人乳头瘤病毒16型表位嵌合病毒样颗粒的构建及免疫原性研究

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作者 郭健 张力 +5 位作者 陈力源 李玉华 杨皓杰 田一凡 朱洁 刘微 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期689-695,共7页

目的制备E749-57表位嵌合病毒样颗粒,并进行免疫原性分析。方法利用分子模拟软件Discovery Studio预测HPV16 L1的E749-57最佳嵌合位点,将E749-57表位嵌入预测位点。构建pET28a-16L1-E749-57重组质粒,于大肠杆菌中诱导表达HPV16L1-E749-5... 目的制备E749-57表位嵌合病毒样颗粒,并进行免疫原性分析。方法利用分子模拟软件Discovery Studio预测HPV16 L1的E749-57最佳嵌合位点,将E749-57表位嵌入预测位点。构建pET28a-16L1-E749-57重组质粒,于大肠杆菌中诱导表达HPV16L1-E749-57蛋白并利用镍柱进行亲和层析纯化。于体外重组VLPs后,进行动态光散射粒径和透射电镜分析。用E749-57嵌合VLPs免疫小鼠,假病毒中和试验检测免疫血清中和抗体滴度。流式多因子法检测Th1和Th2型细胞因子水平。结果HI loop区355/356为最佳表位嵌合位点。正确表达了HPV16 L1-E749-57蛋白并组装E749-57嵌合VLPs。E749-57嵌合VLPs免疫小鼠3次后,小鼠血清中和抗体滴度log10平均值达到4.23,略低于野生型VLPs(log10平均值为4.45)。但是,相对于野生型VLPs,E749-57嵌合VLPs诱导产生Th1型细胞因子(INF-γ,IL-2,TNF-α)的水平显著提高。结论本研究制备的E749-57嵌合VLPs能刺激机体同时产生较强的体液和细胞免疫应答,可能兼具预防和治疗双重功效,为宫颈癌治疗性疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 HPV16 嵌合病毒样颗粒 E7蛋白 宫颈癌疫苗 体液和细胞免疫

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HPV6b结构蛋白L1和沙眼衣原体CTL表位嵌合病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达

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作者 黄秋穗 朱珊丽 +3 位作者 侯晓红 王乐丹 赖娟 张丽芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1095-1099,共5页

目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞... 目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞表达嵌合病毒样颗粒,并经SDS-PAGE电泳和Westernblot分析鉴定,电镜负染。结果嵌合蛋白HPV6bL1/CtMOMP249-268在昆虫细胞中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗产生特异性反应,电子显微镜观察到病毒样颗粒形成。结论在昆虫细胞中表达的含HPV6bL1和CtCTL表位的嵌合蛋白,能自行组装成病毒样颗粒,为人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗的研究奠定基础。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 沙眼衣原体 嵌合病毒样颗粒

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猪塞内卡谷病毒和圆环病毒2型嵌合病毒样颗粒疫苗的制备与抗体检测 被引量：1

3

作者 何至远 吴冬荀 +4 位作者 张贺楠 王飞 吴珊珊 刘昕泽 肖进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期27-31,37,共6页

为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系... 为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测。试验将猪SVV P 1基因部分VP 3序列替换为PCV2 ORF 2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系统获得表达猪SVV、PCV2嵌合重组蛋白的重组杆状病毒,将病毒培养物纯化,经蛋白检测及电镜观察确定成功构建猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒(大小约30 nm)。结果表明,制备的猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗可使试验猪同时产生针对猪SVV和PCV2的特异性抗体,充分显示出其作为一种针对猪场SVV和PCV2合并感染的安全有效疫苗的前景。 展开更多

关键词 猪塞内卡谷病毒 圆环病毒2型 嵌合病毒样颗粒疫苗 杆状病毒表达系统

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“嵌合病毒样颗粒疫苗”国际学术研讨会在德闭幕

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作者 徐文忠 《畜牧兽医科技信息》 1995年第7期8-8,共1页

