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P19细胞体外DM SO诱导向心肌样细胞分化 被引量:5
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作者 李秀华 张雷 +2 位作者 王海萍 赵春芳 尹青 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第2期129-132,共4页
目的:体外诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化.方法:P19细胞经复苏、传代,在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化,分化细胞经HE染色及心肌标志物转录因子(GATA-4),连接蛋白43(connecxin43),α-肌节型肌动蛋白(α-sarcomeric actin)... 目的:体外诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化.方法:P19细胞经复苏、传代,在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化,分化细胞经HE染色及心肌标志物转录因子(GATA-4),连接蛋白43(connecxin43),α-肌节型肌动蛋白(α-sarcomeric actin)的免疫细胞化学染色后,在光镜、倒置显微镜下观察细胞形态学变化,透射电镜下观察细胞超微结构变化.结果:经DMSO诱导分化后4 d有细胞聚集体形成,6 d有部分细胞GATA-4和connecxin43呈阳性表达,GATA-4阳性表达位于细胞核和细胞质,connecxin43阳性表达呈斑点状分布于心肌细胞胞质内和细胞膜表面.10 d时GA-TA-4和connecxin43阳性表达明显增加,并有部分细胞呈α-sarcomeric actin阳性,阳性表达位于细胞质.电镜观察,未分化细胞为圆形或椭圆形,细胞间连接松散,细胞质较少,细胞器不发达;诱导后6 d,细胞间出现紧密连接和中间连接,细胞质增多,部分细胞表面出现突起,突起内可见微丝.诱导后10d,线粒体、粗面内质网、滑面内质网、高尔基体丰富,并有中心粒形成.结论:P19细胞在DMSO诱导下已有向心肌分化趋向,有类似胚胎心肌细胞形成. 展开更多
关键词 P19细胞 细胞 细胞分化 细胞移植 心肌样细胞分化
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骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究进展 被引量:1
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作者 孙玉河 方五旺 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第19期3612-3613,共2页
近年来,人们在动物试验中发现移植心肌梗死区的骨髓干细胞可以定向分化为具有正常生理功能的心肌细胞并可促进新生血管形成,最终达到修复坏死心肌,改善受损的心脏功能[1]。因此干细胞体外扩增及向心肌化条件分化后植入受损心肌处,
关键词 心肌样细胞分化 骨髓间充质干细胞 细胞体外扩增 新生血管形成 正常生理功能 骨髓干细胞 心肌细胞 定向分化
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低氧刺激通过HIF-1α直接调节Myocardin表达促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化 被引量:2
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作者 哈艳平 刘晓晓 +5 位作者 邵钟铭 邹园 伍彩霞 郭峻莉 申志华 揭伟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1038-1043,共6页
目的探讨低氧刺激在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)向心肌细胞谱系分化过程中对心肌素(Myocardin)表达的影响及机制。方法分离Sprague Dawley大鼠股骨BMSC,磁激活细胞分选法获得c-Kit^(+)细胞亚群。分别用H... 目的探讨低氧刺激在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)向心肌细胞谱系分化过程中对心肌素(Myocardin)表达的影响及机制。方法分离Sprague Dawley大鼠股骨BMSC,磁激活细胞分选法获得c-Kit^(+)细胞亚群。分别用HIF-1α过表达慢病毒感染或物理性低氧(2%O2)刺激c-Kit^(+)BMSC,定量RT-PCR检测HIF-1α、Myocardin和心肌细胞分化基因(Nkx2.5、cTnT)的mRNA水平,免疫荧光检测Myocardin和cTnT蛋白表达,双荧光素酶报告基因法检测HIF-1α对Myocardin启动子活性的影响。结果HIF-1α过表达慢病毒感染和物理性低氧刺激均诱导c-Kit^(+)BMSC中Myocardin和心肌细胞分化标志基因Nkx2.5、cTnT的表达水平明显增高。shRNA抑制Myocardin后一定程度上减弱低氧诱导的c-Kit^(+)BMSC心肌细胞样分化。HIF-1α可直接上调Myocardin启动子活性。结论低氧刺激可通过HIF-1α直接上调Myocardin表达,进而促进c-Kit^(+)BMSC向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞分化 低氧 HIF-1Α MYOCARDIN
