期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到152篇文章
< 1 2 … 8 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
UNC5B基因靶向shRNA表达质粒的构建及体外RNA干扰 被引量：2
1
作者 杨昀 邹丽 +1 位作者 王勇 张进祥 《天津医药》 CAS 北大核心 2007年第5期321-323,共3页
目的:探讨人UNC5B基因的双链RNA在体外对UNC5B表达的干扰作用及其规律。方法:构建两个能产生UNC5B的发夹状RNA(shRNA)的质粒载体Pgenesil-UNC5B1及Pgenesil-UNC5B2作为实验组,并构建无关序列shRNA表达质粒Pgenesil-NC作为阴性对照,将3... 目的:探讨人UNC5B基因的双链RNA在体外对UNC5B表达的干扰作用及其规律。方法:构建两个能产生UNC5B的发夹状RNA(shRNA)的质粒载体Pgenesil-UNC5B1及Pgenesil-UNC5B2作为实验组,并构建无关序列shRNA表达质粒Pgenesil-NC作为阴性对照,将3种质粒分别转染脐静脉内皮细胞(HUVEC)。转染24h后,荧光倒置显微镜下观察质粒转染效率,用G418筛选得到稳定转染的细胞,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测UNC5B在HUVECs中的表达情况。结果:转染24h后,在荧光显微镜下可见绿色荧光,转染效率约为40%～50%。实验组经G418筛选后稳定转染的细胞UNC5BmRNA均受到抑制,两种UNC5B基因靶向shRNA表达质粒对HUVECs中UNC5B抑制率分别为88%和52%。结论:本研究所构建的UNC5BshRNA表达质粒可在体外高效特异地抑制UNC5B的表达,为进一步实验奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 rna 小分子干扰 质粒 基因表达 重组蛋白质类
在线阅读 下载PDF
小分子干扰RNA真核表达载体阻断U937细胞肿瘤坏死因子α基因的表达 被引量：1
2
作者 孙克宁 高希武 +1 位作者 王真 金群华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第30期5635-5639,共5页
背景:无菌性松动是导致人工关节置换后失败和降低人工关节使用寿命的主要原因,肿瘤坏死因子α是一个极具吸引力的无菌性松动治疗新靶点。小分子干扰RNA作为一种新型的基因阻断技术,被广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定、信号转导研究以... 背景:无菌性松动是导致人工关节置换后失败和降低人工关节使用寿命的主要原因,肿瘤坏死因子α是一个极具吸引力的无菌性松动治疗新靶点。小分子干扰RNA作为一种新型的基因阻断技术,被广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定、信号转导研究以及基因治疗方面,显示出广阔的应用前景。目的:构建人肿瘤坏死因子α基因的小分子干扰RNA真核表达载体,观察其对U937细胞中肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用。方法:将合成的2对小分子干扰RNA寡核苷酸链分别退火形成双链,连接入pSilencer4.1-CMVneo真核表达载体,分别命名为pSilencer-T1和pSilencer-T2,经酶切及测序鉴定。电转染法转染重组质粒入U937细胞,G418筛选后反转录-聚合酶链反应检测其对肿瘤坏死因子α基因mRNA的干涉效果。结果与结论:经酶切及测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体,经电转染法转染U937细胞后,反转录-聚合酶链反应显示所构建的干涉肿瘤坏死因子α基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,U937细胞中肿瘤坏死因子α基因的mRNA表达水平明显降低。提示成功构建了人肿瘤坏死因子α基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-T1和pSilencer-T2,并在U937细胞中有效地发挥了对肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用。 展开更多
关键词 无菌性松动 肿瘤坏死因子Α 小分子干扰rna 真核表达载体 U937细胞
在线阅读 下载PDF
小分子干扰RNA沉默肝癌细胞CDK2基因对RB、CyclinE、E2F1基因表达的影响
3
作者 刘佳维 于水澜 +1 位作者 宋高臣 于英君 《广州中医药大学学报》 CAS 北大核心 2012年第5期579-581,614,共4页
【目的】观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK2)基因后,细胞周期相关基因RB、CyclinE、E2F1在肝癌细胞SMMC7721中mRNA的表达。【方法】将前期研究中已构建成功并筛选出的最有效干扰抑制CDK2基因的siRNA序列片段,... 【目的】观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK2)基因后,细胞周期相关基因RB、CyclinE、E2F1在肝癌细胞SMMC7721中mRNA的表达。【方法】将前期研究中已构建成功并筛选出的最有效干扰抑制CDK2基因的siRNA序列片段,采用Lipofectamine TM2000脂质体转染法转染肝癌细胞株SMMC7721后分6组:重组质粒组190、重组质粒组191、SMMC7721肝癌组、转染试剂组、阴性对照组、空质粒组。采用实时荧光定量PCR法检测RB、CyclinE、E2F1 mRNA水平。【结果】CDK2的siRNA转染SMMC7721细胞后,RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调。【结论】抑制CDK2基因的表达能使肝癌细胞SMMC7721中RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调,提示肝癌细胞中RB、CyclinE、E2F1基因的表达与CDK2基因的表达具有明显的相关性。 展开更多