首次“嵌合病毒样颗粒疫苗”国际学术研讨会,于1995年5月17日—19日在德国柏林洪堡大学召开。来自12个国家共78名专家教授参加了会议,我国派出2名专家参加此会。会议分:颗粒装配;病毒样颗粒(VLP)的潜在应用;嵌合病毒样颗粒;新的表达系... 首次“嵌合病毒样颗粒疫苗”国际学术研讨会,于1995年5月17日—19日在德国柏林洪堡大学召开。来自12个国家共78名专家教授参加了会议,我国派出2名专家参加此会。会议分:颗粒装配;病毒样颗粒(VLP)的潜在应用;嵌合病毒样颗粒;新的表达系统及免疫新方法等五个专题。该次研讨会充分展现了目前世界上基因工程疫苗研究的最新进展:1。 展开更多

关键词 嵌合病毒样颗粒 国际学术研讨会 基因工程疫苗 表达系统 人乳头瘤病毒 高分辨电子显微镜 虹豆花叶病毒 最新进展 基因免疫 HBCAG

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一种可诱发高滴度的针对人乳头瘤病毒HPV16,HPV52,HPV58中和抗体反应的HPV16嵌合病毒样颗粒疫苗的研究 被引量：3

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作者 陈雪 王志荣 +2 位作者 刘洪洋 张婷 许雪梅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期505-514,共10页

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2... 人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16-37多肽（与HPV52L2aa.16-37序列相同）插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A（Alum-MPL）免疫小鼠。活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度最高（滴度,76 800）,与HPV16L1VLP对照组的相当（P〉0.05）;重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103（分别为4 050和1 725）;另外,还可中等滴度中和HPV45（550）,HPV18（506）,HPV33（500）,HPV39（463）,HPV68（431）,HPV6（300）,HPV57（150）,HPV11（125）及较低滴度的中和HPV2/HPV27（40）,HPV35（38）,HPV5（25）,HPV31（13）,但对HPV59没有中和活性。因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒(HPV) 嵌合病毒样颗粒 HPV58L2多肽 交叉中和抗体 广谱疫苗

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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒组装研究 被引量：5

6

作者 董虎 郭慧琛 +4 位作者 敖大 韩世充 闫丹 刘湘涛 孙世琪 《安徽农业科学》 CAS 2014年第13期3902-3906,共5页

[目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础。[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源... [目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础。[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源多肽的口蹄疫病毒样颗粒。[结果]大肠杆菌表达的口蹄疫衣壳蛋白主要以可溶性存在,在缓冲体系中融合标签被切除衣壳蛋白VP0、VP3和FLAGVP1组装成病毒样颗粒,其大小约25 nm左右。FLAG序列成功插入GH-loop可变区第150-151氨基酸位点之间,外源多肽的插入没有影响衣壳蛋白VP1的空间结构。[结论]口蹄疫loop可变区引入外源抗原是可行的,但外源多肽的大小及理化性质会影响病毒样颗粒的组装效率。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 原核表达 GH-loop 嵌合型病毒样颗粒

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新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒的构建与鉴定 被引量：2

7

作者 李红丽 闫巍文 +4 位作者 王红宝 郭雪丽 张晋强 王志宇 王毅 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第17期122-125,共4页

为了构建新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒（cVLP）,试验以目前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒为研究对象,通过昆虫杆状病毒表达系统构建了3种重组杆状病毒,分别为rBV-M、rBV-HN及r BV-FHA,并以适当比例感染悬浮... 为了构建新城疫与H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒（cVLP）,试验以目前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒为研究对象,通过昆虫杆状病毒表达系统构建了3种重组杆状病毒,分别为rBV-M、rBV-HN及r BV-FHA,并以适当比例感染悬浮昆虫Sf9细胞,经蔗糖密度梯度纯化后获得嵌合型病毒样颗粒,同时采用新城疫和H9亚型禽流感标准阳性血清对嵌合型病毒样颗粒进行血凝和血凝抑制试验。结果表明：嵌合型病毒样颗粒以新城疫病毒M蛋白作为颗粒骨架,插入了新城疫病毒HN蛋白和经F蛋白胞内域融合的禽流感病毒HA蛋白,在电镜下观察纯化的嵌合型病毒样颗粒具有完整的囊膜结构及纤突,该颗粒具有结合两种阳性血清的能力。说明试验成功构建了包含有新城疫病毒M蛋白、HN蛋白和H9亚型禽流感病毒HA蛋白的嵌合型病毒样颗粒,并且保留了良好的生物学活性。 展开更多

