基于巴斯德毕赤酵母表达系统探讨了屋尘螨过敏原Der p 1的重组表达与纯化。首先,采用毕赤酵母GS115表达密码子优化的全长编码基因PreProDer p 1,其产量可达100 mg/L,进一步共表达分子伴侣实现产量提高到140 mg/L,并实现3 L反应器发酵产...基于巴斯德毕赤酵母表达系统探讨了屋尘螨过敏原Der p 1的重组表达与纯化。首先,采用毕赤酵母GS115表达密码子优化的全长编码基因PreProDer p 1,其产量可达100 mg/L,进一步共表达分子伴侣实现产量提高到140 mg/L,并实现3 L反应器发酵产量提高到1 g/L。其次,对上述重组蛋白发酵液分别使用阳离子交换层析及亲和层析进行了纯化工艺优化,目的蛋白得率达到60.7%。本研究为后续PreProDre p 1诊断试剂盆的开发提供了参考。展开更多
过敏原的硝基化会引起其致敏潜能的增强,进而带来更大的致敏性健康风险.过敏原蛋白质通常含有多个酪氨酸硝基化位点,分析过敏原硝基化的位点选择性是探究硝基化对过敏原致敏性影响的重要基础.本文以尘螨过敏原为研究对象,建立了基于超...过敏原的硝基化会引起其致敏潜能的增强,进而带来更大的致敏性健康风险.过敏原蛋白质通常含有多个酪氨酸硝基化位点,分析过敏原硝基化的位点选择性是探究硝基化对过敏原致敏性影响的重要基础.本文以尘螨过敏原为研究对象,建立了基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时定量分析3种尘螨过敏原(Der f 1、Der p 1和Der p 2)的13个酪氨酸位点硝基化程度的方法,并应用于分析3种尘螨过敏原在过氧亚硝酸盐硝基化作用下的位点选择性.结果表明,3种尘螨过敏原均发生了位点特异性的硝基化,Y195、Y37和Y92分别为Der f 1、Der p 1和Der p 2中反应活性最高的硝基化位点.尘螨过敏原位点选择性的硝基化表明,在评价硝基化尘螨过敏原的致敏性变化时应当考虑其位点特异性的硝基化状况.展开更多
目的探讨屋尘螨过敏原淋巴免疫治疗特应性皮炎临床应用价值,并探究其临床适用性。方法选择86例特应性皮炎患者作为研究病例,根据治疗方案不同,分为研究组和对照组2组,各43例。对照组患者给予皮下注射进行治疗,研究组患者给予屋尘螨过敏...目的探讨屋尘螨过敏原淋巴免疫治疗特应性皮炎临床应用价值,并探究其临床适用性。方法选择86例特应性皮炎患者作为研究病例,根据治疗方案不同,分为研究组和对照组2组,各43例。对照组患者给予皮下注射进行治疗,研究组患者给予屋尘螨过敏原淋巴免疫进行治疗。观察2组患者治疗后各项临床指标的情况;并比较2组患者治疗前后特异性Ig E及特异性Ig G 4。结果研究组患者的湿疹面积及严重程度指数、皮损受累面积百分比、瘙痒评分及用药评分分别为(5.4±0.6)、(9.2±0.2)%、(1.9±0.1)分、(1.8±0.8)分均显著低于对照组(17.4±2.3)、(19.2±0.9)%、(5.3±0.5)分、(12.4±4.8)分,2组比较,差异均具有统计学意义(t1=33.1048,t2=71.1254,t3=43.7247,t4=14.2840,P<0.05);治疗前,2组患者的特异性Ig E及特异性Ig G 4基本相符,2组比较,差异均无统计学意义;治疗后,2组患者的特异性Ig E及特异性Ig G 4均得到显著改善,与治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),但研究组患者的特异性Ig E(0.5±0.1)k U/L,Ig G 4(1494.2±312.2)ng/L改善更为明显,2组比较,差异均具有统计学意义(t1=9.5425,t2=2.8636,P<0.05)。结论屋尘螨过敏原淋巴免疫治疗特应性皮炎的临床疗效显著,可以显著降低患者的特异性Ig E,提高患者的特异性Ig G 4,安全可靠,适合临床长期推广应用。展开更多
目的 动态监测哮喘患儿家庭内尘螨过敏原含量变化规律,了解其与患儿哮喘控制评估水平、尘螨致敏程度及呼出气一氧化氮浓度的相关性.方法 选取北京地区48例尘螨过敏性哮喘患儿,在1年内4个季节分别收集其家庭内床垫、枕头、卧室地板、客...目的 动态监测哮喘患儿家庭内尘螨过敏原含量变化规律,了解其与患儿哮喘控制评估水平、尘螨致敏程度及呼出气一氧化氮浓度的相关性.方法 选取北京地区48例尘螨过敏性哮喘患儿,在1年内4个季节分别收集其家庭内床垫、枕头、卧室地板、客厅地板及沙发处灰尘样本,采用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）测定以上灰尘样本中户尘螨过敏原第一组分（Derp 1）和粉尘螨过敏原第一组分（Derf 1）的含量;荧光酶联免疫法测定患儿血清尘螨特异性IgE（sIgE）的浓度及分级;记录各次临床随访期患儿的哮喘控制测试（ACT）或儿童哮喘控制测试（C-ACT）评分值以及根据患儿哮喘症状等指标得到的临床哮喘控制评估水平结果.