表达肠出血性大肠杆菌O157 O-抗原重组减毒沙门菌的构建及其免疫效果评价

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作者 陈歆丹 张晓荟 +5 位作者 高宇杰 王温馨 葛同鑫 宋厚辉 韩月 程昌勇 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1261-1269,共9页

为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157 O-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC O157基因组为模板,采用PCR分3段扩增O157 O-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC O157 O-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组... 为构建表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157 O-抗原的重组减毒鼠伤寒沙门菌,本研究以EHEC O157基因组为模板,采用PCR分3段扩增O157 O-抗原基因簇(galF~gnd),并采用同源重组技术将EHEC O157 O-抗原基因簇与含asd基因的pSL2161线性化片段重组,构建表达EHEC O157 O-抗原的重组质粒pSL2161-O157并经PCR与测序鉴定正确后电转化4基因缺失沙门菌ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,构建表达EHEC O157 O-抗原的重组减毒沙门菌O157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP,经PCR及测序鉴定。采用裂解法粗提野生型鼠伤寒沙门菌ATCC14028、EHEC O157与构建的重组减毒沙门菌种中的脂多糖(LPS),采用western blot鉴定上述3种菌中的LPS与EHEC O157 O-因子血清的反应性,并根据该重组菌与野生菌株ATCC14028的OD600nm值测定二者的体外生长能力。PCR与测序鉴定结果显示,重组减毒沙门菌正确构建。Western blot结果显示,重组减毒沙门菌和野生型EHEC O157的粗提LPS均能够与EHEC O157 O-因子血清反应,出现LPS特异性的梯状条带,ATCC14028株与O157 O-因子血清无反应条带。生长曲线结果显示,重组减毒沙门菌与ATCC14028株的生长速度无明显差异。表明EHEC O157 O-抗原基因簇在4基因缺失沙门菌中获得了表达,且该表达与4基因的缺失均不影响沙门菌的体外生长能力。采用首免-加强免疫策略对ICR小鼠分别口服免疫重组减毒沙门菌和4基因缺失沙门菌,二免后13 d采用间接ELISA检测各组小鼠血清中LPS的IgG抗体水平,利用荧光定量PCR(qPCR)检测各组小鼠脾细胞中细胞因子的转录水平。二免后14 d采用10 LD_(50)的EHEC O157攻毒,15 d内观察并记录各组小鼠的临床症状与死亡率,评估该重组菌株对免疫小鼠的保护效果。ELISA与q PCR结果显示,与阴性对照组和4基因缺失沙门菌免疫组相比,重组减毒沙门菌诱导小鼠产生的针对EHEC O157与ATCC14028 LPS的IgG抗体水平均极显著升高(P<0.001、P<0.01);该组小鼠脾细胞中IL-2、IL-4、IL-6和IL-17的转录水平均极显著升高(P<0.001)。攻毒后4基因缺失沙门菌免疫组与阴性对照组小鼠均出现震颤、被毛凌乱等症状,并于攻毒当天即出现小鼠死亡,经统计重组减毒沙门菌、4基因缺失沙门菌对小鼠的免疫保护率分别为65%和30%。上述结果首次证实重组减毒沙门菌O157-ATCC14028ΔcrpΔcyaΔasdΔrfbP能够表达异源EHEC O157 O-抗原,可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答,并对小鼠提供一定的免疫保护力。这为重组减毒沙门菌用于免疫及预防肠出血性大肠杆菌O157的感染及开发大肠杆菌与沙门菌二联疫苗提供了科学参考依据。 展开更多

关键词 减毒沙门菌 疫苗递呈载体 o-抗原 肠出血性大肠杆菌o157 免疫保护

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O_(139,142,26)混合血清型大肠杆菌的O-抗原基因簇的破译 被引量：4

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作者 许亚卓 杨春柳 +3 位作者 刘文鑫 杨旭东 李海滨 师东方 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期101-105,共5页

应用鸟枪法扩增了一株从水肿病病死猪肠系膜淋巴结分离到的O混合血清型(O139,142,26)大肠杆菌的O-抗原基因,测序结果显示扩增的O-抗原基因长度为11 771 bp。通过生物信息学的方法对其结构进行分析,发现其具有10个开放阅读框架及功能基... 应用鸟枪法扩增了一株从水肿病病死猪肠系膜淋巴结分离到的O混合血清型(O139,142,26)大肠杆菌的O-抗原基因,测序结果显示扩增的O-抗原基因长度为11 771 bp。通过生物信息学的方法对其结构进行分析,发现其具有10个开放阅读框架及功能基因种类。经与发表的大肠杆菌O139、O26和O142的O-抗原基因序列及O-抗原糖基链的结构进行比对,进化树分析,跨膜蛋白的结构分析以及对乳糖前体(Glc)添加乙酰基的机制分析,结果表明,该O混合血清型大肠杆菌的O-抗原基因与大肠杆菌O139的O-抗原基因进化关系最近。 展开更多

