期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到122篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究 被引量：43
1
作者 李瑞芳 薛雯雯 +2 位作者 黄亮 熊前程 王彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期227-230,共4页
为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质... 为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 感受态细胞 质粒转化方法
在线阅读 下载PDF
酿酒酵母感受态细胞的低温保存及酵母菌落PCR-快速筛选鉴定 被引量：29
2
作者 叶玲 刘建伟 刘静 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期956-959,共4页
异源蛋白在酵母中的表达涉及到大量重组子的筛选鉴定 .以直接煮沸 2～ 5min后的酵母菌落水悬浮液为模板 ,建立了酵母克隆的PCR快速筛选方法 .介绍了PCR反应中减少引物二聚体、提高反应特异性及
关键词 PCR筛选 转化 酿酒酵母 感受态细胞 低温保存
在线阅读 下载PDF
感受态细胞制备与保存方法的比较研究 被引量：26
3
作者 罗婵 汤刚彬 +1 位作者 谢体三 石德顺 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期52-54,共3页
目的 :确立一个能制备高转化率感受态细胞并长期维持其感受性的实验方案。方法 :比较CaCl2 法、TSS法、超高效法制备感受态细胞的效果 ,选用三者中较好的方法进一步探讨不同生长期 (OD值 0 .2～ 1.1)的细菌对制备感受态细胞的影响 ,并... 目的 :确立一个能制备高转化率感受态细胞并长期维持其感受性的实验方案。方法 :比较CaCl2 法、TSS法、超高效法制备感受态细胞的效果 ,选用三者中较好的方法进一步探讨不同生长期 (OD值 0 .2～ 1.1)的细菌对制备感受态细胞的影响 ,并分别比较了不同冷冻保护剂 (7%DMSO ,10 %甘油 )于 - 2 0℃、- 80℃冰箱保存感受态细胞的效果。结果 :三种方法获得的感受态细胞转化率差异极显著 (P <0 .0 1)。采用超高效法 ,OD值为 0 .36 (或 0 .5 8)时收集菌体可获得 1.1× 10 8的高转化率的感受态细胞 ,以 7%的DMSO为冷冻保护剂保存感受态细胞可维持 10 7以上的转化率 4 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法 转化率 保存
在线阅读 下载PDF
根癌农杆菌感受态细胞的制备以及质粒ProkⅡ对其转化的研究 被引量：13
4
作者 朱锦辉 权军利 +5 位作者 何玉科 陈耀锋 郭东伟 李春莲 曹团武 曹新有 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2006年第7期91-95,共5页
研究了根癌农杆菌LBA4404和C48C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒ProkⅡ转化的影响。结果表明，以70mmo／LCaCl2作为转化溶液，YEB培养基制备的、OD... 研究了根癌农杆菌LBA4404和C48C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒ProkⅡ转化的影响。结果表明，以70mmo／LCaCl2作为转化溶液，YEB培养基制备的、OD600为0．5的LBA4404感受态细胞与10ng质粒DNA，于0℃共放置30min，液氮速冻5min，37℃热激5min时转化率最高，达1．40×10^5μg^-1；以70mmo／LCaCl2作为转化溶液，YEB培养基制备的、OD600s为0．5～0．6的C58C1感受态细胞与20ng质粒DNA，于0℃共放置10min，液氮速冻1min，37℃热激1min时转化率最高，达1．33×10^5μg^-1。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 感受态细胞 质粒ProkⅡ 转化率
在线阅读 下载PDF
制备高效大肠杆菌电转化感受态细胞和电转化条件的研究 被引量：13
5
作者 朱森康 黄磊 +2 位作者 李燕飞 钟卫鸿 徐志南 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期206-209,共4页
