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低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响 被引量:1
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作者 李莉芬 韩俊力 江龙 《口腔疾病防治》 2024年第1期22-28,共7页
目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/... 目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。 展开更多
关键词 人牙髓细胞 氟化钠 增殖 成骨/成牙本质分化 内质网应激 剪切X盒结合蛋白1 活化转录因子4 葡萄糖调节蛋白78 蛋白激酶样内质网激酶 真核起始因子⁃2α
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LED红光上调MAPK信号促进炎性环境中人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化 被引量:3
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作者 刘源 惠以宁 +2 位作者 姜冰 郑艮子 王瑶 《口腔疾病防治》 2023年第10期701-711,共11页
目的探讨发光二极管(light-emitting diode,LED)红光对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨/成牙本质分化的影响及机制。方法本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准。组织块酶消化法培养hDPSCs,在0、1、5、10μg/m... 目的探讨发光二极管(light-emitting diode,LED)红光对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨/成牙本质分化的影响及机制。方法本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准。组织块酶消化法培养hDPSCs,在0、1、5、10μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下,CCK-8法检测hDPSCs增殖,筛选LPS刺激浓度。设置CG组(矿化诱导)、LPS+CG组、LPS+CG+LED光照组(能量分别为2、4、6、8、10 J/cm^(2))。第7天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定,实时荧光定量PCR检测ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialo-phosphoprotein,DSPP)基因表达情况,第21天进行茜素红染色及钙结节定量分析,筛选最佳光照能量。设置LPS+CG组、LPS+CG+LED组(最佳能量),ELISA法检测第1、3、5、7天肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β(interlenkin-1β,IL-1β)表达量。Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38、细胞外调节蛋白激酶5(extracellular regulated protein kinases 5,ERK5)及磷酸化蛋白表达。分别阻断ERK1/2、JNK、ERK5、p38通路后,Western blot法检测第7天ALP、OSX、DMP-1、DSPP蛋白表达。结果CCK-8结果显示10μg/mL LPS诱导下,在第5、7天hDPSCs增殖低于0、1、5μg/mL LPS组(P<0.05),后续选择10μg/mL作为LPS刺激浓度。ALP染色及活性,ALP、OSX、DMP-1、DSPP的基因表达水平及钙结节定量结果示LPS+CG+4 J/cm^(2)组均高于其他处理组(P<0.05)。4 J/cmLED红光上调MAPK信号促进炎性环境中人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化LED红光促成骨/成牙本质分化能力最强,作为后续实验光照能量。ELISA结果显示第5、7天,LPS+CG+LED组的TNF-α与IL-1β的分泌表达量低于LPS+CG组(P<0.05)。Western blot结果显示4 J/cm^(2) LED红光促进p-ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-ERK5蛋白表达;分别阻断通路后,LPS+CG+LED+U0126(抑制ERK1/2)、SP600125(抑制JNK)、BIX02189(抑制ERK5)组ALP、OSX、DMP-1、DSPP蛋白表达量低于LPS+CG+LED组(P<0.001),LPS+CG+LED+SB203580(抑制p38)组ALP、OSX、DMP-1蛋白表达量与LPS+CG+LED组比较无显著差异(P>0.05)。结论LED红光促进炎症环境下hDPSCs成骨/成牙本质分化,其作用机制可能为通过上调ERK1/2、JNK、ERK5信号减少炎症因子TNF-α与IL-1β释放有关。 展开更多
关键词 人牙髓干细胞 脂多糖 炎性环境 发光二极管 红光 成骨/成牙本质分化 MAPK信号通路 细胞特异性转录因子 本质基质蛋白-1 本质涎磷蛋白
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BMP9经Smad信号通路调控iSCAP成骨/成牙本质分化 被引量:1