关键词 基因Ⅶ型新城疫病毒 H9N2亚型禽流感 嵌合型病毒样颗粒 构建 鉴定

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新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒免疫效果分析 被引量：1

8

作者 李红丽 闫巍文 +4 位作者 王红宝 郭雪丽 张伟业 刘源 王志宇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第12期133-136,共4页

为了测定新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒(ND-H9N2 VLPs)作为疫苗候选株的免疫效果,试验将ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂制成ND-H9N2 VLPs疫苗,测定ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量及一次超剂量接种的安全性。选取7日龄非免疫雏鸡30只... 为了测定新城疫-H9N2亚型禽流感嵌合型病毒样颗粒(ND-H9N2 VLPs)作为疫苗候选株的免疫效果,试验将ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂制成ND-H9N2 VLPs疫苗,测定ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量及一次超剂量接种的安全性。选取7日龄非免疫雏鸡30只,随机分为3组,每组10只。第1组为ND-H9N2 VLPs联合佐剂免疫组,以350μL/只的剂量进行皮下注射免疫;第2组为商品疫苗组[鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+F株)]依照商品说明书进行免疫;第3组为阴性对照组,以相同方式注射同等剂量的生理盐水;初免两周后,以同等剂量和免疫方式进行加强免疫,加强免疫3周后,所有鸡用新城疫强毒TY-1株和H9N2亚型禽流感病毒SX-1株进行滴鼻、点眼攻毒,每周定时进行鸡翅下静脉采血,分离血清,用血凝抑制试验测定每只鸡的抗体效价,攻毒后连续14 d每天定时观察各组鸡群的临床症状,统计死亡数,计算免疫保护率。结果表明:ND-H9N2 VLPs疫苗的最小免疫剂量为30μg蛋白/只,用此疫苗以5倍剂量进行免疫,免疫鸡未出现新城疫、禽流感临床症状,表明此疫苗安全性良好。ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂免疫组与商品疫苗组比,两组鸡在临床症状和存活率上表现一致,在抵抗当前流行毒株的感染时,都能够提供100%保护作用;两组鸡免疫后新城疫和H9亚型禽流感抗体效价都是在第5周达到峰值,之后缓慢下降,但是ND-H9N2 VLPs联合铝佐剂疫苗免疫组鸡的血清抗体效价与商品疫苗比要相对高些。说明本试验研制的ND-H9N2 VLPs作为疫苗候选株具有很大的防控优势。 展开更多

关键词 新城疫病毒 H9N2亚型禽流感病毒 嵌合型病毒样颗粒 安全性 免疫效果 血清抗体

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人乳头瘤病毒16型嵌合病毒样颗粒体外形成实验方法的建立

9

作者 张飞齐 杨露 杨晓明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期999-1003,1010,共6页

目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型嵌合病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)体外形成实验的方法。方法以HPV16型L1为模板,将两个L2保守序列(aa56~75,aa108~120)分别插入L1两个可插入位点(DE袢状区,h4状区),构建出4... 目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型嵌合病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)体外形成实验的方法。方法以HPV16型L1为模板,将两个L2保守序列(aa56~75,aa108~120)分别插入L1两个可插入位点(DE袢状区,h4状区),构建出4种嵌合蛋白基因,利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统表达嵌合的4种VLP蛋白,经蔗糖密度梯度离心纯化,纯化的目的蛋白进行VLP体外解聚重聚实验,Western blot分析体外解聚重聚前后的蛋白。结果表达及纯化的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白相对分子质量均约60 000,大小与预期相符;经VLP体外解聚重聚实验,使不能很好自组装的4种HPV16 L1-L2嵌合蛋白组装形成VLP,并具有免疫原性。结论建立的方法有助于HPV嵌合VLP的形成,能够明显提高其组装效率,为以L2蛋白为目标的第二代HPV疫苗的嵌合VLP体外组装提供了可行的实验方法。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 基因重组 嵌合病毒样颗粒 体外重组实验

