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左归降糖舒心方含药血浆对脂多糖诱导巨噬细胞损伤及焦亡的影响
1
作者 杨金伟 周毅 +1 位作者 肖凡 喻嵘 《中药新药与临床药理》 北大核心 2025年第2期206-213,共8页
目的基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对脂多糖(LPS)诱导小鼠J774A.1巨噬细胞损伤及焦亡的作用及机制。方法将分化完全的J774A.1巨噬细胞随机分为空白对照组(10%空白血浆)、模型组(10μg·mL^(-1)LPS+10%空白血... 目的基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对脂多糖(LPS)诱导小鼠J774A.1巨噬细胞损伤及焦亡的作用及机制。方法将分化完全的J774A.1巨噬细胞随机分为空白对照组(10%空白血浆)、模型组(10μg·mL^(-1)LPS+10%空白血浆)、5%中药含药血浆组(10μg·mL^(-1)LPS+5%左归降糖舒心方含药血浆)、10%中药含药血浆组(10μg·mL^(-1)LPS+10%左归降糖舒心方含药血浆)。除空白对照组外,其余各组以10μg·mL^(-1)LPS处理,诱导巨噬细胞炎性损伤及细胞焦亡。按照分组条件干预后,采用ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)含量;免疫荧光法检测细胞中NLRP3、ASC蛋白共表达情况;Western Blot法检测细胞TLR4/NF-κB/NLRP3通路及焦亡相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组J774A.1细胞上清液中的TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量均显著升高(P<0.01);细胞的NLRP3、ASC荧光强度显著增强,蛋白共表达明显上调;TLR4、p-NF-κBp65、NLRP3、GSDMD-N、IL-1β蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,5%、10%中药含药血浆组细胞上清液中的TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量均显著降低(P<0.01);细胞的NLRP3、ASC荧光强度均明显减弱,蛋白共表达明显下调;TLR4、p-NF-κBp65、NLRP3、GSDMD-N、IL-1β蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论左归降糖舒心方含药血浆能够抑制LPS诱导的J774A.1巨噬细胞损伤及炎症反应,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB/NLRP3炎症通路,抑制细胞焦亡及炎症因子表达有关。 展开更多
关键词 左归降糖舒心方含药血浆 J774A.1巨噬细胞 TLR4/NF-κB/NLRP3炎症通路 细胞焦亡 炎症因子
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左归降糖舒心方含药血浆调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制ox-LDL诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的机制 被引量：4
2
作者 杨金伟 喻嵘 +3 位作者 吴勇军 肖凡 刘秀 邓奕辉 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期165-172,共8页
目的基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/Gasdermin D(GSDMD)通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的调控机制。方法将分化完全的J774A.1巨噬细胞分为空... 目的基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/Gasdermin D(GSDMD)通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的调控机制。方法将分化完全的J774A.1巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、MCC950(NLRP3特异性抑制剂)组,每组6个复孔。除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L^(-1)ox-LDL诱导细胞,构建细胞焦亡模型。空白血浆组、模型组、MCC950(50μmol·L^(-1))组以含10%空白血浆进行培养,左归降糖舒心方含药血浆组用10%含药血浆培养细胞24 h。采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;采用LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素(IL)1β、IL-18含量及蛋白表达情况;采用Western Blot法检测NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达。结果与空白血浆组比较,模型组细胞的IL-18、IL-1β含量及LDH释放率明显增高(P<0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞的IL-18、IL-1β含量及LDH释放率明显下降(P<0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论左归降糖舒心方含药血浆能够抑制ox-LDL诱导的J774A.1巨噬细胞焦亡状态及炎性反应,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路,下调细胞炎性因子IL-18、IL-1β表达有关。 展开更多
关键词 左归降糖舒心方含药血浆 J774A.1细胞 细胞焦亡 炎性反应 NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路 IL-18 IL-1β
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左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响 被引量：4
3
作者 杨金伟 赵灿 +2 位作者 刘秀 吴勇军 喻嵘 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期370-375,共6页
