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MOI对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响 被引量:7
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作者 刘旭平 范里 +2 位作者 朱明龙 张旭 谭文松 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期638-644,共7页
分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍... 分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍然保持着旺盛的代谢活动。结果表明:MOI对细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率有显著影响。随着MOI增加,细胞死亡速率增加,其代谢速率也普遍上升。同时,MOI增加能有效地提高病毒感染率和单位细胞病毒颗粒数扩增效率,但过高的MOI亦会降低病毒滴度扩增效率,从而影响病毒包装质量。 展开更多
关键词 HEK293细胞 腺病毒 病毒扩增效率 MOI
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不同引物对和退火温度对盐生植物盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响 被引量:3
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作者 白雪芹 杨瑞瑞 曾幼玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期352-360,共9页
【目的】以盐生植物盐穗木为材料,研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物,标记为β-actin1和β-actin2,分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引... 【目的】以盐生植物盐穗木为材料,研究不同引物对和不同退火温度对盐穗木内参基因β-actin扩增效率的影响。【方法】设计扩增β-actin基因的两对引物,标记为β-actin1和β-actin2,分别建立这两对引物扩增盐穗木β-actin基因和特异性引物扩增该物种的过氧化物酶基因POD(盐响应的代表性基因),在不同退火温度下的标准曲线和扩增曲线。【结果】不论55还是58℃退火温度,引物对β-actin1比引物对β-actin2有更好的扩增效率;在55℃退火温度下,引物对β-actin1有更高的扩增效率。在这两个退火温度下,分别以β-actin1和β-actin2引物对扩增β-actin基因作为内参,盐穗木POD基因的相对表达水平具有一定的差异性。【结论】引物和退火温度会影响荧光定量PCR的扩增效率,进而会影响靶基因的相对表达水平。 展开更多
关键词 盐穗木 不同引物对 退火温度 Β-ACTIN 扩增效率
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鉴定定量PCR不同引物对的扩增效率 被引量:3
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作者 张静静 马长艳 孙玉洁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期645-648,共4页
目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性。方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-TEasy载体中,构建... 目的:采用载体构建及荧光定量PCR的方法比较BCL2等位基因不同部位PCR引物在定量分析中的扩增效率,判断其用于不同等位基因转录活性分析的可靠性。方法:用PCR扩增包含定量PCR目的片段的序列,然后将扩增产物分别插入pGEM-TEasy载体中,构建TA3重组载体,再以TA3载体为模板,采用荧光定量PCR方法比较引物对之间扩增效率。结果:定量PCR结果显示引物对之间扩增效率无明显差异。结论:所检测的PCR引物对之间的扩增效率一致,可用于比较分析mbr+/mbr-Nalm-6杂合子细胞系中两个等位基因表达活性。 展开更多
关键词 PCR 引物 扩增效率
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提高富含GC碱基DNA模板PCR扩增效率的方法 被引量:3
4
作者 邢小黑 姜卫红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期112-114,共3页
关键词 PCR 扩增效率 GC碱基 DNA模板
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细胞裂解法对植入前诊断中聚合酶链反应扩增效率的影响 被引量:1
5
作者 李崎 马燕琳 +3 位作者 潘乾 夏家辉 戴和平 夏昆 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期201-203,共3页
目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基... 目的 :探讨优化细胞裂解条件 ,提高植入前诊断中聚合酶链反应的扩增效率。方法 :吸取单个淋巴细胞或人胚胎单卵裂球 ,用碱裂解液、蛋白酶K裂解液和改良的蛋白酶K裂解液进行处理 ,随后以巢式 -聚合酶链反应扩增人肾上腺脑白质营养不良基因 (ALD基因 )的 3号外显子 ,比较其扩增效率。结果 :三种裂解液组对人淋巴细胞的扩增效率分别为 90 % ,74 % ,87% ,对人单卵裂球的扩增效率分别为 98% ,77% ,96 %。结论 :在植入前诊断中 。 展开更多
关键词 细胞裂解法 植入前诊断 聚合酶链反应 扩增效率 影响
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标本扩增效率的计算及其对HBV DNA定量结果的影响 被引量:2