关键词 大肠杆菌 o混合血清型 o-抗原基因

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大肠杆菌O11 O-抗原基因簇序列的破译及特异分子标识的鉴定 被引量：3

3

作者 王威 彭霞 +2 位作者 王荃 程剑松 王磊 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期341-346,共6页

大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O-... 大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O-抗原基因簇的序列全长为14180bp,生物信息学方法分析序列结构,共发现12个基因:GDP-L型岩藻糖合成途径基因(gmd,fcl,gmm,manC,manB)、UDP-N乙酰葡萄糖C4异构酶基因(gne)、O-抗原转运酶基因(wzx)、O-抗原聚合酶基因(wzy)和4个糖基转移酶基因;用PCR方法筛选出2个针对大肠杆菌O11的特异基因和4对特异引物,并进行环境样品检测实验鉴定了该PCR检测方法的灵敏度;设计并筛选出8条针对大肠杆菌O11的特异探针。 展开更多

关键词 大肠杆菌o11 o-抗原基因簇 分子分型 特异基因 探针

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大肠杆菌O138 O-抗原基因簇的破译及Gne的生物信息学鉴定

4

作者 孔庆科 程剑松 +3 位作者 赵广 王磊 郭宏杰 郭玺 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期756-760,共5页

利用鸟枪法对大肠杆菌E .coliO138O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 14 139bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 11个基因 ,分别为鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、UDP GalNAcA合成酶基因 (gne ,gna)、糖基转移酶基... 利用鸟枪法对大肠杆菌E .coliO138O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 14 139bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 11个基因 ,分别为鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、UDP GalNAcA合成酶基因 (gne ,gna)、糖基转移酶基因 (3个 )、O 抗原转运酶基因 (wzx)和O 抗原聚合酶基因 (wzy)。发现一种稀有单糖UDP Gal NAcA的合成途径 ,对合成该糖的第一种酶Gne进行了生物信息学鉴定 。 展开更多

关键词 大肠杆菌o138 o-抗原 特异基因 UDP-GLCNAC C4异构酶

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大肠杆菌O85 O-抗原基因簇序列破译和特异分子标识的筛选

5

作者 王威 刘斌 +3 位作者 刘雪倩 冯露 孙丹 王磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期39-44,共6页

目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85... 目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85的特异基因并设计引物,PCR方法进行模拟环境样品的检测。结果大肠杆菌O85的O-抗原基因簇序列全长为11 203 bp。发现8个开放阅读框架(orf)并确定功能,分别为:UDP-N-乙酰葡萄糖-2-异构酶基因(orf1),吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),糖基转移酶基因(orf3、orf5、orf6和orf8),O-抗原转运酶基因(wzx)和O-抗原聚合酶基因(wzy)。鉴定出针对大肠杆菌O85的特异基因2个和引物4对。结论本文筛选的特异分子标识和PCR检测方法可用于对环境样品中的大肠杆菌O85进行快速、灵敏的检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌o85 o-抗原基因簇 分子分型 分子标识

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大肠杆菌O54 O-抗原基因簇的破译及进化分析

6

作者 杨静华 于浩 +2 位作者 任一 王磊 冯露 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期445-451,共7页

破译了大肠杆菌O5 4O 抗原基因簇的序列 ,序列全长 1 4 0 6 2bp。用生物信息学方法分析序列并鉴定基因 ,共确定 1 0个基因 ,包括鼠李糖合成酶基因BDA和C(rmlBDA和rmlC) ,糖基转移酶基因 ,O 抗原转运酶基因 ,O 抗原聚合酶基因和合成磷酸... 破译了大肠杆菌O5 4O 抗原基因簇的序列 ,序列全长 1 4 0 6 2bp。用生物信息学方法分析序列并鉴定基因 ,共确定 1 0个基因 ,包括鼠李糖合成酶基因BDA和C(rmlBDA和rmlC) ,糖基转移酶基因 ,O 抗原转运酶基因 ,O 抗原聚合酶基因和合成磷酸丝氨酸侧链的基因及 1个不能确定功能的开放阅读框。对rmlC的 (G +C) %含量 ,稀有密码子含量及进化分析都表明大肠杆菌O5 4O 抗原基因簇是在近期通过rmlC介导的重组形成 ,而且大肠杆菌O5 4和鲍氏志贺氏菌 9型的亲缘关系很近。对UTP 葡萄糖 1 磷酸 尿苷转移酶基因 (galF)和 6 磷酸葡萄糖脱氢酶基因(gnd)的进化分析揭示志贺氏菌属与大肠杆菌属在进化上属于同一个属。用PCR方法筛选出了针对大肠杆菌O5 4的特异基因 ,用于基因芯片或PCR方法对大肠杆菌O5 4的快速检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌 o54 o-抗原基因簇 特异基因 稀有密码子 多样性

