外泌体均存在特异性标记蛋白CD63和TSG101。高通量测序结果显示,与DEX组相比,VDEX组共504种miRNA发生显著变化(P<0.05),其中161种表达上调,343种表达下调。qPCR结果表明,与DEX相比,VDEX中sscmiR10b、sscmiR199a3pR1、sscmiR5325p、sscmiR4255p、sscmiR210、sscmiR144R+1、ssclet7c、sscmiR107R2、sscmiR225pR1和sscmiR2963pR+1表达量显著下降(P<0.05),与测序结果一致。GO分析显示,差异靶基因参与的生物学功能主要有转录调控(DNA模板)、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正/负调控、信号转导和氧化还原等过程。KEGG通路分析发现,差异靶基因主要参与T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、癌症通路、细胞内吞作用和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等。通过差异miRNA显著性P值、Foldchange和KEGG富集分析,最终确定出个10目标miRNA。[结论]VDEX中差异性表达的miRNA及其靶基因通过调控T细胞的增殖分化来调节免疫反应。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 外泌体 微小核糖核酸 高通量测序 树突状细胞
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M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究 被引量：3
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作者 关翰 孙文衍 +1 位作者 汪盛 陈志军 《蚌埠医学院学报》 CAS 2023年第6期701-711,共11页
目的:探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer,PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法:在成功建立M2型巨噬细胞的基础上,抽提并鉴定其外泌体,检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证,选取miR-... 目的:探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer,PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法:在成功建立M2型巨噬细胞的基础上,抽提并鉴定其外泌体,检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证,选取miR-374a进行研究;M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养,荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况;DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验;通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因,通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证;干扰FOXO1后进行细胞功能学实验,观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果:成功建立M2细胞并抽提其外泌体,其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达;荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞,PC3细胞与M2细胞共培养后,M2细胞可通过外泌体传递miR-374a至PC3细胞内;敲低PC3和DU145细胞中miR-374a的表达量后显著降低其增殖、迁移能力并促进其凋亡,在PC3中敲低miR-374a表达后裸鼠皮下成瘤体积显著减小;Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验结果证明miR-374a可以直接结合FOXO1,抑制β-catenin入核并抑制PCa细胞EMT;挽救实验结果说明转染si-FOXO1后可逆转miR-374a对PC3和DU145细胞迁移的抑制作用。结论:M2细胞可通过外泌体传递miR-374a进入PCa细胞靶向FOXO1抑制其恶性进展。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 M2型巨噬细胞 外泌体 miR-374a 叉头盒转录因子
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M2型巨噬细胞来源外泌体对乳腺癌细胞系4T1干性特征的影响 被引量：1
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作者 张晨 郭建 +4 位作者 赫慧文 王胜男 陈惠琳 段昭君 罗云萍 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第6期798-804,共7页