关键词 小分子干扰rna 肝癌细胞/病理学 细胞周期相关基因 基因表达调控
在线阅读 下载PDF
PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测
4
作者 秦宏敏 韩会峰 沙广钊 《中国骨与关节损伤杂志》 2008年第7期564-566,共3页
目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ... 目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。 展开更多
关键词 sirna(PTHrp)质粒构建 rna干扰 PTHrp蛋白和mrna表达
在线阅读 下载PDF
存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF-7细胞细胞周期和增殖的调控(英文) 被引量：22
5
作者 李莉萍 梁念慈 罗超权 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期742-748,共7页
背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺... 背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法应用含有U6启动子的mU6pro载体构建存活素siRNA质粒,RT-PCR和Westernblot法检测该质粒转染MCF-7细胞后存活素表达的变化,流式细胞仪和MTT法分别检测其对细胞周期和对细胞增殖的影响。结果存活素siRNA质粒明显下调MCF-7细胞中存活素的表达,阻断细胞周期在G1期,显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论通过RNA干扰,存活素的表达在mRNA和蛋白质水平上被下调。 展开更多
关键词 存活素 小分子干扰rna表达质粒 乳腺癌细胞 细胞周期 细胞增殖
在线阅读 下载PDF
分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 被引量：1
6
作者 魏炎 郏雁飞 +2 位作者 郑燕 马晓丽 汪运山 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期4489-4492,共4页
背景:分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。方法:从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提... 背景:分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。方法:从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA的DNA模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25bp的双链DNA插入片段,连接到pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰RNA表达载体。 展开更多
关键词 分化型胚胎软骨基因1 小干扰rna 构建 质粒 基因表达
在线阅读 下载PDF
质粒介导的NDRG2 shRNA抑制其在人肿瘤细胞HHCC中的表达 被引量：2
7
作者 张翊 裴德宁 +2 位作者 饶春明 药立波 王军志 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期267-269,286,共4页
目的　构建含有针对NDRG2的shRNA的质粒 ,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达。方法　用PCR方法从人基因组DNA中扩增出 336bp的U6 启动子 ,与 2 9bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连。连接后的pSNAVU6 质粒转染入HHCC细胞 ,检测它... 目的　构建含有针对NDRG2的shRNA的质粒 ,抑制NDRG2在HHCC细胞中的表达。方法　用PCR方法从人基因组DNA中扩增出 336bp的U6 启动子 ,与 2 9bp的NDRG2靶序列的反向重复序列和pSNAV质粒相连。连接后的pSNAVU6 质粒转染入HHCC细胞 ,检测它们对NDRG2表达的影响。结果　pSNAVU6 重组质粒能抑制NDRG2的表达。 展开更多
关键词 rna干扰 质粒 人 肿瘤细胞 转录后基因沉默 表达 NDRG2
在线阅读 下载PDF
pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达 被引量：3
8
作者 刘虹 刘伏友 +2 位作者 彭佑铭 袁芳 刘映红 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期552-557,共6页
目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双... 目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 展开更多
关键词 TGFβ1 DU 转化生长因子β1 表达 HPMC 人腹膜间皮细胞 rna干扰 质粒介导 PCDNA3 酶切位点
在线阅读 下载PDF
成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用 被引量：5
9
作者 曾东林 黄洪章 +2 位作者 张彬 潘朝斌 梁蔚文 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2005年第4期315-319,共5页