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一起食物型O_(86)K_(61)(B_(71))大肠杆菌胃肠炎局部爆发流行的调查报告 被引量：1

7

作者 杨应山 邹向荣 杨进平 《宁夏医学杂志》 CAS 1998年第4期378-378,共1页

一起食物型Ｏ８６Ｋ６１（Ｂ７１）大肠杆菌胃肠炎局部爆发流行的调查报告杨应山邹向荣杨进平１９９７年９月１～４日，海原县职业中学同宿舍７名学生，因进食被Ｏ８６Ｋ６１（Ｂ７１）大肠杆菌污染的西瓜、饼子，引起食物型胃肠炎局部... 一起食物型Ｏ８６Ｋ６１（Ｂ７１）大肠杆菌胃肠炎局部爆发流行的调查报告杨应山邹向荣杨进平１９９７年９月１～４日，海原县职业中学同宿舍７名学生，因进食被Ｏ８６Ｋ６１（Ｂ７１）大肠杆菌污染的西瓜、饼子，引起食物型胃肠炎局部爆发流行，现报告如下。１发病经过首... 展开更多

关键词 胃肠炎 大肠杆菌 食物型 o86K61(B71)

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鸡致病性大肠杆菌菌毛分型的初步研究 被引量：6

8

作者 陈雷 董国雄 +2 位作者 李俊宝 徐建生 黄维嘉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期371-375,共5页

以鸡致病性大肠杆菌F1菌毛特异性单抗 1F4 _1、2C3 、3H3 和F11菌毛特异性单抗FA1、FB11作为检测试剂 ,将 111株已知O抗原的鸡致病性大肠杆菌经MD液体培养基连续传代培养后 ,通过直接玻板凝集法对各菌毛进行初步分型。结果发现F1、F11... 以鸡致病性大肠杆菌F1菌毛特异性单抗 1F4 _1、2C3 、3H3 和F11菌毛特异性单抗FA1、FB11作为检测试剂 ,将 111株已知O抗原的鸡致病性大肠杆菌经MD液体培养基连续传代培养后 ,通过直接玻板凝集法对各菌毛进行初步分型。结果发现F1、F11菌毛与O78、O1及O2 三种优势O抗原型菌株之间存在较为明显的相关性 ,即致病性大肠杆菌主要集中在上。F1、F11菌毛在这三种O抗原型上的总检出率分别为 95 .6 %、75 .4%及 73.3%。另外 ,在所检测的 111株鸡致病性大肠杆菌中 ,只表达F1菌毛的大肠杆菌占菌杆总数的 33.3%。只表达F11菌毛的大肠杆菌占菌株总数的 8.1% ,两者都表达的占菌株总数的36 % ,F1、F11菌毛的总检出率为 78.3%。 展开更多

关键词 鸡 致病性 大肠杆菌 菌毛分型 o抗原型 直接玻板凝集反应

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鸡大肠杆菌异型外膜蛋白原生质体融合菌株的构建 被引量：5

9

作者 丁伯良 鄢明华 +6 位作者 王英珍 李秀丽 黄金海 白朋勋 王东 张健 赵向华 《动物科学与动物医学》 2004年第3期35-37,共3页

以鸡大肠杆菌Ww1株(O78,OMP-3,AmpR,KS)和WD2株(O2,OMP-1,AmpS,KR)作为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,以PEG作为助溶剂,进行原生质体融合,得到4株双耐药融合菌株,融合菌株的形态、染色特性和生化特性均符合大肠杆菌的特性,且... 以鸡大肠杆菌Ww1株(O78,OMP-3,AmpR,KS)和WD2株(O2,OMP-1,AmpS,KR)作为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,以PEG作为助溶剂,进行原生质体融合,得到4株双耐药融合菌株,融合菌株的形态、染色特性和生化特性均符合大肠杆菌的特性,且均能同时表达两个亲本菌株的外膜蛋白(OMP)抗原(OMP-3,OMP-1)和O抗原(O78,O2),表明两个亲本菌株发生了融合和染色体重组。经多次传代证明融合菌株是稳定的。 展开更多