目的探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响及其作用机制。方法将巨噬细胞J774A.1随机分为正常组、模型组、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每... 目的探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响及其作用机制。方法将巨噬细胞J774A.1随机分为正常组、模型组、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组5个复孔。除正常组外其余各组以ox-LDL(100 mg/L)处理构建巨噬细胞泡沫化模型。正常组和模型组正常培养,其余各组分别用10%相应含药血浆培养24 h。CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞抑制率;油红O染色检测细胞内脂质蓄积水平;Western blot检测双链RNA样内质网激酶(PEPK)、活化转录因子4(ATF4)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸蛋白酶蛋白-12(Caspase-12)的表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞抑制率增高,在ox-LDL浓度为100 mg/L时细胞抑制率为(50.06±0.09)%,有明显的脂质颗粒蓄积(P<0.01)。与模型组比较,各药物干预组细胞抑制率降低,可有效阻断ox-LDL的摄入及脂质堆积,其中左归降糖舒心方含药血浆组优于西药联合含药血浆组,与TUDCA组作用效应相当。ox-LDL可诱导细胞内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP与Caspase-12表达上调。左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制100 mg/L ox-LDL所致的p-PERK、p-eIF2α、ATF4的上调,降低内质网相关凋亡蛋白CHOP与Caspase-12的表达(P<0.01),和TUDCA组作用相当(P>0.05),其效果较西药联合含药血浆组明显(P<0.01)。结论左归降糖舒心方含药血浆能有效改善ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化、细胞凋亡及内质网应激状态,其作用机制可能与调控内质网应激信号通路PERK/eIF2α/ATF4通路,降低细胞内CHOP与Caspase-12表达有关。 展开更多
关键词 左归降糖舒心方含药血浆 J774A.1细胞 内质网应激 PERK/eIF2α/ATF4通路
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左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导J774A.1巨噬细胞焦亡及凋亡的影响 被引量：2
4
作者 杨金伟 喻嵘 +3 位作者 吴勇军 肖凡 刘秀 邓奕辉 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期332-339,共8页
目的研究左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞焦亡及凋亡状态的影响,探讨该方治疗糖尿病动脉粥样硬化斑块的新靶点。方法 SD大鼠随机分成3组,连续5 d灌胃相应的药物制备含药血浆:空白组(灭菌超纯水)、左归降... 目的研究左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞焦亡及凋亡状态的影响,探讨该方治疗糖尿病动脉粥样硬化斑块的新靶点。方法 SD大鼠随机分成3组,连续5 d灌胃相应的药物制备含药血浆:空白组(灭菌超纯水)、左归降糖舒心方组(25.92 g/kg)、西药联合用药组(二甲双胍0.83 g/kg+阿托伐他汀钙12.45 mg/kg)。应用ox-LDL诱导细胞焦亡及凋亡状态。通过CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞存活率,筛选含药血浆及ox-LDL干预浓度。将分化完全的J774A.1巨噬细胞随机分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组6个复孔。诱导及给药24 h后,LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)蛋白、凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白基因(Bax)蛋白的表达水平。结果含药血浆及空白血浆在浓度为10%水平对细胞增殖无明显抑制作用,作为含药血浆实验干预浓度。ox-LDL在100 mg/L浓度下,可明显降低细胞存活率,故考虑以100 mg/L ox-LDL为诱导细胞焦亡及凋亡的造模浓度。与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低,LDH释放率增高(P<0.01);同时细胞凋亡明显增多(P<0.01);模型组在ox-LDL诱导下,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达上调,促进凋亡相关因子Caspase-3及Bax表达增强(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞存活率增高,LDH释放率及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制ox-LDL所致的NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达水平上调(P<0.01)。而且,左归降糖舒心方含药血浆组阻断ox-LDL引起的焦亡过程细胞膜破坏及凋亡的作用效应优于西药联合含药血浆组(P<0.01)。结论在体外左归降糖舒心方含药血浆可有效维持巨噬细胞正常功能状态,其作用机制可能与调控NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达,抑制细胞内焦亡及凋亡过程有关。 展开更多
关键词 左归降糖舒心方 含药血浆 J774A.1细胞 细胞焦亡 细胞凋亡
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基于UPLC-Q-TOF-MS的左归降糖解郁方体内外成分分析 被引量：7
5
作者 张驰 周思倩 +5 位作者 李金来 邵乐 刘检 赵洪庆 王宇红 龙红萍 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期228-240,共13页