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嵌合型病毒样颗粒疫苗的研究进展及药学研发思路 被引量：2

10

作者 凌媛 李敏 《中国药业》 CAS 2021年第6期96-96,I0001-I0006,共7页

目的了解嵌合型病毒样颗粒(c VLP)疫苗在防治疾病等方面的研究进展,并探讨其药学研发思路。方法介绍常用病毒样颗粒(VLP)载体,总结cVLP疫苗在防治肿瘤和慢性疾病方面的应用,并从c VLP疫苗的构建与设计、VLP载体与免疫表位的连接方式、... 目的了解嵌合型病毒样颗粒(c VLP)疫苗在防治疾病等方面的研究进展,并探讨其药学研发思路。方法介绍常用病毒样颗粒(VLP)载体,总结cVLP疫苗在防治肿瘤和慢性疾病方面的应用,并从c VLP疫苗的构建与设计、VLP载体与免疫表位的连接方式、结构确证研究三方面开展c VLP疫苗的药学研究。结果与结论 cVLP作为改良型VLP,除构建自我组装VLP针对同源病毒的疫苗外,将VLP作为递呈载体还可呈现除载体外的其他病毒或肿瘤相关抗原表位,实现对多种病毒或肿瘤抗原的共同免疫。且c VLP作为一种技术平台,还可在预防病毒及治疗肿瘤和过敏性疾病中发挥重要作用。 展开更多

关键词 病毒样颗粒 嵌合型病毒样颗粒 疫苗 进展

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猪圆环病毒2b型病毒样颗粒表面可用于外源肽展示的位点分析

11

作者 李国攀 荣俊 +1 位作者 谢明 匡红艳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第17期12-18,140,共8页

为了分析猪圆环病毒2b型病毒样颗粒(virus-like particles of Porcine circovirus type 2b,PCV-2b VLPs)表面具有外源肽展示潜力的位点,试验通过PyMol软件分析了PCV-2b VLPs表面的位点分布,并以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV... 为了分析猪圆环病毒2b型病毒样颗粒(virus-like particles of Porcine circovirus type 2b,PCV-2b VLPs)表面具有外源肽展示潜力的位点,试验通过PyMol软件分析了PCV-2b VLPs表面的位点分布,并以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Gp5的中和表位B(Epitope B,EpB)为外源肽,通过重叠PCR方法将表面位点替换为EpB,构建EpB嵌合的PCV-2b衣壳蛋白(Cap),利用原核表达系统诱导表达后进行凝胶层析纯化和Western-blot检测,并利用透射电子显微镜分析VLPs的组装状态。结果表明:在PCV-2b VLPs表面共筛选到8个可用于外源肽展示的位点,分别为S1(Y^(50)TIKRTTVKTP^(60))、S2(L^(75)PPGGGSN^(82))、S3(F^(124)VTKATAL^(131))、S4(V^(161)LDSTIDY^(168))、S5(Q^(183)TAGNVD^(189))、S6(I^(201)YDQE^(205))、S7(K^(222)DPPL^(226))、S8(S^(104)PITQGDRGVGS^(115))位点;将EpB替换展示到S1~S8位点后,构建的EpB嵌合的PCV-2b Cap能够在原核表达系统中获得不同程度的可溶性表达,其中S1~S7位点被EpB替换后能够实现较高水平的可溶性表达;8个目的蛋白均能被抗EpB抗体特异性识别,也均能够自组装形成VLPs,但粒径大小和形态与PCV-2b VLPs有不同程度的差异。说明试验筛选出的8个位点均有一定的外源肽展示能力。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2b型 病毒样颗粒 表面展示 原核表达系统 嵌合病毒样颗粒

