目的探讨寒湿瘀结证子宫内膜异位症纤维化模型小鼠腹腔微环境中NLR家族蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体活化相关蛋白及Th17/Treg的表达规律。方法将55只雌性BALB/c小鼠随机分为假手术组、供体组、模型组(分为模型7天...目的探讨寒湿瘀结证子宫内膜异位症纤维化模型小鼠腹腔微环境中NLR家族蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体活化相关蛋白及Th17/Treg的表达规律。方法将55只雌性BALB/c小鼠随机分为假手术组、供体组、模型组(分为模型7天组、模型14天组、模型21天组),模型组采用异体移植腹腔注射法和冷水浴法构建寒湿瘀结证子宫内膜异位症纤维化模型。比较各组小鼠的自主活动次数、粪便含水率及热痛潜伏期以评价证候;采用腹腔粘连评分评价粘连程度;比较各组异位组织总重量,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,评价病理;马松三色(Massontrichrome,Masson)染色,免疫组化法检测异位病灶中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen type 1,Col-1)的表达,评价纤维化;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定异位病灶组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、NLRP3、含CARD的凋亡斑点样(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)蛋白的表达水平,评价NLRP3炎性小体的活化;采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞17(T-helper 17,Th17)、调节性T淋巴细胞(regulatory T lymphocyte,Treg),评价Th17/Treg水平。结果与假手术组对比,模型小鼠异位病灶总重量增加、热痛潜伏期缩短、腹腔粘连评分增高(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);与假手术组对比,模型小鼠腹腔可见明显异位灶且HE染色显示柱状上皮及腺体增生明显,且随着随着造模时间延长,变化更为明显;Masson染色显示:与假手术组对比,模型小鼠胶原沉积面积增大(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);免疫组化显示:与假手术组对比,模型小鼠异位灶中TGF-β,Col-1表达量增加(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);Western Blot检测显示:与假手术组对比,模型小鼠异位灶中TRAF6、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表达水平增高(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);流式细胞学检测显示:与假手术组对比,模型小鼠腹腔液中Th17细胞占比、Treg细胞占比以及Th17/Treg比值升高(P<0.05),其中各模型组小鼠腹腔液Th17占比和Treg占比,随着造模时间的延长而逐渐升高(P<0.05),而Th17/Treg比值无统计学差异。结论腹腔微环境中NLRP3炎性小体活化及Th17/Treg失衡可能参与了子宫内膜异位症纤维化的形成。展开更多
文摘目的探讨寒湿瘀结证子宫内膜异位症纤维化模型小鼠腹腔微环境中NLR家族蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体活化相关蛋白及Th17/Treg的表达规律。方法将55只雌性BALB/c小鼠随机分为假手术组、供体组、模型组(分为模型7天组、模型14天组、模型21天组),模型组采用异体移植腹腔注射法和冷水浴法构建寒湿瘀结证子宫内膜异位症纤维化模型。比较各组小鼠的自主活动次数、粪便含水率及热痛潜伏期以评价证候;采用腹腔粘连评分评价粘连程度;比较各组异位组织总重量,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,评价病理;马松三色(Massontrichrome,Masson)染色,免疫组化法检测异位病灶中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen type 1,Col-1)的表达,评价纤维化;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定异位病灶组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、NLRP3、含CARD的凋亡斑点样(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)蛋白的表达水平,评价NLRP3炎性小体的活化;采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞17(T-helper 17,Th17)、调节性T淋巴细胞(regulatory T lymphocyte,Treg),评价Th17/Treg水平。结果与假手术组对比,模型小鼠异位病灶总重量增加、热痛潜伏期缩短、腹腔粘连评分增高(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);与假手术组对比,模型小鼠腹腔可见明显异位灶且HE染色显示柱状上皮及腺体增生明显,且随着随着造模时间延长,变化更为明显;Masson染色显示:与假手术组对比,模型小鼠胶原沉积面积增大(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);免疫组化显示:与假手术组对比,模型小鼠异位灶中TGF-β,Col-1表达量增加(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);Western Blot检测显示:与假手术组对比,模型小鼠异位灶中TRAF6、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白的表达水平增高(P<0.05),且随着造模时间延长,变化更为显著(P<0.05);流式细胞学检测显示:与假手术组对比,模型小鼠腹腔液中Th17细胞占比、Treg细胞占比以及Th17/Treg比值升高(P<0.05),其中各模型组小鼠腹腔液Th17占比和Treg占比,随着造模时间的延长而逐渐升高(P<0.05),而Th17/Treg比值无统计学差异。结论腹腔微环境中NLRP3炎性小体活化及Th17/Treg失衡可能参与了子宫内膜异位症纤维化的形成。