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作者 陈冰 孔令姣 +3 位作者 雷金霞 沈露 张彩 王金华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期16-22,共7页
目的:研究BMP9是否能够激活i SCAP细胞中的Smad信号通路,以及Smad信号通路在BMP9诱导i SCAP细胞成骨/成牙本质向分化过程中的作用。方法:首先,采用Western印迹实验检测Ad-BMP9转染i SCAP后Smad1/5/8蛋白的磷酸化水平。随后,利用dn ALK1... 目的:研究BMP9是否能够激活i SCAP细胞中的Smad信号通路,以及Smad信号通路在BMP9诱导i SCAP细胞成骨/成牙本质向分化过程中的作用。方法:首先,采用Western印迹实验检测Ad-BMP9转染i SCAP后Smad1/5/8蛋白的磷酸化水平。随后,利用dn ALK1重组腺病毒和BMP9条件培养基作用于i SCAP,Western印迹实验检测Smad1/5/8蛋白磷酸化水平;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和染色方法分析早期成骨/成牙本质指标变化,茜素红染色法检测钙盐沉积程度;RT-PCR成骨/成牙本质相关基因Runx2、OCN、OPN和DMP1表达的影响。结果:BMP9可上调i SCAP中Smad1/5/8的磷酸化水平;dn ALK1抑制BMP9条件培养基作用后,可抑制Smad1/5/8的磷酸化,i SCAP细胞中早期成骨/成牙本质标志物ALP活性和晚期成骨/成牙本质标志钙盐结节减少,重要成骨转录因子Runx2基因表达减少,成骨/成牙本质相关基因OCN、OPN、DMP1的表达也受到了抑制。结论:Smad信号通路在BMP9诱导i SCAP成骨/成牙本质过程中存在并起着重要作用。 展开更多
关键词 永生化根尖牙乳头干细胞 BMP9 显性负性突变ALK1受体成骨/成牙本质分化
原文传递
BMP9通过ERK5信号通路调控根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化 被引量:6
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作者 孔令姣 王金华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期527-531,共5页
目的研究骨形成蛋白9(BMP9)是否通过激活ERK5信号通路调控永生化根尖牙乳头干细胞(i SCAP)成骨/成牙本质向分化。方法首先使用ERK5抑制剂BIX02189作用于BMP9的腺病毒转染i SCAP,采用Western blotting检测ERK5蛋白的磷酸化水平变化;然后... 目的研究骨形成蛋白9(BMP9)是否通过激活ERK5信号通路调控永生化根尖牙乳头干细胞(i SCAP)成骨/成牙本质向分化。方法首先使用ERK5抑制剂BIX02189作用于BMP9的腺病毒转染i SCAP,采用Western blotting检测ERK5蛋白的磷酸化水平变化;然后通过碱性磷酸酶(ALP)染色、RT-PCR及茜素红染色检测成骨/成牙本质相关基因Runx2、OCN、OPN和DMP1的表达,研究BMP9对i SCAP成骨/成牙本质分化的影响。结果 BMP9可以上调ERK5磷酸化水平,BIX02189干预后ERK5磷酸化下降;ALP染色,RT-PCR检测表达及茜素红染色均发现BMP9可以促进Runx2、OCN、OPN、DMP1阳性表达,而BIX02189则抑制成骨/成牙本质分化。结论 BMP9可以通过激活ERK5信号通路促进根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化。 展开更多
关键词 永生化根尖牙乳头干细胞 蛋白9 ERK5 成骨/成牙本质分化
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组蛋白去乙酰化酶在口腔来源成体干细胞成骨向/成牙本向分化的研究进展 被引量:1
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作者 宋词 陈婷 吴补领 《分子影像学杂志》 2019年第2期234-237,共4页
基于非基因序列改变所致基因表达水平变化,如DNA甲基化和染色质构象变化等被称为表观遗传学。近年来,大量学者致力于研究表观遗传学对于多种组织中成体干细胞多向分化能力的影响,包括DNA甲基化修饰、组蛋白共价修饰、染色质重塑、基因... 基于非基因序列改变所致基因表达水平变化,如DNA甲基化和染色质构象变化等被称为表观遗传学。近年来,大量学者致力于研究表观遗传学对于多种组织中成体干细胞多向分化能力的影响,包括DNA甲基化修饰、组蛋白共价修饰、染色质重塑、基因沉默和RNA编辑等调控机制。口腔来源的成体干细胞是一类易于获得的人成体干细胞,这类细胞在组织工程学,特别是骨、牙齿再生的过程中是重要的种子细胞。研究表明,成体干细胞成骨/成牙本质向分化过程受组蛋白去乙酰化酶调控。同时,牙齿再生对于临床治疗有巨大的影响。本文阐述了组蛋白去乙酰化酶调节成骨/成牙本质向分化的研究进展以及其在牙再生医学中的应用前景。 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶家族 口腔来源体干细胞 /成牙本质分化
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HDAC5对成牙本质细胞增殖和分化影响的研究
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作者 白玉 柳鑫 +3 位作者 程小刚 郭倩 何文喜 余擎 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期737-742,共6页