旨在建立一种高效大肠杆菌电转化感受态细胞的制备方法,研究了摇瓶装液量,菌体生长阶段,转化电场强度,转化后复苏时间以及感受态细胞存放时间等对转化效率的影响。结果表明,装液量为400 mL/2 L,菌体在OD600值为0.452时收集所制备的感受... 旨在建立一种高效大肠杆菌电转化感受态细胞的制备方法,研究了摇瓶装液量,菌体生长阶段,转化电场强度,转化后复苏时间以及感受态细胞存放时间等对转化效率的影响。结果表明,装液量为400 mL/2 L,菌体在OD600值为0.452时收集所制备的感受态细胞,在电场强度12.5 kV/cm条件下电击5 ms,转化后复苏时间2 h,转化效率可达到1010CFU/μg DNA。此条件下制备的感受态细胞转化效率高,质量稳定,重复性好。 展开更多
关键词 大肠杆菌 电转化 感受态细胞 转化效率
在线阅读 下载PDF
感受态细胞的制备 被引量：7
6
作者 熊江霞 陈厚早 +7 位作者 朱华庆 王雪 张素梅 储兵 卜丽佳 周青 桂淑玉 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第3期244-246,共3页
关键词 感受态细胞 制备 生物转化 基因重组
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌感受态细胞保存条件的研究 被引量：8
7
作者 唐颜苹 王小媚 +1 位作者 何薇 李晓华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期745-748,共4页
研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响。结果表明:在4℃-、40℃、-70℃条件下,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势,转化效率在第1天或第7天达到最大值,此后随保存时间增加而呈下降趋... 研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响。结果表明:在4℃-、40℃、-70℃条件下,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势,转化效率在第1天或第7天达到最大值,此后随保存时间增加而呈下降趋势;在保存前期,保存于4℃的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于保存在-70℃、-40℃的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,在保存后期低于保存在-70℃、-40℃的大肠杆菌感受态细胞的转化效率;在相同保存温度和保存时间下,保存在甘油的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于保存在DMSO的大肠杆菌感受态细胞的转化效率。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 保存 转化效率
在线阅读 下载PDF
地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法 被引量：10
8
作者 唐雪明 邵蔚蓝 +2 位作者 王正祥 方惠英 诸葛健 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第5期460-463,共4页
通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进... 通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 . 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 感受态细胞 诱导形成 高效电转化方法 分泌型表达载体
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素 被引量：28
9
作者 张岚岚 徐春燕 徐昌杰 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期429-432,共4页
探讨了大肠杆菌菌株、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和纯度对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A600为0.55的TG1制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化... 探讨了大肠杆菌菌株、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和纯度对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A600为0.55的TG1制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化率最高,可达2×106-4×107cfu/μg DNA(pUC19)。随着质粒长度增加和纯度降低,转化率有所下降。若感受态细胞要保存备用,以15％甘油为抗冻剂优于7％DMSO,但添加抗冻剂对转化率有抑制作用。贮于甘油的感受态细胞在-70℃冻存两个月后仍有较理想的转化率。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化能力 菌株