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巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及向心肌样细胞分化的影响
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作者 吴瑶 冯国清 胡香杰 《中国药理通讯》 2009年第2期42-43,共2页
目的:研究巴戟天寡糖(Morinda officinalis How oligosaccha rides,MOO)诱导成肌细胞增殖、分化的机制并观察其是否可诱导心肌细胞标志物的表达,为临床探索运用心脏组织工程学治疗心肌梗死提供更有效的依据。方法:采用出生1~3d... 目的:研究巴戟天寡糖(Morinda officinalis How oligosaccha rides,MOO)诱导成肌细胞增殖、分化的机制并观察其是否可诱导心肌细胞标志物的表达,为临床探索运用心脏组织工程学治疗心肌梗死提供更有效的依据。方法:采用出生1~3d的SD大鼠乳离体差速贴壁法纯化培养双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法,用24h后的原代成肌细胞进行试验。实验分5组:空白对照组、5-氮杂胞苷(10μmol/ml)阳性药对照组、MOO各剂量(100gg/ml、300gg/ml、500μg/m1)组。分别检测以下指标:(1)观察加药前后成肌细胞形态学改变。(2)Desmin(结蛋白)鉴定。(3)加药前后成肌细胞对异丙肾上腺素(Isoprenaline,IP)的反应。(4)采用RT-PCR法检测成肌细胞中TGF-β1、GATA-4mRNA的表达。结果:(1)与空白对照组相比,MOO诱导48h后成肌细胞生长密集,胞浆丰富,增殖明显,具有较好的折光性。并呈一定方向性的长轴平行排列,细胞融合的肌管增多,分化良好,有明显自发性搏动的收缩现象,生长状态明显好于空白对照组。(2)与空白对照组相比,IP对阳性药对照组和MOO小剂量组成肌细胞正性变时作用不明显(P〉0.05);而IP对MOO中剂量组和大剂量组成肌细胞正性变时作用显著(P〈0.05)。 展开更多
关键词 心肌样细胞分化 成肌细胞增殖 巴戟天寡糖 PCR法检测 心脏组织工程学 骨骼肌成肌细胞 细胞形态学改变 对异丙肾上腺素
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小鼠骨髓间充质干细胞亚群向心肌样细胞分化的研究
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作者 贺继刚 李洪荣 +3 位作者 桂龙升 李永武 严丹 王平 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2307-2307,共1页
心脏干/祖细胞(CSC/CPCs)在心肌中含量很少,只占1%,有多个亚群,目前报道6个亚群[1],包括侧群(SP)细胞、c-KIT阳性祖细胞、干细胞抗原-1(SCA-1)阳性祖细胞、胰岛素样受体-1(ISL-1)阳性祖细胞、特异表面抗原-1(SSEA-1)阳性祖... 心脏干/祖细胞(CSC/CPCs)在心肌中含量很少,只占1%,有多个亚群,目前报道6个亚群[1],包括侧群(SP)细胞、c-KIT阳性祖细胞、干细胞抗原-1(SCA-1)阳性祖细胞、胰岛素样受体-1(ISL-1)阳性祖细胞、特异表面抗原-1(SSEA-1)阳性祖细胞和心肌球来源祖细胞(CS).实验通过CSCs 6个亚群抗原标志,对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)进行分选.结果以CD45及CD31为标准可以得到4组BMSC亚群:SCA-1+/45-/31+、SCA-1+/45 +/31-、SCA-1+/45+/31+、SCA-1 +/45-/31-.各亚群和心肌细胞共培养,其中SCA-1+/CD45 +/CD31+和心肌细胞共培养后更易表达出心肌细胞标志性分子α-肌动蛋白(α-actin)、连接蛋白43(Cx43)、肌间线蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnI).我们采用芯片技术完成Agilent小鼠全基因4*44K芯片从分子水平对上述现象进行探讨. 展开更多
关键词 心肌样细胞分化 骨髓间充质干细胞 细胞亚群 小鼠 干/祖细胞 Α-肌动蛋白 细胞抗原 细胞共培养
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体外培养人羊膜上皮细胞的表型及分化能力 被引量:2