6
作者 陈英剑 胡成进 克丙申 《中国实验诊断学》 2006年第2期171-173,共3页
目的建立分析标本扩增效率的方法,分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图,计算得到Ct,HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8/ml的标本的扩... 目的建立分析标本扩增效率的方法,分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图,计算得到Ct,HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8/ml的标本的扩增效率,井用得到的标本实际扩增效率加以校正。结果4个标准的扩增效率分别为0.80,0.80,0.84和0.85。标本的扩增效率在0.59—0.85之问,其中30份(75%)在0.7—0.85之间,8份(20%)在0.65,0.70之问,其余2份在0.65以下。部分校正后的HBV DNA定量结果比校正前高一个数量级。结论标本与标准的扩增效率不一定相同,标本扩增效率的降低导致标准曲线定量结果偏低,有必要用标本的实际扩增效率对结果进行校正。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 扩增效率 乙肝病毒
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用三引物法提高PCR的扩增效率及特异性 被引量:1
7
作者 欧阳应斌 黄培堂 黄翠芬 《生物技术通讯》 CAS 1994年第3期137-138,共2页
聚合酶链反应(PCR)现已广泛应用于分子生物学研究的各个领域。对于模板量较低的样品及单拷贝基因,通常通过增加扩增的次数或多次PCR提高扩增的效率,但这样往往出现非特异性反应。本文采用三引物双扩增法大大提高了PCR扩增的效率及特异性... 聚合酶链反应(PCR)现已广泛应用于分子生物学研究的各个领域。对于模板量较低的样品及单拷贝基因,通常通过增加扩增的次数或多次PCR提高扩增的效率,但这样往往出现非特异性反应。本文采用三引物双扩增法大大提高了PCR扩增的效率及特异性。 1 材料与方法 Melanoma细胞由本室保存,能分泌人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)。RT 展开更多
关键词 扩增效率 PCR 特异性 聚合酶链反应 非特异性反应 单拷贝 琼脂糖凝胶电泳 碱基互补 变性凝胶电泳
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提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率
8
作者 曹锡梅 梁俊红 +3 位作者 张潮 万东方 蒙晓平 郭大玮 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1251-1258,共8页
背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体... 背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系。方法:提取THP-1细胞基因组DNA作为模板,通过97℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件,在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系。建立提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法,同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响。结果与结论:97℃高温预变性使模板DNA充分解链,同时提高退火温度至60℃,有利于提高聚合酶链式反应扩增产率;反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率,但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样。结果证实,高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板DNA与引物特异性结合,但是DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 组织工程基础实验 血清淀粉样蛋白A转录激活因子 DNA 启动子 鸟嘌呤 胞嘧啶 二甲基亚砜 高温预变性 退火温度 聚合酶链式反应 扩增效率 国家自然科 学基金 组织构建图片文章
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外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势
9
作者 阳莉 胡元 +2 位作者 陈晓燕 黄梦淳 卢建溪 《当代医药论丛》 2021年第21期28-30,共3页
目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细... 目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2~3 d即出现细胞集落。随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95%。结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势。外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势。在培养的第12天~第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高。采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 细胞培养 扩增效率 杀伤活性 免疫治疗