结果 全部灰尘样本Der f 1平均含量为0.13μg/g,显著高于Der p1平均含量（0.02 μg/g,P＜0.05）,床垫、枕头及沙发灰尘样本Derf1含量分别为0.69 μg/g,0.42μg/g,0.22 μg/g,均显著高于卧室及客厅地板灰尘样本（0.07 μg/g、0.07 μg/g）.发现仅夏季床垫灰尘样本Der f 1含量与患儿哮喘控制评估水平呈负相关关系（r=-0.318,P=0.036）;夏季各区域灰尘样本Der f 1含量和秋季的枕头灰尘样本Der p 1含量分别与ACT/C-ACT评分呈负相关关系.冬季的床垫灰尘样本Der f 1含量与患儿血清粉尘螨sIgE浓度级别呈正相关关系,各季节室内多个区域样本中Der p 1含量与患儿血清户尘螨和粉尘螨sIgE浓度级别呈正相关关系.结论 本地区尘螨过敏性哮喘患儿室内尘螨过敏原类型以Der f 1为主,床垫、枕头及沙发区域是尘螨过敏原的主要来源.室内尘螨过敏原含量对患儿的哮喘控制水平、尘螨致敏程度的影响呈现季节、区域和螨种依赖性.展开更多
目的 建立一种能快速、准确检测环境中屋尘螨过敏原Der p 1基因的逆转录环介导等温扩增可视化(RT-LAMP)技术。方法 用Primer Explore 4.0对Der p 1基因进行RT-LAMP引物设计与筛选,提取屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨总RNA,利用...目的 建立一种能快速、准确检测环境中屋尘螨过敏原Der p 1基因的逆转录环介导等温扩增可视化(RT-LAMP)技术。方法 用Primer Explore 4.0对Der p 1基因进行RT-LAMP引物设计与筛选,提取屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨总RNA,利用优化的RT-LAMP反应体系分别扩增4个螨种的Der p 1基因,评价方法的特异度和灵敏度。采集74份哮喘患儿的床尘样品,提取总RNA进行Der p 1基因RT-PCR和RT-LAMP检测。结果 利用优化的RT-LAMP方法检测4种螨的Der p 1基因,只有屋尘螨阳性,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物呈现特征性梯形条带,肉眼和紫外灯下均观察到绿色荧光。建立的RT-LAMP对Der p 1基因的最小检测量为1.0×10^(-6 )μg,敏感性比常规RT-PCR高10倍;检测74份床尘样品,阳性率85.1%,与RT-PCR阳性率70.3%比较差异具有统计学意义(χ^(2)=4.72,P<0.05)。结论 建立的屋尘螨过敏原Der p 1基因RT-LAMP较常规RT-PCR灵敏度和特异性更高,可用于屋尘螨过敏原污染的快速检测。展开更多
目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,...目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。展开更多
文摘基于巴斯德毕赤酵母表达系统探讨了屋尘螨过敏原Der p 1的重组表达与纯化。首先,采用毕赤酵母GS115表达密码子优化的全长编码基因PreProDer p 1,其产量可达100 mg/L,进一步共表达分子伴侣实现产量提高到140 mg/L,并实现3 L反应器发酵产量提高到1 g/L。其次,对上述重组蛋白发酵液分别使用阳离子交换层析及亲和层析进行了纯化工艺优化,目的蛋白得率达到60.7%。本研究为后续PreProDre p 1诊断试剂盆的开发提供了参考。
文摘过敏原的硝基化会引起其致敏潜能的增强,进而带来更大的致敏性健康风险.过敏原蛋白质通常含有多个酪氨酸硝基化位点,分析过敏原硝基化的位点选择性是探究硝基化对过敏原致敏性影响的重要基础.本文以尘螨过敏原为研究对象,建立了基于超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时定量分析3种尘螨过敏原(Der f 1、Der p 1和Der p 2)的13个酪氨酸位点硝基化程度的方法,并应用于分析3种尘螨过敏原在过氧亚硝酸盐硝基化作用下的位点选择性.结果表明,3种尘螨过敏原均发生了位点特异性的硝基化,Y195、Y37和Y92分别为Der f 1、Der p 1和Der p 2中反应活性最高的硝基化位点.尘螨过敏原位点选择性的硝基化表明,在评价硝基化尘螨过敏原的致敏性变化时应当考虑其位点特异性的硝基化状况.