在线阅读 下载PDF
温度对大肠杆菌感受态细胞的影响 被引量：9
10
作者 柯涛 张勇法 +1 位作者 潘园园 马向东 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期57-60,共4页
在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出... 在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出现高峰期不同.其中,18℃和25℃,出现于对数期早期,而30℃和37℃则出现于对数期中后期.在25℃条件下转化效率最高.感受态细胞在4种不同温度条件下保存,受活菌数和感受态2种因素的影响程度都不同.转化效率在前期都有不同程度的提高,液氮条件下保存感受态细胞时间最长. 展开更多
关键词 自然感受态 人工感受态 温度 大肠杆攻 感受态细胞
在线阅读 下载PDF
电转化法制备高转化效率的E．coli感受态细胞研究 被引量：6
11
作者 李欣 杨坤宁 +1 位作者 刘志勇 陈红兵 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期48-51,共4页
为了制备高转化效率的E．coliTG1和E．coliDH5a感受态细胞，采用电转化方法探索E．coli生长对数期的不同生长阶段、质粒DNA含量、电场强度对E．coli转化效率的影响。研究结果表明：40μL菌液中加1．0ngpUC19DNA，用间隙0．2cm电击杯时... 为了制备高转化效率的E．coliTG1和E．coliDH5a感受态细胞，采用电转化方法探索E．coli生长对数期的不同生长阶段、质粒DNA含量、电场强度对E．coli转化效率的影响。研究结果表明：40μL菌液中加1．0ngpUC19DNA，用间隙0．2cm电击杯时转化效率最高，E．coli TG1有1个电转化效率峰值，即A600为0．665时，转化效率达1．7×10^9cfu／μg pUC19DNA；E．coliDH5a有2个转化效率峰值，即A600为0．443和0．810时，转化效率均为3．0×10^9 cfu／μg pUCl9DNA。研究结果表明，在相同情况下E．coliDH5a的转化效率高于E．coli TG1，利用本实验确定的参数可制备出高转化效率的电转化感受态细胞。 展开更多
关键词 大肠杆菌 电转化 感受态细胞
在线阅读 下载PDF
质粒pBV220-PTD-tCNTF转化BL21菌株感受态细胞的高效制备方法 被引量：3
12
作者 吴行伟 刘泽源 +7 位作者 李前 蒲韵竹 任汝通 许秀丽 刘霏霏 张琴 吴媛 曲恒燕 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期584-587,共4页
目的比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合。方法采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法制备的感受态细胞即时和-8... 目的比较几种常用大肠杆菌感受态制备方法,探讨影响pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态细胞的因素并得出最优水平组合。方法采用4种制备感受态细胞的方法即CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法和INOUE法,比较4种方法制备的感受态细胞即时和-80℃保存30 d对质粒PBV220-PTD-tCNTF的转化效率;L8(27)正交设计研究Mg2+、INOUE重悬液、PEG、甘油和DMSO对pBV220-PTD-tCNTF转化大肠杆菌感受态的影响;对得出的最佳水平组合进行验证并对转化好的细胞进行测序验证。结果 CaCl2法,CaCl2-甘油法,TSSG法,INOUE法4种方法的转化率分别为:(5.43±0.72)×106、(7.45±0.65)×106、(9.71±1.81)×106、(8.52±1.22)×107;-80℃保存30 d的转化效率为:(6.20±0.31)×104、(6.57±0.97)×106、(9.76±1.31)×106、(1.63±0.019)×106;正交结果 Mg2+(A)、IN-OUE重悬液(B)、PEG(C)、甘油(D)和DMSO(E)各因素的P值分别为0.0357、0.0154、0.0677、0.2503和0.1749;最佳水平组合实施的转化率为(29.63±4.95)×107并经测序确定转入质粒的正确性。结论分析出各因素对pBV220-PTD-tCNTF转化感受态细胞转化率的影响程度,得出了其最佳水平组合A1B1C1D2E1,并得到了(29.63±4.95)×107的转化效率。 展开更多