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布鲁菌二联BCSP31-L7/L12-IL-2嵌合病毒样颗粒疫苗候选株的构建与鉴定 被引量：1

12

作者 邹映雪 黄天鸿 +6 位作者 冯嘉轩 丁佳欣 陈铭桦 陈凯楠 郭春红 张頔 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期865-871,共7页

布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫... 布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫增强因子IL-2、高保守性的保护性抗原蛋白L7/L12(来源猪种S2株)和羊种BCSP31蛋白(来源羊种M5株)为靶点,构建绿色、安全的布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒新型疫苗候选株(BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs)。PCR及免疫荧光结果表明成功构建了表达IL-2和L7/L12蛋白的重组杆状病毒,Western blot结果显示该cVLPs各组分蛋白正确表达,透射电镜观察可见表面展示纤突结构、大小约为100 nm的粒子,表明布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs构建成功。 展开更多

关键词 布鲁菌 新城疫病毒样颗粒载体 二联嵌合型病毒样颗粒疫苗 L7/L12蛋白 BCSP31蛋白

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新城疫、血清4型和8型禽腺病毒病二联三价嵌合型病毒样颗粒的构建及鉴定

13

作者 郭春红 李金斗 +4 位作者 丁佳欣 冯嘉轩 陈凯楠 姜峰 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2087-2093,2115,共8页

基于昆虫杆状病毒表达系统和新城疫病毒样颗粒载体平台,采用间接免疫荧光、Western blot和透射电镜等方式,构建一种表面展示NDV HN蛋白、FAdV4 Fiber-2蛋白、FAdV-8a Fiber蛋白和FAdV-8b Fiber蛋白的二联三价嵌合型病毒样颗粒(ND-FAdV-4... 基于昆虫杆状病毒表达系统和新城疫病毒样颗粒载体平台,采用间接免疫荧光、Western blot和透射电镜等方式,构建一种表面展示NDV HN蛋白、FAdV4 Fiber-2蛋白、FAdV-8a Fiber蛋白和FAdV-8b Fiber蛋白的二联三价嵌合型病毒样颗粒(ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs)。结果显示,成功构建了表达FAdV-8a Fiber和FAdV-8b Fiber蛋白的重组杆状病毒rBV-c8aFiber和rBV-c8bFiber。此外,ND-FAdV-4/8a/8b cVLPs各组分蛋白均正确表达,是一种约100 nm、具备囊膜和纤突的纳米颗粒,为新城疫、禽腺病毒病的防控提供了一种安全的病毒样颗粒新型疫苗候选株。 展开更多

关键词 新城疫 血清4型和8型禽腺病毒病 昆虫杆状病毒表达系统 嵌合病毒样颗粒

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嵌合NDV-HA病毒样颗粒的制备与鉴定 被引量：3

14

作者 秦岭松 钱晶 +4 位作者 徐小洪 丁佳欣 李金斗 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1237-1242,共6页

新城疫和禽流感是严重危害养禽业的两大动物疫病,其中基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)仍是当前的主要优势流行株。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结... 新城疫和禽流感是严重危害养禽业的两大动物疫病,其中基因Ⅶ型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)仍是当前的主要优势流行株。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白装配而成的空心颗粒,不携带核酸,具有良好的安全性和免疫原性。本试验将AIV HA胞外域与NDV F基因胞内、跨膜域融合构建FcH9融合序列;进一步通过利用昆虫杆状病毒表达系统构建含有FcH9序列的重组杆状病毒rBV-FcH9,与实验室已构建rBV-M和rBV-HN共感染Sf9细胞,收集感染细胞上清,经蔗糖密度梯度离心法纯化嵌合VLPs。血凝血抑试验结果显示嵌合VLPs中HN和HA效价均为28;Western blot分析表明该VLPs可以与特异性阳性血清发生反应;透射电镜观察该VLPs具有典型的病毒粒子结构正,形态大小与野生型NDV相似。结果表明:本试验成功制备了包含有HN和HA蛋白的嵌合VLPs,为研制新型NDV-AIV二联疫苗候选株奠定基础,并为当前新城疫与H9N2亚型禽流感的防控提供策略。 展开更多