目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC... 目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC5的OLCs,CCK8实验检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)染色及活性检测、茜素红染色观察矿化能力,Western blot检测I型胶原(COL1α)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的蛋白表达。结果:与健康牙髓组织相比,炎症牙髓成牙本质细胞层见高表达的HDAC5,过表达HDAC5后OLCs增殖活力抑制,ALP活性降低,矿化结节形成减少,成牙/成骨相关蛋白表达均降低(P<0.05)。结论:HDAC5在牙髓炎成牙本质细胞层高表达且抑制OLCs的增殖和成牙/成骨向分化。 展开更多
关键词 成牙本质细胞 表观遗传学 组蛋白去乙酰化酶5 /成牙本质分化 细胞增殖
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miR-222-5p在人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质向分化中的作用 被引量:4
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作者 宋孟晓 王燕 刘进忠 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2020年第3期87-93,112,共8页
目的 探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法 选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miR-NAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检... 目的 探讨miR-222-5p在人根尖乳头干细胞(SCAP)成骨/成牙本质向分化中的作用.方法 选取芯片研究中差异表达的miRNAs 19个,采用qPCR验证SCAP成骨/成牙本质分化中以上miRNAs的表达;将19个miR-NAs转染SCAP,成骨/成牙本质向诱导分化,qPCR检测DSPP、Runx2的表达,挑选表达量高的miR-222-5p组,Western blotting检测DSPP、Runx2蛋白水平的表达.生物信息学靶基因预测miR-222-5p的潜在靶基因,构建靶基因野生型/突变型双荧光素酶报告基因载体,与miR-222-5p共转染HEK 293T,双荧光素酶报告基因实验检测荧光素酶活性,证明miR-222-5p和预测的靶基因之间的关系.Western blotting验证miR-222-5p转染SCAP后靶基因的表达.进一步研究抑制内源性miR-222-5p和干扰靶基因对SCAP成骨/成牙本质向分化的影响.结果 19个miRNAs表达与芯片结果一致,其中miR-222-5p表达量高;转染miR-222-5p组DSPP、Runx2的mRNA及蛋白表达明显上调;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验确认人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)是miR-222-5p的直接靶基因,而且过表达miR-222-5p抑制SFRP4表达;干扰SFRP4可以有效地逆转miR-222-5p inhibitor对DSPP表达的抑制作用.结论 miR-222-5p通过靶向调节SFRP4促进SCAP成骨/成牙本质向分化. 展开更多
关键词 miR-222-5p 根尖乳头干细胞 /成牙本质分化 SFRP4 WNT信号通路
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外泌体诱导3D纳米纤维小管中牙髓干细胞成骨/成牙本质向分化的作用研究 被引量:2
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作者 梅笑寒 仇珺 +4 位作者 张贝蒂 王珏钰 余擎 张亚庆 肖敏 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2022年第1期76-82,共7页
目的探究基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)诱导的根尖牙乳头干细胞来源外泌体(exosomes derived from stem cells from apical papilla,SCAP-Exo)对3D纳米纤维小管中牙髓干细胞(dental pulp stem cells,D... 目的探究基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)诱导的根尖牙乳头干细胞来源外泌体(exosomes derived from stem cells from apical papilla,SCAP-Exo)对3D纳米纤维小管中牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)增殖和成骨/成牙本质向分化的影响。方法提取SDF-1α诱导的SCAP-Exo,采用透射电镜、纳米粒子跟踪技术及Western Blot进行鉴定。将DPSCs培养于3D纳米纤维小管中,扫描电镜观察DPSCs的形态与黏附状态。使用不同质量浓度(0、50、100μg/mL)的SCAP-Exo刺激3D纳米纤维小管中的DPSCs,分别记为对照组、50μg/mL SCAP-Exo组和100μg/mL SCAP-Exo组,并对细胞增殖活力和碱性磷酸酶(ALP)活性进行检测,实时RT-PCR和Western Blot分别检测成骨/成牙本质向分化相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果SCAP-Exo形态呈茶托状,具有双层膜结构,平均粒径为126.4 nm,能够表达外泌体标志蛋白CD9和CD81。