目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对左归降糖解郁方(左归丸化裁)的体外及体内血清化学成分进行快速分析鉴别。方法 采用Agilent ZORB AX Eclipse Plus C_(18)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,质... 目的 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对左归降糖解郁方(左归丸化裁)的体外及体内血清化学成分进行快速分析鉴别。方法 采用Agilent ZORB AX Eclipse Plus C_(18)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,质谱扫描采用正负离子模式,对左归降糖解郁方的提取液、空白血清和含药血清进行分析,结合精确相对分子质量、保留时间、碎片离子、中性丢失等信息鉴定其体内外化学成分。结果 使用Agilent Masshunter Qualitative Analysis工作站结合复方成分数据库,从复方提取物中共鉴别出化合物57个,其中从提取物中首次发现Glycine。从血清样本中共鉴定出入血成分15个。结论 运用UPLC-Q-TOF-MS技术,可对左归降糖解郁方化学成分进行快速且系统地分析鉴定,为左归降糖解郁方的质量控制、临床应用以及更深入的药效作用研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 左归丸 左归降糖解郁方 高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱 成分分析 含药血清 裂解规律
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左归降糖益肾方药含药血浆对足细胞损伤模型miRNA-30d及GPP78表达的影响 被引量：3
6
作者 陈聪 曾婧 +5 位作者 喻嵘 刘慧萍 唐元 罗文娟 张翔 米婷 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期677-681,共5页
目的探讨左归降糖益肾方药含药血浆处理体外培养的小鼠足细胞对miRNA-30d及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的影响。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白血浆组(25mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、模型组(D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 ... 目的探讨左归降糖益肾方药含药血浆处理体外培养的小鼠足细胞对miRNA-30d及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的影响。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白血浆组(25mmol/L葡萄糖,10%空白血浆)、模型组(D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%空白血浆)、中药含药血浆组(D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%中药含药血浆),4-苯基丁酸(4-PBA)含药血浆组(D-葡萄糖50 mmo/L联合棕榈酸2 mmo/L,10%4-PBA含药血浆)。处理48h后,采用Real-time RT-PCR法检测miRNA-30d表达水平;RT-PCR法、Western blot法检测GRP78mRNA或蛋白表达水平的变化。结果与空白组相比,模型组足细胞miRNA-30d表达水平下调、GRP78 mRNA和蛋白的表达水平均上调(P<0.01),且miRNA-30d与GRP78表达水平呈负相关(P<0.05);与模型组相比,中药含药血浆组足细胞miRNA-30d表达水平上调,GRP78 mRNA和蛋白的表达水平均下调,差异均有统计学意义(P<0.01),且在下调miRNA-30d表达水平方面与4-PBA含药血浆组作用相当。结论左归降糖益肾方药含药血浆可以上调miRNA-30d表达水平,下调GRP78 mRNA和蛋白表达水平,从而改善D-葡萄糖联合棕榈酸诱导的足细胞损伤。 展开更多
关键词 足细胞 左归降糖益肾方药 含药血浆 miRNA-30d 葡萄糖调节蛋白78 小鼠
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左归降糖清脂方含药血清对体外肝细胞损伤模型NLRP3信号通路的影响
7
作者 曾广娴 喻嵘 +2 位作者 陈聪 向琴 勾阳阳 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1823-1827,共5页
目的:探讨左归降糖清脂方含药血清对体外肝细胞损伤模型NLRP3信号通路的影响。方法:将BRL肝细胞随机分为正常组、模型组、空白血清组、中药血清组、阳性药物血清组,干预24 h后,油红O染色观察各组肝细胞内脂滴,CCK-8法检测肝细胞的增殖情... 目的:探讨左归降糖清脂方含药血清对体外肝细胞损伤模型NLRP3信号通路的影响。方法:将BRL肝细胞随机分为正常组、模型组、空白血清组、中药血清组、阳性药物血清组,干预24 h后,油红O染色观察各组肝细胞内脂滴,CCK-8法检测肝细胞的增殖情况,常规生化法检测肝细胞上清液生化指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)],ELISA测定肝细胞上清液NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测肝细胞NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达。结果:与模型组比较,中药血清组脂滴蓄积明显减少;肝细胞上清液中ALT、AST、TG、TC含量均显著降低(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、IL-1β含量均显著降低(P<0.01);肝细胞内NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论:左归降糖清脂方含药血清可能通过抑制NLRP3炎症信号通路相关分子活化,改善肝细胞功能,从而发挥保护肝细胞的作用。 展开更多
关键词 体外肝细胞损伤模型 左归降糖清脂方 含药血清 NLRP3信号通路 机制 2型糖尿病 非酒精性脂肪性肝病
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