关键词 新城疫 禽流感 嵌合病毒样颗粒 疫苗候选株

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人乳头瘤病毒的致癌机理及其疫苗的临床试验研究 被引量：1

15

作者 范江涛 陈心秋 田厚文 《国外医学（病毒学分册）》 2005年第5期133-136,共4页

高危型人乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌的重要原因。诸多类型的HPV疫苗已经进入临床试验。在预防性疫苗中,嵌合型病毒样颗粒(cVLP)取得了不错的效果;在治疗性疫苗中,人们尝试了多肽疫苗,蛋白疫苗,DNA疫苗,病毒载体疫苗和联合免疫等方式,... 高危型人乳头瘤病毒(HPV)是引起宫颈癌的重要原因。诸多类型的HPV疫苗已经进入临床试验。在预防性疫苗中,嵌合型病毒样颗粒(cVLP)取得了不错的效果;在治疗性疫苗中,人们尝试了多肽疫苗,蛋白疫苗,DNA疫苗,病毒载体疫苗和联合免疫等方式,可以检测到所诱发的特异性免疫反应,但临床效果并不满意。无论预防性疫苗还是治疗性疫苗都面临着许多挑战。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 疫苗 临床试验 高危型人乳头瘤病毒 临床试验研究 预防性疫苗 致癌机理 嵌合型病毒样颗粒 特异性免疫反应 治疗性疫苗 病毒载体疫苗 HPV疫苗

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嵌合型口蹄疫病毒样颗粒构建、表达及鉴定 被引量：1

16

作者 刘绒欢 郭慧琛 +3 位作者 杜平 董虎 郭梦楠 孙世琪 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1305-1313,共9页

为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV... 为提高口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)病毒样颗粒(Virus-likeparticles,VLPs)的特异性识别和递呈,为靶向疫苗研究奠定基础,利用反向PCR技术,将卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)第257–264位氨基酸(Amino acids,aa)的短肽嵌入FMDV结构蛋白VP3第171–172位aa或第173–174位aa,通过大肠杆菌表达FMDV结构蛋白VP0、VP1和嵌合型VP3,体外组装得到嵌合OVA257-264肽的病毒样颗粒(VLPOVA)。用动态光散射、透射电镜检测VLPOVA大小和形态,免疫印迹、酶联免疫吸附试验和激光共聚焦显微镜检测短肽的嵌入情况。结果显示在VP3的第173–174位aa嵌入OVA,不影响蛋白表达和VLPs的组装且OVA位于VLPOVA的表面,VLPOVA粒径比VLPs稍大。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 嵌合型病毒样颗粒 OVA257-264 VP3

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人乳头瘤病毒6bL1/16E7嵌合蛋白的基因克隆和表达 被引量：3

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作者 张丽芳 陈韶 +3 位作者 赵孔南 刘文军 刘小凇 Ian Frazer 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期373-376,共4页

目的　研究HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白的基因克隆及其在昆虫细胞的表达 ,为防治尖锐湿疣和宫颈癌的基因工程疫苗研究作准备。方法　用PCR扩增出HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白基因 ,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393,制备重组杆状病毒并感染昆虫... 目的　研究HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白的基因克隆及其在昆虫细胞的表达 ,为防治尖锐湿疣和宫颈癌的基因工程疫苗研究作准备。方法　用PCR扩增出HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白基因 ,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞表达HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白。结果　HPV6bL1/ 16E7嵌合蛋白基因在昆虫细胞中得到了表达 ,并可自组装形成病毒样颗粒。结论　昆虫细胞表达的HPV6bL1/ 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 嵌合病毒样颗粒 基因克隆 基因表达

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HPV16L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究 被引量：2

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作者 栾怡 于修平 +6 位作者 宋长芹 卞继峰 阎世坤 赵蔚明 贾继辉 周亚滨 齐眉 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2002年第4期302-304,共3页