目的:研究MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法:培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,将siRNA质粒表达载体转染原代... 目的:研究MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法:培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,将siRNA质粒表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞,激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率,RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2mRNA的改变,明胶酶谱法检测MMP-2的变化,应用SPSS11.0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果:成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达,siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染率为41.8%;转染后,成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达水平显著降低,酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少,P<0.05。结论:体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞,并导致MMP-2基因沉默。 展开更多
关键词 MMP-2 rna干扰 转染 sirna质粒表达载体 基因沉默 抑制作用 成釉细胞瘤
在线阅读 下载PDF
shRNA表达质粒体外防治猪传染性胃肠炎病毒感染 被引量：3
10
作者 周俊芳 华修国 +5 位作者 崔立 朱建国 缪德年 邹勇 何锡忠 苏万国 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2009年第1期24-27,共4页
猪传染性胃肠炎病毒是引起猪胃肠道感染的主要病原之一,新生仔猪感染后死亡率很高,给养猪业带来重大经济损失。为了探索运用RNA干扰技术防治猪传染性胃肠炎病毒感染的可能性,我们构建了两个靶向病毒基因组的小发卡RNA (shRNA)表达质粒pE... 猪传染性胃肠炎病毒是引起猪胃肠道感染的主要病原之一,新生仔猪感染后死亡率很高,给养猪业带来重大经济损失。为了探索运用RNA干扰技术防治猪传染性胃肠炎病毒感染的可能性,我们构建了两个靶向病毒基因组的小发卡RNA (shRNA)表达质粒pEGFP-U6/P1和pEGFP-U6/P2,并分别转染猪睾丸(ST)细胞。通过细胞增殖试验(MTS)和定量RT-PCR检测试验表明,这两个质粒均可高效特异地抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制。研究结果表明,RNA干扰(RNAi)技术可以用来有效防治猪传染性胃肠炎。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 rna干扰 SHrna表达质粒 猪睾丸细胞
在线阅读 下载PDF
RNA干扰Twist基因真核表达载体的构建与筛选 被引量：1
11
作者 沈彬 胡敬海 +1 位作者 管旌旌 王春喜 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期59-63,195,共6页
目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体... 目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,构建后通过PCR酶切电泳和质粒测序进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达Twist基因的膀胱癌T24细胞,RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果:构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出400 bp的目的条带,插入片段测序结果与合成的shRNA结果一致。靶向Twist基因的shRNA对膀胱癌T24细胞中Twist基因mRNA抑制率为90%,蛋白质抑制率为86%,两种干扰质粒中shRNA1干扰效果最明显。结论:成功构建了靶向Twist基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGenesil-shRNA1质粒。 展开更多
关键词 rna干扰 质粒 表达载体 短发卡样rna TWIST基因
在线阅读 下载PDF
RNA干扰抑制基质细胞衍生因子-1基因的表达 被引量：1
12
作者 杨文博 孔佩艳 +7 位作者 刘红 彭贤贵 常城 魏立 曾东风 刘林 陈幸华 王庆余 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期111-113,共3页
目的　通过RNA干扰来抑制骨髓基质细胞衍生因子 1(SDF 1)的表达。方法　利用脂质体介导人SDF 1特异性小片段双链RNA(siRNA)的表达质粒转染培养的人骨髓基质细胞,G4 18筛选阳性克隆。RT PCR和ELISA法检测培养细胞SDF 1mRNA和上清液SDF 1... 目的　通过RNA干扰来抑制骨髓基质细胞衍生因子 1(SDF 1)的表达。方法　利用脂质体介导人SDF 1特异性小片段双链RNA(siRNA)的表达质粒转染培养的人骨髓基质细胞,G4 18筛选阳性克隆。RT PCR和ELISA法检测培养细胞SDF 1mRNA和上清液SDF 1蛋白。以转染随机变更siRNA碱基序列的表达质粒和未转染的来源相同的骨髓基质细胞作为对照。结果　较未转染和转染随机变更siRNA碱基序列表达质粒的骨髓基质细胞,转染SDF 1特异性siRNA表达质粒的骨髓基质细胞SDF 1mRNA和SDF 1蛋白明显降低。结论　用SDF 1特异性siRNA的表达质粒转染骨髓基质细胞,抑制了SDF 1基因表达。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子-1 rna干扰 小片段双链rna 表达质粒