扫描电镜观察显示DPSCs在3D纳米纤维小管中的黏附状态良好。50μg/mL SCAP-Exo组和100μg/mL SCAP-Exo组DSPCs的增殖活力和ALP活性均高于对照组,且100μg/mL SCAP-Exo组较50μg/mL SCAP-Exo组的ALP活性升高更显著(均P<0.05)。100μg/mL SCAP-Exo组成骨/成牙本质向分化基因(ALP、DMP-1、BSP和OCN)的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.05)。结论DPSCs可在3D纳米纤维小管中维持良好的增殖活力。SDF-1α诱导的SCAP-Exo可增强3D纳米纤维小管中DPSCs的增殖活力和ALP活性,以及促进其向成骨/成牙本质向分化。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 外泌体 /成牙本质分化 管状支架
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TGF-β1、MTA联合应用对人牙髓干细胞增殖和分化的影响
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作者 柴文宇 李珍珍 +1 位作者 殷亮亮 李春年 《中华老年口腔医学杂志》 2023年第1期7-12,共6页
目的通过观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate,MTA)单独应用、联合应用对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和成骨/成牙本质分化的影响,... 目的通过观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate,MTA)单独应用、联合应用对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和成骨/成牙本质分化的影响,以期为活髓保存治疗时人牙髓干细胞的转化促进提供实验参考。方法体外分离、培养、鉴定人牙髓干细胞;设置3个实验组:MTA组、TGF-β1组、MTA+TGF-β1组和对照组,采用CCK-8法检测人牙髓干细胞的增殖活性;采用碱性磷酸酶试剂盒检测人牙髓干细胞中的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性;qRT-PCR测定成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx-2)的mRNA相对表达水平;各组数据用统计软件SPSS26.0进行统计学分析。结果在细胞培养的第3、5、7天,MTA+TGF-β1组的OD值高于MTA组和TGF-β1组(P<0.05),各实验组均高于对照组(P<0.05);MTA+TGF-β1组的ALP活性高于MTA组和TGF-β1组(P<0.05),各实验组均高于对照组(P<0.05);MTA+TGF-β1组细胞中DSPP、OC、Runx-2的mRNA相对表达水平高于MTA组和TGF-β1组(P<0.05),各实验组均高于对照组(P<0.05);结论TGF-β1和MTA均能促进牙髓干细胞增殖和分化。TGF-β1与MTA联合应用促进人牙髓干细胞的增殖、分化的能力优于单独使用MTA和TGF-β1。 展开更多
关键词 人牙髓干细胞 TGF-Β1 MTA 成骨/成牙本质分化
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血小板裂解液对人根尖牙乳头干细胞和牙周膜干细胞体内外增殖、矿化能力的影响 被引量:2
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作者 白玉 陈博 +4 位作者 王捍国 穆云静 孔辉 刘向辉 余擎 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期433-439,452,共8页
目的:研究血小板裂解液(Platelet Lysate,PL)在体内外对人根尖牙乳头干细胞(SCAP)和牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、矿化的干预效应,以期找到PL应用于这两种细胞的最佳方式。方法:在矿化诱导培养体系中按一定体积比加入PL,分别作用于体内、... 目的:研究血小板裂解液(Platelet Lysate,PL)在体内外对人根尖牙乳头干细胞(SCAP)和牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、矿化的干预效应,以期找到PL应用于这两种细胞的最佳方式。方法:在矿化诱导培养体系中按一定体积比加入PL,分别作用于体内、外复合HA-TCP支架材料三维生长的SCAP和PDLSCs,扫描电镜(SEM)以及组织学观察细胞生长、分化情况。结果:体外三维培养模式下,PL能够促进SCAP和PDLSCs的增殖以及矿化细胞外基质的形成,并利于在支架材料上形成完整的细胞膜片(cell sheet)样结构,以上效应对于PDLSCs作用更为显著。而在体内移植模式下,经50 mL/L、10 mL/L PL培养体系预培养的SCAP能形成包含成牙本质细胞样细胞、牙本质样基质和牙髓组织的牙本质牙髓复合体样结构;而PDLSCs经50 mL/LPL干预后,可分化为成牙骨质细胞样细胞,并生成牙骨质样基质、牙周膜样组织。结论:一定体积浓度比的PL能促进SCAP和PDLSCs在体内外的增殖以及成骨、成牙本质分化。 展开更多
关键词 血小板裂解液 根尖牙乳头干细胞 牙周膜干细胞 HA-TCP支架材料 成骨/成牙本质分化
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