目的 :探讨嵌合性病毒样颗粒HPV1 6L1 E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法 :以本室构建的HPV1 6L1 E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB/c小鼠 ,在初次免疫后 ,分别于第 3、4、5周采血ELISA检测特异性抗体的产... 目的 :探讨嵌合性病毒样颗粒HPV1 6L1 E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法 :以本室构建的HPV1 6L1 E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB/c小鼠 ,在初次免疫后 ,分别于第 3、4、5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV1 6L1蛋白 ,检测特异性DHT反应。在末次免疫 2周后 ,取小鼠脾细胞 ,用HPV 1 6L1 E7蛋白刺激 ,检测T细胞增殖反应及血清IFN γ水平。结果 :HPV1 6L1 E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV1 6L1抗体及特异性DTH反应 ,加强免疫后 ,抗体水平升高 ,两者水平均高于对照组 (P <0 .0 1 )。HPV1 6L1 E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞 ,在特异性HPV1 6L1 E7蛋白抗原刺激下 ,特异性T淋巴细胞明显增殖。被免疫小鼠血清中出现高水平IFN γ。结论 :嵌合病毒样颗粒HPV1 6L1 E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体、HPV1 6L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子 。 展开更多

关键词 人乳头状瘤病毒 嵌合型病毒样颗粒 疫苗 实验动物

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滴鼻接种HPV16 L1-E7 DNA初始引发及HPV16 L1 VLP强化免疫可增强小鼠黏膜和细胞免疫

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作者 栾怡 于修平 +3 位作者 赵蔚明 于瑾 杨宁 唐伟 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2006年第11期1196-1200,共5页

目的探讨HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16L1病毒样颗粒(VLP)强化接种小鼠诱发免疫反应的效应,为进一步用于HPV16相关恶性肿瘤的防治提供实验依据。方法以HPV16 L1-E7嵌合蛋白、HPV16 L1 VLP以及HPV16 L1-E7 DNA单独或联合滴鼻免疫雌... 目的探讨HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16L1病毒样颗粒(VLP)强化接种小鼠诱发免疫反应的效应,为进一步用于HPV16相关恶性肿瘤的防治提供实验依据。方法以HPV16 L1-E7嵌合蛋白、HPV16 L1 VLP以及HPV16 L1-E7 DNA单独或联合滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,连续使用3周。免疫后采血及收集阴道分泌物,检测特异性抗体。在末次免疫2周后,取小鼠脾细胞,用HPV 16 L1-E7蛋白刺激,检测T细胞增殖反应及IFN-γ水平。结果HPV16 L1-E7嵌合蛋白滴鼻接种可诱导小鼠产生血清HPV16 L1特异性IgG,强化免疫后抗体水平明显增高(P<0.01);阴道局部产生HPV16 L1特异性IgA;在HPV16 L1-E7抗原刺激下,脾细胞上清液中IFN-γ水平升高。HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发和HPV16 L1蛋白加强免疫可增高阴道分泌液中HPV16 L1特异性IgA水平,增高脾淋巴细胞中特异性T细胞产生IFN-γ的水平。结论嵌合病毒样颗粒HPV16 L1-E7和HPV16 L1-E7 DNA疫苗初始引发及HPV16 L1蛋白强化滴鼻接种适用于预防HPV原发性黏膜感染和治疗HPV16相关肿瘤。 展开更多

关键词 乳头瘤病毒 人 嵌合型病毒样颗粒 动物实验 DNA初始引发

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HPV16 L1-E7c嵌合基因的重组杆状病毒在昆虫细胞中表达及免疫小鼠的效应研究

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作者 栾怡 于修平 +3 位作者 卞继峰 赵蔚明 周亚滨 于谨 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期390-390,共1页

关键词 昆虫细胞表达 HPV16 重组杆状病毒 效应研究 免疫小鼠 嵌合基因 嵌合型病毒样颗粒 人乳头瘤病毒疫苗 体液免疫应答 疫苗接种

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