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氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增效率、灵敏度和特异性的影响
10
作者 蒋城 杨中柱 +1 位作者 赵美莲 宋瑱 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期724-729,共6页
以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩... 以人类基因组DNA和志贺氏菌粗制裂解菌液为模板,扩增115 bp的Alu基因片段和402 bp的ipaH基因片段.通过设置氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)和模板的浓度为变量,分别研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增效率和灵敏度的影响;运用多轮PCR扩增方法研究了氧化石墨烯对聚合酶链式反应扩增特异性的影响.结果显示,氧化石墨烯有效提高PCR扩增效率的范围为9—14倍,提高PCR灵敏度一个数量级以及增加多轮PCR扩增中的两轮扩增反应.从原子力显微镜(Atomic force microscope,AFM)的结果可以看出,本文制备的氧化石墨烯片层厚度主要集中在0.5—0.8 nm,少数大于1 nm,总体具有较大的比表面积.除此之外,本文还发现当氧化石墨烯浓度到达μg·μL^(-1)后,引物二聚体与氧化石墨烯的浓度呈正比,说明氧化石墨烯优化PCR的主要影响因素是其与引物的相互作用. 展开更多
关键词 氧化石墨烯 聚合酶链式反应 扩增效率 灵敏度 特异性
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高粱BTx623幼苗多酚氧化酶Real-time PCR引物扩增效率的检测
11
作者 蔡玉笑 张志雯 +1 位作者 秦素平 陈于和 《河北科技师范学院学报》 CAS 2012年第3期23-27,共5页
介绍了一种检测实时荧光定量PCR技术引物扩增效率的方法,以期为进一步应用实时荧光定量PCR奠定基础。同时通过实时荧光定量PCR技术,研究高粱BTx623幼苗中的多酚氧化酶基因SbPPO的表达情况,结果发现SbPPO2,SbPPO5,SbPPO6的相对表达量较高... 介绍了一种检测实时荧光定量PCR技术引物扩增效率的方法,以期为进一步应用实时荧光定量PCR奠定基础。同时通过实时荧光定量PCR技术,研究高粱BTx623幼苗中的多酚氧化酶基因SbPPO的表达情况,结果发现SbPPO2,SbPPO5,SbPPO6的相对表达量较高,这3个SbPPO可能在高粱BTx623幼苗中起到重要功能。 展开更多
关键词 扩增效率 实时荧光定量PCR 高粱 幼苗 多酚氧化酶基因 表达
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应用二次PCR技术提高体外基因扩增的效率 被引量:1
12
作者 余伍忠 周常文 +2 位作者 郝小军 魏静 李厚钧 《西北国防医学杂志》 CAS 1993年第1期40-41,共2页
自1985年Mullis等创立PCR技术以来,作为一种基因研究的新方法,在传染病、遗传病、肿瘤及基因工程的诊断和研究等许多领域内得到广泛应用,是分子生物学研究技术的重大突破.PCR方法灵敏、特异、简便、快速,但实验受诸多因素的影响,可以造... 自1985年Mullis等创立PCR技术以来,作为一种基因研究的新方法,在传染病、遗传病、肿瘤及基因工程的诊断和研究等许多领域内得到广泛应用,是分子生物学研究技术的重大突破.PCR方法灵敏、特异、简便、快速,但实验受诸多因素的影响,可以造成非特异性扩增产物或扩增产物的产量不足等,使实验达不到预期结果.为此我们建立了PCR二次扩增方法,弥补了第一次扩增有时出现的缺陷,提高了扩增效率. 展开更多
关键词 体外基因 PCR技术 产物 方法 基因研究 扩增效率 聚合酶 DNA 靶序列 基因片段
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LAMP(环介导等温扩增)的原理及在寄生虫检测上的应用 被引量:7
13
作者 史亚东 赵子方 +3 位作者 朱丹 张龙现 宁长申 菅复春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期935-939,共5页
2000年,Notomi等[1]建立了一种快速、简单、灵敏、特异并且低成本的核酸扩增方法——环介导等温扩增法(LAMP),这种新颖的核酸扩增方法具有许多优势[2-4]:(1)扩增效率极高,60min内扩增产物可达到靶基因的109~1010倍;(2)操作简单,
关键词 环介导等温 LAMP 寄生虫 应用 检测 方法 扩增效率 产物
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反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列 被引量:8
14
作者 李秋莉 高晓蓉 +3 位作者 范琦 袁晓东 刘大伟 安利佳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第11期17-19,共3页
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法... 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 5′cDNA 末端序列 基因工程 RACE 反转录 克隆 扩增效率
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纳米基因扩增技术及其应用 被引量:5
15
作者 桑付明 李鑫 刘佳 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1745-1753,共9页