关键词 鸡 大肠杆菌 外膜蛋白抗原 原生质体融合 o抗原 大肠杆菌病 oMP型

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E．coli O86 O-Antigen全保护五糖重复单元的化学简易合成 被引量：2

10

作者 程水红 魏国华 杜宇国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期919-922,共4页

以5个单糖组分为原料,经过7步,以21%的总产率得到E.coliO86抗原全保护的五糖重复单元.在合成路线中,充分利用糖基化反应的立体选择性原则,结合HClO4-SiO2固体催化剂和"IP"策略,大大提高了合成的效率.整个合成路线设计操作简单... 以5个单糖组分为原料,经过7步,以21%的总产率得到E.coliO86抗原全保护的五糖重复单元.在合成路线中,充分利用糖基化反应的立体选择性原则,结合HClO4-SiO2固体催化剂和"IP"策略,大大提高了合成的效率.整个合成路线设计操作简单,选择性高,消耗低,产率高,可以用于快速高效地合成其它一些具有生物活性的寡糖分子. 展开更多

关键词 大肠杆菌o86型o-抗原 B血型抗原 寡糖合成

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山东省鸡源致病性大肠杆菌O-抗原混合血清型分析 被引量：7

11

作者 冯敏燕 林树乾 +7 位作者 房玉波 李桂明 杨世发 赵增成 黄中利 傅剑 商晶 宋敏训 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1676-1679,共4页

采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种O因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的O抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为O24,O15,O2,O127,O1,O18,O78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的2... 采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种O因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的O抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为O24,O15,O2,O127,O1,O18,O78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的24.18%。这是国内首次报道检测到大量的大肠杆菌O因子混合血清型,印证了国外研究人员对O-AGC核苷酸序列研究的结果,有助于最终对O抗原血清型进行更加准确的分类以及大肠杆菌疫苗的研制。 展开更多

关键词 大肠杆菌 o-抗原 交叉反应 混合血清型

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对尿道致病性大肠杆菌进化机制的相关研究

12

作者 金铸成 吴倩妮 蒋健骏 《求医问药（下半月刊）》 2011年第12期419-420,共2页

大肠杆菌是一种无性繁殖的菌种,它们有的时候会长期寄居在一个宿主中,这就为特定时期内研究其进化提供了机会。在本次研究中,我们对14株来源于同一个克隆的尿道致病的大肠杆菌进行了测序。

关键词 尿道感染 尿道致病大肠杆菌 多重PCR o-抗原 o-抗原基因簇 大肠杆菌o99 大肠杆菌o85 大肠杆菌o166

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大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译及特异分子标识的鉴定

13

作者 李雅玥 王威 +1 位作者 王荃 王磊 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期623-628,共6页

目的完成产志贺毒素大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定检测用特异分子标识。方法利用鸟枪法进行O-抗原基因簇序列的测定,进行生物信息学方法分析发现基因并预测基因功能,利用PCR方法筛选针对大肠杆菌O120特异基因和特异引物,... 目的完成产志贺毒素大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定检测用特异分子标识。方法利用鸟枪法进行O-抗原基因簇序列的测定,进行生物信息学方法分析发现基因并预测基因功能,利用PCR方法筛选针对大肠杆菌O120特异基因和特异引物,利用基因芯片方法筛选特异探针。结果O-抗原基因簇序列全长12 485 bp,共含有10个基因:dTDP-鼠李糖合成途径基因(rmlB、rmlD、rmlA和rmlC),O-抗原转运酶基因(wzx),O-抗原聚合酶基因(wzy),3个糖基转移酶基因和1个功能未确定的基因。另外筛选和鉴定了2个特异基因、4对特异引物和6条特异探针,在模拟样品的鉴定中得到验证。结论多种特异分子标识可从样品中特异地检测出大肠杆菌O120,具有快速、灵敏和准确进行分子分型的优点。 展开更多

关键词 大肠杆菌o120 o-抗原基因簇 特异基因 特异探针

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7特异性脂多糖抗原的制备 被引量：1

14

作者 宋宏新 程军表 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期849-849,共1页

关键词 肠出血性大肠杆菌o157:H7 o-特异性多糖 脂多糖抗原 食源性肠道致病菌 制备 尿毒综合征 CoIL 血性腹泻 提取纯化 肾衰竭

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用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究 被引量：2

15

作者 徐敏锐 孙鹏 +2 位作者 张部昌 刘波 吴军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期598-603,共6页

目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌... 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。 展开更多

关键词 奈瑟球菌 脑膜炎 o-糖基化修饰系统 PILE PglL 大肠杆菌 o157型多糖基因簇 多糖-蛋白结合疫苗

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