关键词 感受态细胞 大肠杆菌 正交设计 转化效率 制备 PBV220 CNTF
在线阅读 下载PDF
少量制备大肠杆菌感受态细胞条件探索 被引量：10
13
作者 李代宗 赵晓瑜 +1 位作者 倪志华 张玉明 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第6期55-57,共3页
目的：为了获得重复性好、转化率高的少量制备感受态细胞的方法，利用不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，进行转化比较。方法：根据普通实验室的实验条件，常规方法提取质粒，氯化钙法转化不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，比较转化... 目的：为了获得重复性好、转化率高的少量制备感受态细胞的方法，利用不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，进行转化比较。方法：根据普通实验室的实验条件，常规方法提取质粒，氯化钙法转化不同生长时期的大肠杆菌感受态细胞，比较转化率。结果：大肠杆菌感受态细胞的转化率与0D值显著相关，在OD600nm为0.39和0.55时转化率最高，在OD600nm为0.28．0.55之间均可得到理想的转化效果。结论：少量制备感受态细胞方法操作中无需添加任何保护试剂和细胞复苏培养，操作简便、重复性好，实验成本低廉。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌最佳感受态细胞制备的探讨 被引量：11
14
作者 李路怡 易建华 李敏 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第3期194-198,共5页
本文对４种大肠杆菌菌株在不同生长时期的转化效率分别进行了测定．结果表明，在细菌的生长繁殖过程中，其转化效率是有很大变化的．对于不同的菌株，它们获得高转化率时的活菌数不同．同时，得到了这４种大肠杆菌菌株制备最佳感受态细... 本文对４种大肠杆菌菌株在不同生长时期的转化效率分别进行了测定．结果表明，在细菌的生长繁殖过程中，其转化效率是有很大变化的．对于不同的菌株，它们获得高转化率时的活菌数不同．同时，得到了这４种大肠杆菌菌株制备最佳感受态细胞的条件． 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化率
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌HB101感受态细胞的显微观察与分析 被引量：3
15
作者 谢志雄 陈向东 +2 位作者 李文化 沈 萍 庞代文 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期253-256,共4页
对数生长前期的大肠杆菌在生理盐水中用CaCl2可以直接诱导建立感受态并完成转化过程.利用H-8100透射电子显微镜观察用CaCl2直接在生理盐水中诱导建立感受态的大肠杆菌细胞,发现感受态细胞整体电子密度趋于均匀,但存在有电子密度较高颗粒... 对数生长前期的大肠杆菌在生理盐水中用CaCl2可以直接诱导建立感受态并完成转化过程.利用H-8100透射电子显微镜观察用CaCl2直接在生理盐水中诱导建立感受态的大肠杆菌细胞,发现感受态细胞整体电子密度趋于均匀,但存在有电子密度较高颗粒,表明大肠杆菌感受态建立过程中,细胞整体对电子通透性增强,可能存在涉及细胞膜通透性的复合物重新形成相关的胞内物质代谢及其在细胞内定位的受控改变,暗示大肠杆菌可能具有建立自然感受态的能力. 展开更多
关键词 大肠杆菌 HB101 感受态细胞 显微观察 透射电子显微镜 电子密度 电子通透性 膜通透性
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌高效感受态细胞的制备及快捷转化体系的建立 被引量：15
16
作者 杨坤 巩振辉 李大伟 《北方园艺》 CAS 北大核心 2010年第14期127-130,共4页
比较了不同方法制备的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,并优化了质粒DNA转化感受态细胞体系。结果表明:高效法制备的感受态细胞转化效率极显著高于普通法制备感受态细胞的转化效率,其效率提高了966.1%,而高效法感受态细胞转化效率与商品... 比较了不同方法制备的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,并优化了质粒DNA转化感受态细胞体系。结果表明:高效法制备的感受态细胞转化效率极显著高于普通法制备感受态细胞的转化效率,其效率提高了966.1%,而高效法感受态细胞转化效率与商品化的感受态细胞转化效率差异不显著。-80℃超低温长期保存时,相比较于15%甘油,以7%DMSO为冻存保护剂保存的感受态细胞其转化效率达到1.1×107,较15%甘油冻存保护剂保存的转化效率提高了69%。温浴5 min,冰浴10 min时,其转化效率最高,达到4.95×107。应用高效法制备的感受态细胞转化不同大小质粒的效率极显著高于普通大肠杆菌感受态细胞,其转化效率较普通大肠杆菌感受态细胞的提高了550%,而转化时间缩短至普通大肠杆菌感受态细胞的12.5%,仅为15min。 展开更多