在线阅读 下载PDF
端粒酶hTERT基因siRNA表达质粒的构建和鉴定 被引量：1
13
作者 吴斌华 李祥勇 +2 位作者 梁统 唐旭东 周克元 《海南医学院学报》 CAS 2005年第4期266-268,共3页
目的:构建含人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因不同位点的一系列siRNA真核表达质粒mU6-hTERT1～5,为以端粒酶为靶点的基因治疗鼻咽癌研究奠定基础。方法:将人工合成的针对hTERT基因4个不同位点和1个混... 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因不同位点的一系列siRNA真核表达质粒mU6-hTERT1～5,为以端粒酶为靶点的基因治疗鼻咽癌研究奠定基础。方法:将人工合成的针对hTERT基因4个不同位点和1个混乱序列的正反链DNA序列经基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体mU6中,通过PCR检测确定重组结果。根据260nm处紫外红吸收值计算重组质粒的浓度。结果:各对DNA序列均按正确方向插入pmU6质粒,纯度和浓度均符合实验要求。结论:成功构建成了含人端粒酶hTERT基因4个不同位点的siRNA真核表达质粒。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 质粒 聚合酶链反应 rna干扰 人端粒酶逆转录酶 HTERT基因 真核表达质粒 sirna DNA序列 鉴定
在线阅读 下载PDF
靶向XT-1基因shRNA真核表达质粒载体的构建及筛选 被引量：2
14
作者 余资江 余德立 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第3期19-21,共3页
目的构建靶向木糖转移酶-1(XT-1)的短发卡状小干扰RNA(shRNA)质粒表达载体;为寻找脊髓损伤治疗的新靶点提供工具。方法设计4个小分子短发卡状RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNAR的表达载体,进行酶切... 目的构建靶向木糖转移酶-1(XT-1)的短发卡状小干扰RNA(shRNA)质粒表达载体;为寻找脊髓损伤治疗的新靶点提供工具。方法设计4个小分子短发卡状RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNAR的表达载体,进行酶切和测序,再转染体外培养的星形胶质细胞,筛选靶序列。结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,G418可以筛选出阳性克隆。结论成功构建了编码XT-1-shRNA的质粒表达载体;该载体为寻找脊髓损伤治疗的新靶点奠定了基础。 展开更多
关键词 硫酸软骨素蛋白多糖 木糖转移酶-1 小分子干扰rna 短发卡状rna 质粒载体
在线阅读 下载PDF
Livin基因短发卡RNA表达质粒的构建及其对胶质瘤Livin基因表达的影响 被引量：1
15
作者 冯力 曾亮 +1 位作者 王峻 雷霆 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2007年第8期367-370,共4页
目的构建凋亡抑制基因livin基因的特异性短发卡RNA(siRNA)真核表达载体,并观察其在人脑胶质瘤细胞中对livin基因表达的抑制。方法设计有小发夹结构的2条livinβ siRNA对应的DNA序列,将其克隆入pSliencer 3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-... 目的构建凋亡抑制基因livin基因的特异性短发卡RNA(siRNA)真核表达载体,并观察其在人脑胶质瘤细胞中对livin基因表达的抑制。方法设计有小发夹结构的2条livinβ siRNA对应的DNA序列,将其克隆入pSliencer 3.1质粒,构建重组质粒pSliencer-livinβ,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。以脂质体法将pSliencer-livinβ转染人胶质瘤细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测Livinβ蛋白的表达,筛选最有效的一组pSliencer-livinβ质粒。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-livinβ构建成功。转染后胶质瘤细胞livinβmRNA和蛋白表达均受到明显抑制。结论成功构建livinβ基因的特异性短发卡RNA(siRNA)真核表达载体能够显著抑制人胶质瘤细胞livinβ基因的表达。 展开更多
关键词 rna 小分子干扰 质粒 神经胶质瘤
在线阅读 下载PDF
转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应 被引量：1
16
作者 尹永硕 肖强 +5 位作者 谢玉波 李雷 王长青 唐振勇 马玉林 崔建华 《广西医学院学报》 北大核心 2008年第2期175-178,共4页
目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1... 目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 rna干扰 胃癌MGC803细胞 E2F-1 重组表达质粒
在线阅读 下载PDF
针对ATM基因RNA干扰质粒的构建及鉴定
17
作者 郑爱青 宋现让 +2 位作者 穆海玉 王兴武 魏玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第2期184-186,共3页