目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体对乳腺癌细胞系4T1细胞肿瘤干性特征的影响。方法用超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的外泌体;用透射电子显微镜、纳米粒子追踪技术,Westernblot等对其进行鉴定;然后以乳腺癌细胞系4T1为肿瘤模型,使用Di... 目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体对乳腺癌细胞系4T1细胞肿瘤干性特征的影响。方法用超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的外泌体;用透射电子显微镜、纳米粒子追踪技术,Westernblot等对其进行鉴定;然后以乳腺癌细胞系4T1为肿瘤模型,使用Dil染料标记M2型巨噬细胞来源的外泌体,通过免疫荧光技术观察其能否进入4T1细胞。此外,用流式细胞计量术、共培养体系和Transwell实验探究在M2型巨噬细胞来源的外泌体影响下的4T1细胞的干性特征。结果M2型巨噬细胞在体外被成功诱导,分离并鉴定了M2型巨噬细胞来源的外泌体。通过免疫荧光,看到Dil标记的外泌体可成功进入4T1细胞。M2型巨噬细胞来源的外泌体与4T1细胞共孵育后,可明显增强4T1细胞的迁移能力(P<0.001)和成球能力(P<0.05);外泌体抑制剂GW4869可明显抑制4T1细胞的成球能力(P<0.05)。同时,M2型巨噬细胞来源的外泌体可明显增加4T1细胞中CD44highCD24low细胞的比例(P<0.001)。结论M2型巨噬细胞来源的外泌体能够促进4T1肿瘤细胞的迁移和成球能力,并明显增加4T1细胞中肿瘤干细胞的比例。 展开更多
关键词 M2型巨噬细胞 外泌体 细胞迁移 细胞成球 肿瘤干细胞
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外泌体对M2型巨噬细胞的调控及其在心血管疾病中的作用 被引量：2
19
作者 张祥凝 党国徽 冯娟(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1257-1262,共6页
外泌体是一种脂质微囊泡,可携带多种脂质、蛋白质、核酸,参与细胞间通讯,是心血管疾病的新型标志物和潜在治疗靶点。M2型巨噬细胞可抑制血管炎症反应、促进组织修复,在心血管疾病中发挥保护作用,其功能受多种因素调控。外泌体是近年逐... 外泌体是一种脂质微囊泡,可携带多种脂质、蛋白质、核酸,参与细胞间通讯,是心血管疾病的新型标志物和潜在治疗靶点。M2型巨噬细胞可抑制血管炎症反应、促进组织修复,在心血管疾病中发挥保护作用,其功能受多种因素调控。外泌体是近年逐渐受到关注的细胞对话新方式。本文根据外泌体来源进行分类,总结外泌体内不同物质对M2型巨噬细胞的调节作用、相关信号通路及其与心血管疾病的潜在关系。 展开更多
关键词 外泌体 M2型巨噬细胞 巨噬细胞极化 心血管疾病
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祛瘀通络解毒方联合中药外治方对糖尿病足溃疡面局部组织活化素Ⅰ型受体和人矮小同源盒基因2表达的影响 被引量：4
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作者 刘宇彪 周花玩 鞠上 《河北中医》 2022年第5期732-738,共7页
目的观察祛瘀通络解毒方联合中药外治方治疗糖尿病足溃疡的疗效以及对活化素Ⅰ型受体(Acvr1)和人矮小同源盒基因2(Shox2)表达的影响。方法将116例糖尿病足溃疡患者按照随机数字表法分为2组,对照组58例予中药外治方熏洗治疗,联合组58例... 目的观察祛瘀通络解毒方联合中药外治方治疗糖尿病足溃疡的疗效以及对活化素Ⅰ型受体(Acvr1)和人矮小同源盒基因2(Shox2)表达的影响。方法将116例糖尿病足溃疡患者按照随机数字表法分为2组,对照组58例予中药外治方熏洗治疗,联合组58例在对照组治疗基础上加祛瘀通络解毒方治疗,2组均治疗4周。比较2组治疗前及治疗第7、14天溃疡面组织Acvr1、Shox2表达(免疫组化法),治疗前和治疗第7、14、28天血清Acvr1、Shox2水平(酶联免疫吸附法)及蛋白表达(Western blot法)、中医证候积分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、溃疡面面积变化,统计比较2组肉芽组织形成时间、创面愈合时间、住院时间及临床疗效,采用Pearson检验分析血清Acvr1、Shox2水平与其他临床指标相关性。结果联合组总有效率96.55%(56/58),对照组总有效率77.59%(45/58),联合组临床疗效优于对照组(P<0.05)。随着治疗时间的延长,2组溃疡面组织Acvr1、Shox2表达及血清Acvr1、Shox 2水平和蛋白表达逐渐升高,中医证候积分及疼痛VAS逐渐降低,溃疡面面积逐渐缩小,各时间点两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后各时间点联合组与对照组同期比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。联合组肉芽组织形成时间、创面愈合时间及住院时间均少于对照组(P<0.05)。血清Acvr1及Shox2水平与糖尿病病程、糖尿病足病程、中医证候积分、疼痛VAS、溃疡面面积、肉芽组织形成时间、溃疡创面愈合时间及住院时间呈显著负相关(P<0.05),Acvr1与Shox2呈显著正相关(P<0.05)。结论祛瘀通络解毒方联合中药外治方可有效提高糖尿病足溃疡的临床疗效,缩短创面愈合时间,提高Acvr1和Shox2表达,且二者有望成为糖尿病足新的治疗靶点。 展开更多
关键词 糖尿病足 中药疗法 外治法 祛瘀 通络 解毒 活化素Ⅰ型受体 人矮小同源盒基因2
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