关键词 高效法 感受态细胞制备 质粒DNA 转化效率
在线阅读 下载PDF
氯化铷法制备感受态细胞 被引量：9
17
作者 李振宇 徐开林 +3 位作者 潘秀英 鹿群先 陈香梅 何徐彭 《徐州医学院学报》 CAS 2004年第4期315-316,共2页
目的　研究氯化铷法制备感受态细胞的转化效率和不同条件对其的影响。方法　采用氯化铷法制备感受态细胞 ,用不同的质粒进行转化。分析不同菌种、冻存时间对转化效率的影响 ,并与通常所使用的氯化钙法进行转化效率的比较。结果　氯化铷... 目的　研究氯化铷法制备感受态细胞的转化效率和不同条件对其的影响。方法　采用氯化铷法制备感受态细胞 ,用不同的质粒进行转化。分析不同菌种、冻存时间对转化效率的影响 ,并与通常所使用的氯化钙法进行转化效率的比较。结果　氯化铷法制备感受态细胞可用于不同的质粒的转化 ,对于同一种质粒 ,不同的菌种和冻存时间对转化效率无影响 ,其转化效率高于氯化钙法。结论　氯化铷法制备感受态细胞是一种可以长期保存而不影响转化效率的方法。 展开更多
关键词 氯化铷 感受态细胞 质粒 分子克隆技术 分子生物学 制备方法 转化效率
在线阅读 下载PDF
一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化 被引量：6
18
作者 张迹 李智 +1 位作者 张宇 袁巧云 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期529-532,共4页
大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法... 大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 展开更多
关键词 感受态细胞制备 一步法 大肠杆菌BL21(DE3)菌株 转化条件
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌感受态细胞培养与冻存条件的研究 被引量：12
19
作者 万波 郑莉 程书秋 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期234-236,共3页
测定大肠杆菌JM107在37℃培养条件下的生长曲线，制备其对数生长期不同阶段感受态冻存细胞，并对冻存细胞的转化率进行研究。结果显示：分离良好的单个新鲜菌落接种于50mlSOB培养基，经37℃，170～180r/min振荡培养210min左右，所得冻... 测定大肠杆菌JM107在37℃培养条件下的生长曲线，制备其对数生长期不同阶段感受态冻存细胞，并对冻存细胞的转化率进行研究。结果显示：分离良好的单个新鲜菌落接种于50mlSOB培养基，经37℃，170～180r/min振荡培养210min左右，所得冻存细胞转化率最高，－7O℃保存时可达5．2×107转化子／μgDNA且感受态保持时间长，即使存放两个月仍能保持相当高的转化率。－20℃保存时也能在三周内保持较高转化率。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 冻存 细胞培养
在线阅读 下载PDF
简单高效的感受态细胞制备和质粒转化体系的建立 被引量：6
20
作者 刘卫今 蒋勇 完迪迪 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2745-2746,共2页
[目的]建立重复性好的感受态细胞的快速制备方法和质粒转化方法。[方法]采用改进的氯化钙法制备感受态细胞后,将带有目标片段的质粒转入感受态细胞,使工程菌DH5α转化成具有抗氨苄青霉素的大肠杆菌,接种于添加氨苄青霉素的LB培养基上,... [目的]建立重复性好的感受态细胞的快速制备方法和质粒转化方法。[方法]采用改进的氯化钙法制备感受态细胞后,将带有目标片段的质粒转入感受态细胞,使工程菌DH5α转化成具有抗氨苄青霉素的大肠杆菌,接种于添加氨苄青霉素的LB培养基上,并通过蓝白斑筛选和菌落PCR进行检测。[结果]制备的感受态细菌在不加Amp的LB平板上能较好生长,表明感受态细菌具有较强活性。感受态细菌在添加Amp的平板上不能生长,表明感受态细菌未被杂菌污染。转化后获得白色菌落1 410个,转化率为1.41×105cfu/μg。菌落PCR表明获得的白色菌斑为带有目标片段的阳性菌斑。[结论]该方法十分简便,是一种适于实验室操作的高效感受态细胞的制备方法。 展开更多
关键词 高效 感受态细胞制备 质粒转化 体系
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部