文摘目的探讨屋尘螨过敏原淋巴免疫治疗特应性皮炎临床应用价值,并探究其临床适用性。方法选择86例特应性皮炎患者作为研究病例,根据治疗方案不同,分为研究组和对照组2组,各43例。对照组患者给予皮下注射进行治疗,研究组患者给予屋尘螨过敏原淋巴免疫进行治疗。观察2组患者治疗后各项临床指标的情况;并比较2组患者治疗前后特异性Ig E及特异性Ig G 4。结果研究组患者的湿疹面积及严重程度指数、皮损受累面积百分比、瘙痒评分及用药评分分别为(5.4±0.6)、(9.2±0.2)%、(1.9±0.1)分、(1.8±0.8)分均显著低于对照组(17.4±2.3)、(19.2±0.9)%、(5.3±0.5)分、(12.4±4.8)分,2组比较,差异均具有统计学意义(t1=33.1048,t2=71.1254,t3=43.7247,t4=14.2840,P<0.05);治疗前,2组患者的特异性Ig E及特异性Ig G 4基本相符,2组比较,差异均无统计学意义;治疗后,2组患者的特异性Ig E及特异性Ig G 4均得到显著改善,与治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),但研究组患者的特异性Ig E(0.5±0.1)k U/L,Ig G 4(1494.2±312.2)ng/L改善更为明显,2组比较,差异均具有统计学意义(t1=9.5425,t2=2.8636,P<0.05)。结论屋尘螨过敏原淋巴免疫治疗特应性皮炎的临床疗效显著,可以显著降低患者的特异性Ig E,提高患者的特异性Ig G 4,安全可靠,适合临床长期推广应用。
文摘目的 动态监测哮喘患儿家庭内尘螨过敏原含量变化规律,了解其与患儿哮喘控制评估水平、尘螨致敏程度及呼出气一氧化氮浓度的相关性.方法 选取北京地区48例尘螨过敏性哮喘患儿,在1年内4个季节分别收集其家庭内床垫、枕头、卧室地板、客厅地板及沙发处灰尘样本,采用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）测定以上灰尘样本中户尘螨过敏原第一组分（Derp 1）和粉尘螨过敏原第一组分（Derf 1）的含量;荧光酶联免疫法测定患儿血清尘螨特异性IgE（sIgE）的浓度及分级;记录各次临床随访期患儿的哮喘控制测试（ACT）或儿童哮喘控制测试（C-ACT）评分值以及根据患儿哮喘症状等指标得到的临床哮喘控制评估水平结果.结果 全部灰尘样本Der f 1平均含量为0.13μg/g,显著高于Der p1平均含量（0.02 μg/g,P＜0.05）,床垫、枕头及沙发灰尘样本Derf1含量分别为0.69 μg/g,0.42μg/g,0.22 μg/g,均显著高于卧室及客厅地板灰尘样本（0.07 μg/g、0.07 μg/g）.发现仅夏季床垫灰尘样本Der f 1含量与患儿哮喘控制评估水平呈负相关关系（r=-0.318,P=0.036）;夏季各区域灰尘样本Der f 1含量和秋季的枕头灰尘样本Der p 1含量分别与ACT/C-ACT评分呈负相关关系.冬季的床垫灰尘样本Der f 1含量与患儿血清粉尘螨sIgE浓度级别呈正相关关系,各季节室内多个区域样本中Der p 1含量与患儿血清户尘螨和粉尘螨sIgE浓度级别呈正相关关系.结论 本地区尘螨过敏性哮喘患儿室内尘螨过敏原类型以Der f 1为主,床垫、枕头及沙发区域是尘螨过敏原的主要来源.室内尘螨过敏原含量对患儿的哮喘控制水平、尘螨致敏程度的影响呈现季节、区域和螨种依赖性.
文摘目的 建立一种能快速、准确检测环境中屋尘螨过敏原Der p 1基因的逆转录环介导等温扩增可视化(RT-LAMP)技术。方法 用Primer Explore 4.0对Der p 1基因进行RT-LAMP引物设计与筛选,提取屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨、腐食酪螨总RNA,利用优化的RT-LAMP反应体系分别扩增4个螨种的Der p 1基因,评价方法的特异度和灵敏度。采集74份哮喘患儿的床尘样品,提取总RNA进行Der p 1基因RT-PCR和RT-LAMP检测。结果 利用优化的RT-LAMP方法检测4种螨的Der p 1基因,只有屋尘螨阳性,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物呈现特征性梯形条带,肉眼和紫外灯下均观察到绿色荧光。建立的RT-LAMP对Der p 1基因的最小检测量为1.0×10^(-6 )μg,敏感性比常规RT-PCR高10倍;检测74份床尘样品,阳性率85.1%,与RT-PCR阳性率70.3%比较差异具有统计学意义(χ^(2)=4.72,P<0.05)。结论 建立的屋尘螨过敏原Der p 1基因RT-LAMP较常规RT-PCR灵敏度和特异性更高,可用于屋尘螨过敏原污染的快速检测。
文摘目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。
