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丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建 被引量：8
1
作者 汪天虹 吴志红 +1 位作者 刘世利 曲音波 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期736-742,共7页
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,... 采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 . 展开更多
关键词 瑞氏木霉 外源基因表达系统 cbhI启动子 构建 表达
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多形汉逊酵母外源基因表达系统 被引量：11
2
作者 陈凤菊 卢善发 胡敦孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-249,共4页
多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一... 多形汉逊酵母是一种有很大潜力的外源基因表达系统 ,已在科研和工业化生产上广泛应用。用它生产来源于真核生物的外源基因有许多优点 ,如重组菌减数分裂稳定、能进行正确的翻译后加工和修饰、表达量高等。许多有商业价值的蛋白质在这一系统中得到成功表达 ,有的已投入市场。本文综述多形汉逊酵母宿主菌的生物学特性、基因工程操作技术。 展开更多
关键词 多形汉逊酵母 甲醇酵母 外源基因表达系统
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毕赤酵母外源基因表达系统研究进展 被引量：8
3
作者 杜中军 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 翟衡 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第4期7-11,共5页
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、... 巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 外源基因表达系统 研究进展 甲醇营养型酵母
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甜菜夜蛾核多角体病毒BAC-TO-BAC外源基因表达系统的建立 被引量：3
4
作者 杨凯 庞义 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期412-418,共7页
用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能... 用直接克隆法将miniF lacZ attTn7 kan片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒 (Spodopteraexiguamulticapsidnucleopolyhe drovirus,SeMNPV)美国分离株 (SeUS1)基因组的多角体蛋白基因框内 ,miniF是大肠杆菌F因子复制子 ,携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制 ,称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成 ,每个bacmid携带了一种病毒基因型 ,所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对 111个bacmid分析表明 ,SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外 ,还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞 ,可产生子代病毒 ,故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因 (Seph)被插入失活 ,将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7,得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se3 0 1后 ,细胞出现典型的病理变化 ,核中出现多角体 ,证明SeMNPVBAC TO 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 BAC-TO-BAC外源基因表达系统 BAC文库 位点特异性重组 多角体蛋白基因
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巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统 被引量：7
5
作者 李健仔 《生物学通报》 2005年第3期21-23,共3页
巴斯德毕赤酵母是目前最为成功的外源基因表达系统之一。有关研究主要涉及以下几个方面:宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因的整合与影响外源蛋白表达的因素等。
关键词 外源基因表达系统 巴斯德毕赤酵母 外源蛋白 表达载体 宿主 菌株 影响 因素 研究
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巴斯德毕赤酵母表达系统 被引量：5
6
作者 周世力 《江汉大学学报（医学版）》 2002年第4期61-63,共3页
巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris,P .pastoris)是一种广泛使用的外源基因表达系统 ,该系统不仅具有高效表达、高稳定、高分泌、高密度生长等特点 ,而且可以对表达产物进行类似真核细胞的翻译后修饰和加工等显著优点。
关键词 巴斯德毕赤酵母 外源基因表达系统 高效表达 乙醇氧化酶启动子
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高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建 被引量：4
7
作者 胡耀辉 闫舟 于寒松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第25期13617-13619,13625,共4页
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CB... [目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。 展开更多
关键词 绿色木霉 CBHⅡ基因 瑞氏木霉启动子 外源基因表达系统
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基因工程法生产降钙素的研究进展 被引量：3
8
作者 董丹 刘昱辉 吴元华 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期547-552,共6页
目的综述基因工程法生产降钙素的研究进展,为进一步研究利用降钙素提供参考。方法依据国内外刊物公开发表的36篇文献,回顾了降钙素表达系统的研究进展。结果目前基因工程法生产降钙素的表达系统主要有5种:大肠杆菌、乳酸杆菌、酵母、昆... 目的综述基因工程法生产降钙素的研究进展,为进一步研究利用降钙素提供参考。方法依据国内外刊物公开发表的36篇文献,回顾了降钙素表达系统的研究进展。结果目前基因工程法生产降钙素的表达系统主要有5种:大肠杆菌、乳酸杆菌、酵母、昆虫杆状病毒和植物。结论5个表达系统各有优缺点,其中植物表达系统具有广阔的发展前景。 展开更多
关键词 基因工程 降钙素 外源基因表达系统
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双歧杆菌质粒聚合酶基因表达系统的构建及其鉴定
9
作者 朱忠生 王立生 +2 位作者 曾位森 张定国 付丹 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1255-1258,共4页
目的构建可以在双歧杆菌表达外源性基因的系统。方法 PCR扩增双歧杆菌质粒聚合酶基因(BPP)并连接至质粒pBS-T以形成重组质粒pBS-BPP。PCR扩增双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的启动子及分泌性信号肽DNA序列(ara)并连接至质粒pBAD-A以形成重... 目的构建可以在双歧杆菌表达外源性基因的系统。方法 PCR扩增双歧杆菌质粒聚合酶基因(BPP)并连接至质粒pBS-T以形成重组质粒pBS-BPP。PCR扩增双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的启动子及分泌性信号肽DNA序列(ara)并连接至质粒pBAD-A以形成重组质粒pBAD-ara,然后将增强绿色荧光蛋白(eGFP)基因连接至质粒pBAD-ara以形成重组质粒pBAD-ara-GFP。采用基因重组技术重组含有ara、BPP、eGFP基因序列并可将外源性基因分泌表达于菌体外及锚定表达于细胞壁的质粒pBS-BPP-ara-GFP,激光共聚焦显微镜下观察含有pBS-BPP-ara-GFP质粒及对照质粒的E.coli,验证eGFP定位表达情况。结果所构建的表达系统可以在E.coli中表达eGFP基因。结论通过基因重组方法成功构建了双歧杆菌表达系统,其可将外源基因分泌表达于菌体外。 展开更多
关键词 双歧杆菌 双歧杆菌质粒聚合酶基因(BPP) ARA eGFP外源性基因表达系统
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乳酸菌制剂的研究现状及在畜牧生产中的应用 被引量：8
10
作者 张菊 李伟 +3 位作者 李金敏 于艳 张志焱 谷巍 《饲料广角》 2013年第5期28-30,共3页
乳酸菌制剂具有调节动物肠道菌群平衡,提高动物免疫力、生产性能等作用。目前,乳酸菌制剂在冻干保存、微胶囊制备及作为外源基因表达系统领域有了较多研究,乳酸菌制剂已广泛应用于猪、家禽和奶牛等畜牧生产。本文就乳酸菌制剂的研究现... 乳酸菌制剂具有调节动物肠道菌群平衡,提高动物免疫力、生产性能等作用。目前,乳酸菌制剂在冻干保存、微胶囊制备及作为外源基因表达系统领域有了较多研究,乳酸菌制剂已广泛应用于猪、家禽和奶牛等畜牧生产。本文就乳酸菌制剂的研究现状及在畜牧生产中的应用作一综述,旨在为乳酸菌制剂在畜牧业中的进一步研究和应用提供参考。 展开更多
关键词 乳酸菌制剂 冻干 微胶囊 外源基因表达系统
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