聚合酶链式反应(PCR)是20世纪80年代中期发展起来的一种应用广泛的体外DNA扩增技术,但目前该技术仍然存在着一些问题,如特异性差、灵敏度低和假阳性等。近年来,随着纳米科技的发展,一些纳米粒子如金属纳米粒子、碳纳米材料、量子点和纳... 聚合酶链式反应(PCR)是20世纪80年代中期发展起来的一种应用广泛的体外DNA扩增技术,但目前该技术仍然存在着一些问题,如特异性差、灵敏度低和假阳性等。近年来,随着纳米科技的发展,一些纳米粒子如金属纳米粒子、碳纳米材料、量子点和纳米金属氧化物等被引入到PCR反应体系中,即纳米基因扩增技术(Nano PCR)。该技术大幅度提高了PCR的扩增效率、选择性、灵敏度和特异性,推动了生物学技术的发展,具有非常重要的理论意义和应用价值。本文综述了近年来纳米基因扩增技术的主要研究进展、反应机理,并探讨了其应用研究。 展开更多
关键词 纳米基因技术 纳米材料 特异性 扩增效率 热启动 评述
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荧光实时定量PCR的研究进展 被引量:14
16
作者 张驰宇 成婧 +2 位作者 李全双 曹威 孙金燕 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2006年第3期268-271,共4页
关键词 荧光实时定量PCR 相对定量 绝对定量 扩增效率
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不同引物及数据分析方法对定量PCR结果的影响 被引量:17
17
作者 刘正霞 徐阳 +3 位作者 徐进梅 杨明夏 马磊 朱昌亮 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1112-1117,共6页
目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△... 目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响。方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCND1、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,并分别使用2-△△CT法、Pfaffl法及相对标准曲线法计算肺癌紫杉醇敏感细胞株及耐药细胞株间目的基因的表达差异,分析不同引物和数据计算方法对实验结果的影响。结果:统计学分析表明,引物的扩增效率对定量PCR结果分析有显著影响,不同引物特异性扩增得到的样本间表达倍数有显著差异(P<0.05)。3种计算方法中,Pfaffl法与相对标准曲线法无统计学差异(P>0.05),而2-△△CT法与其他2种方法均有显著差异(P<0.05)。结论:引物的选择对于定量PCR结果有显著影响;Pfaffl法是更准确,更合理的相对定量计算方法。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 2^-△△CT法 Pfaffl法 相对标准曲线法 扩增效率
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模板DNA磁珠提取法 被引量:21
18
作者 郑秀芬 凌凤俊 +1 位作者 涂政 叶健 《中国法医学杂志》 CSCD 2003年第2期107-108,共2页
生物检材的DNA分析结果取决于对检材DNA的提取与获得.DNA提取的方法很多,如常规采用的有机酚-氯仿提取法和Chelex-100提取法.
关键词 DNA提取 磁珠法 扩增效率 法医学
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叶用莴苣荧光定量PCR体系的优化 被引量:4
19
作者 李婷 韩莹琰 +1 位作者 范双喜 任月 《中国农学通报》 CSCD 2013年第13期106-113,共8页
为建立一套最适合叶用莴苣(Lactuca sativa L.)基因表达量研究的荧光定量PCR技术体系,以叶用莴苣S24为试材,采用SYBR Green Ⅰ法,利用叶用莴苣内参基因的2对引物组合18SR1和18SR2,分别在10μL和20μL反应体系条件下进行扩增反应。结果表... 为建立一套最适合叶用莴苣(Lactuca sativa L.)基因表达量研究的荧光定量PCR技术体系,以叶用莴苣S24为试材,采用SYBR Green Ⅰ法,利用叶用莴苣内参基因的2对引物组合18SR1和18SR2,分别在10μL和20μL反应体系条件下进行扩增反应。结果表明,分别在10μL和20μL反应体系条件下内参基因引物组合18SR1的扩增曲线、标准曲线以及溶解曲线等指标都优于内参基因引物组合18SR2;2对内参基因引物组合18SR1和18SR2在10μL反应体系中的扩增曲线、标准曲线以及溶解曲线等指标也均优于20μL反应体系。因此叶用莴苣荧光定量PCR内参基因利用18SR1引物组合,反应体系采用10μL比较合理。 展开更多
关键词 荧光定量PCR SYBR Green 标准曲线 扩增效率 溶解曲线
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标准品制备方法对FQ-PCR定量基因表达水平的影响 被引量:2
20
作者 陈军 李慧玲 +3 位作者 董建一 王福金 王爱国 王靖宇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1064-1068,共5页
实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖... 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖活化受体α(Ppar-α)及β肌动蛋白(β-Actin)的3个基因为对象,分别采用质粒纯化法、PCR产物直接纯化法、PCR产物凝胶回收法制备DNA标准品,10倍梯度稀释后用FQ-PCR制作标准曲线.并以10倍梯度稀释的样本cDNA标准曲线的参数为对照,进行比较分析.结果表明,不同方法制备的DNA标准品的扩增效率差异较大,并且与cDNA的扩增效率不一致,不能对cDNA样本进行准确定量.另外,虽然目的基因在cDNA样本中的拷贝未知,不能对基因表达水平进行绝对定量,但因不同cDNA样本的同一基因的扩增效率一致,可对基因的表达进行准确的相对定量. 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR DNA标准品 CDNA 扩增效率
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