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作者 连建春 刘洋 +6 位作者 刘畅 吕世杰 郭昕 南丰 孙广炜 贺欣 马小军 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第2期211-217,共7页
背景:人羊膜上皮细胞具有多系分化能力,是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察,而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。目的:分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞... 背景:人羊膜上皮细胞具有多系分化能力,是再生医学中重要的细胞来源。目前的研究多集中于对其分化能力的考察,而体外培养过程中羊膜上皮细胞的生物学特征如何变化尚不清楚。目的:分析体外培养对人羊膜上皮细胞生长、表型及向心肌样细胞分化的能力等生物学特性的影响,探讨原代人羊膜上皮细胞干性标志物SSEA-4的表达水平与人羊膜上皮细胞生物学特性变化之间的关联性。方法:使用统一分离方法获得原代羊膜上皮细胞并进行体外培养。利用CCK-8、流式细胞仪及real-time PCR等手段检测不同培养阶段人羊膜上皮细胞的增殖、表型以及向心肌样细胞分化的能力。结果与结论:不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达在26.7%-97%,存在很大的个体差异。并且,随着传代次数的增加,人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平显著降低,其下降程度与原代SSEA-4的表达水平无关。另外,培养后人羊膜上皮细胞的心肌分化潜能也存在很大个体差异,且其差异与原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平的高低无关。结果提示,不同胎儿样本来源的原代人羊膜上皮细胞的SSEA-4表达水平受到个体差异的影响,需要建立更准确的临床样本筛选指标来稳定获得原代高表达SSEA-4的胎儿样本,以实现对人羊膜上皮细胞的质量监控。另外,体外培养过程中SSEA-4的表达水平受到培养条件的影响,需要继续优化培养条件以维持其高表达。此外,人羊膜上皮细胞向心肌样细胞分化的能力受到样本个体差异以及培养条件的影响,在今后还需要进一步研究。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 羊膜上皮细胞 体外培养 SSEA-4 羊膜上皮细胞标志物 心肌样细胞分化 国家自然科学基金
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巴戟天寡糖对转化生长因子β信号传导的影响
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作者 焦平利 冯国清 胡香杰 《中国药理通讯》 2009年第2期39-40,共2页
目的:细胞移植技术的探索,为急性心肌梗死患者坏死区的心肌细胞重建及衰竭心脏的功能恢复,可能是-种极具前途的临床治疗手段。我们前期的研究初步证实巴戟天寡糖(Morinda officinalis How oligosaccha rides,MOO)具有明显促进成... 目的:细胞移植技术的探索,为急性心肌梗死患者坏死区的心肌细胞重建及衰竭心脏的功能恢复,可能是-种极具前途的临床治疗手段。我们前期的研究初步证实巴戟天寡糖(Morinda officinalis How oligosaccha rides,MOO)具有明显促进成肌细胞的增殖和分化的作用保护心脏作用的研究。方法:采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法,以5-氮杂2’-脱氧胞苷(5-Aza—dc)为阳性药对照组、并设立MOO中剂量+5-Aza—dc联合用药组,应用免疫组化、蛋白免疫痕迹技术进-步观察了MOO促成肌细胞向心肌样细胞分化时对TGF-β2受体及信号传导的影响。结果:(1)与空白对照组相比,各组TGF-β2表达水平均上调,差异显著(P〈0.05);与阳性对照组相比,MOO各剂量组TGF—β2表达水平随剂量增加而增强,联合用药组TGF-β2表达水平显著高于阳性对照组(P〈0.05)。(2)与空白对照组相比,各用药组Smad4表达水平均显著上调(P〈0.05),各用药组间Smad4表达水平无明显差异。(3)与空白对照组相比,MOO小剂量组及联合用药组Smad2/3表达轻微上调、MOO中、大剂量组及阳性组均下调Smad2/3的表达。(4)与空白对照组相比,各组Smad7的表达差异显著(P〈0.05),其中MOO小剂量组、阳性组和联合组均抑制Smad7表达,MOO中、大剂量组逐渐增强Smad7的表达。结论:(1)MOO可促进TGF-β2的表达,并随着剂量的增加表达增强。 展开更多
关键词 巴戟天寡糖 信号传导 转化生长因子Β 骨骼肌成肌细胞 TGF-Β2 心肌样细胞分化 SMAD4表达 Smad2/3
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