目的:构建针对ATM基因的RNA干扰表达质粒pRiATM,并观察其抑制SPCA1人肺癌细胞ATM表达的效果。方法:构建针对ATM基因的短发夹状小干扰RNA真核表达载体pRiATM,并短暂转染SPCA1细胞,采用荧光定量RT-PCR和Western blotting观察其抑制SPCA1细... 目的:构建针对ATM基因的RNA干扰表达质粒pRiATM,并观察其抑制SPCA1人肺癌细胞ATM表达的效果。方法:构建针对ATM基因的短发夹状小干扰RNA真核表达载体pRiATM,并短暂转染SPCA1细胞,采用荧光定量RT-PCR和Western blotting观察其抑制SPCA1细胞ATM表达的效果。结果:pRiATM1和pRiATM2转染SPCA1细胞后,与转染pRiG-FP非特异性对照组相比,ATMmRNA水平分别下降86.4%和77.6%(两组均P<0.01)。与转染pRiGFP对照组相比,pRi-ATM1组和pRiATM2组ATM蛋白表达水平分别是对照组的4.3%和10.6%(均P<0.01),以pRiATM1抑制ATM表达效果最显著。结论:pRiATM质粒构建成功,转染SPCA1细胞后可以明显抑制ATM基因的表达。 展开更多
关键词 ATM基因 rna干扰 表达质粒 SPCA1 A1细胞 鉴定 真核表达载体 小干扰rna
在线阅读 下载PDF
Fas基因siRNA表达质粒的构建及鉴定
18
作者 王海东 蒋耀光 +3 位作者 杨康 林一丹 王如文 邓波 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第4期337-339,F0002,共4页
目的构建肿瘤凋亡基因Fas小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肺腺癌A549细胞Fas基因表达的阻抑作用,探索Fas/FasL途径在肺癌转移中的作用机制。方法设计有小发夹结构的3条Fas siRNA对应模板DNA序列,退火处理后克隆至pGCsi-U6质粒,构... 目的构建肿瘤凋亡基因Fas小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究其对人肺腺癌A549细胞Fas基因表达的阻抑作用,探索Fas/FasL途径在肺癌转移中的作用机制。方法设计有小发夹结构的3条Fas siRNA对应模板DNA序列,退火处理后克隆至pGCsi-U6质粒,构建重组质粒pSi-Fas。将pSi-Fas转染人肺癌A549细胞,采用Western blot检测Fas表达。结果酶切及测序证实质粒pSi-Fas构建成功,可显著抑制A549细胞Fas蛋白表达。结论成功构建的Fas siRNA表达质粒pSi-Fas能抑制人肺癌A549细胞Fas蛋白表达。 展开更多
关键词 基因表达 rna干扰 质粒
在线阅读 下载PDF
靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选
19
作者 王卫东 蒋立新 +1 位作者 徐江平 陆兵勋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-33,共4页
目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进... 目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功。靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显。结论成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。 展开更多
关键词 rna干扰 质粒表达载体 短发卡样rna hVEGF165基因
在线阅读 下载PDF
靶向胆囊癌血管内皮生长因子基因短发夹样RNA表达质粒的构建与筛选
20
作者 曲华伟 张阳德 +1 位作者 陈玉祥 何剪太 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第50期9879-9882,共4页
背景:已有研究通过RNA干扰技术,抑制结肠癌、前列腺癌和视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮细胞生长因子基因的表达。尚未见关于RNA干扰血管内皮生长因子抑制胆囊癌肿瘤的相关研究。目的:创新性构建编码胆囊癌血管内皮生长因子基因的短发夹样... 背景:已有研究通过RNA干扰技术,抑制结肠癌、前列腺癌和视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮细胞生长因子基因的表达。尚未见关于RNA干扰血管内皮生长因子抑制胆囊癌肿瘤的相关研究。目的:创新性构建编码胆囊癌血管内皮生长因子基因的短发夹样RNA质粒表达载体,筛选出沉默血管内皮生长因子基因效果最明显的短发夹样RNA表达质粒。设计、时间及地点:基因工程观察实验,于2008/2009在中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心实验室完成。材料:人胆囊癌细胞株GBC-SD购于同济大学肿瘤研究所。方法:设计4对针对血管内皮生长因子基因不同位点的短发夹样RNA片段,构建携带此短发夹样RNA片段的表达质粒(短发夹样RNA1～4)并行酶切鉴定分析。然后通过脂质体将重组质粒转染到胆囊癌细胞株GBC-SD中,48h后测定转染率。主要观察指标:重组质粒酶切鉴定结果。转染效率。采用及荧光PCR检测血管内皮生长因子mRNA表达。结果:成功构建了靶向血管内皮生长因子基因的短发夹样RNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的短发夹样RNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。重组质粒经酶切鉴定证实构建成功。质粒在GBC-SD细胞中的转染率约为58.6%。短发夹样RNA抑制血管内皮生长因子基因的mRNA表达,短发夹样RNA2抑制率最高,可达86%。结论:成功构建并筛选出的靶向血管内皮生长因子的短发夹样RNA表达质粒,其对胆囊癌GBC-SD细胞内的血管内皮生长因子表达具有明显抑制作用。短发夹样RNA2表达质粒抑制作用最明显。 展开更多
关键词 rna干扰 血管内皮生长因子 质粒表达载体
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 8 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部