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牛病毒性腹泻病毒牦牛株E0基因生物信息学分析及原核表达与抗原性检测 被引量:5
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作者 于吉锋 刘亚刚 +7 位作者 杨小艳 于晓东 冯英阳 王文伯 胡炳峰 刘晓钢 骆勇 刘斌 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第3期504-508,共5页
为研究牦牛BVDVE0蛋白的生物信息学及抗原性,本研究对本实验室克隆并测序的牦牛病毒性腹泻病毒E0基因进行了生物信息学分析;同时用含有酶切位点、起始密码子、终止密码子的引物重新扩增E0基因,并连接PMD18-T载体,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切... 为研究牦牛BVDVE0蛋白的生物信息学及抗原性,本研究对本实验室克隆并测序的牦牛病毒性腹泻病毒E0基因进行了生物信息学分析;同时用含有酶切位点、起始密码子、终止密码子的引物重新扩增E0基因,并连接PMD18-T载体,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,将获得的E0片段克隆至PET-28A原核表达载体,构建重组质粒并转入JM109.酶切、质粒PCR鉴定正确后转入rosetta(DE3)菌进行诱导表达.经SDS-PAGE检测结果显示目的基因获得了较高的表达,表达的融合蛋白约33ku,经western-blotting检测表明目的蛋白具良好的有抗原性. 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒 E0基因 生物信息学分析 表达 抗原性检测
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日本血吸虫尾蚴细胞的传代培养及抗原性检测 被引量:5
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作者 张中庸 李靓如 +5 位作者 曾宪芳 易新元 曾庆仁 言敢威 章洁 张京 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期332-334,共3页
目的 探索体外培养日本血吸虫尾蚴细胞的增殖与传代技术。 方法 无菌收集日本血吸虫活尾蚴5 000~10 000条,置于含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用组织刀快速割切尾蚴使成组织碎裂物,加入250 U蟹胶原酶在26℃下孵育30 min,然后离... 目的 探索体外培养日本血吸虫尾蚴细胞的增殖与传代技术。 方法 无菌收集日本血吸虫活尾蚴5 000~10 000条,置于含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用组织刀快速割切尾蚴使成组织碎裂物,加入250 U蟹胶原酶在26℃下孵育30 min,然后离心去酶,加入含有青霉素(100 U/ml)、链霉素(O.1 mg/ml)、两性霉素B(0.25μg/ml)和适量促细胞生长物的RPMI 1640改良培养基中作原代培养,当贴壁细胞增殖长满瓶底时,以1:2的接种率进行传代培养;获取第5代培养细胞作ELISA检测血吸虫病患者血清中抗体。 结果 在原代培养的第3天可见尾蚴组织的周围有呈单个存在或索状排列的发亮细胞,第10天可见单层细胞形成,第14天贴壁细胞长满瓶底并作传代培养;在传代培养中可见细胞呈均匀生长,每7~14 d传代一次;用第5代培养细胞作抗原,检测31例患者的阳性率为90.3%,检测30名正常人血清的假阳性率为6.7%。 结论 日本血吸虫尾蚴细胞体外传代培养至第5代,可用于免疫学研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 血吸虫尾蚴细胞 传代培养 抗原性检测
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鹅副粘病毒NP基因的原核表达及表达产物抗原性检测 被引量:1
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作者 杨玉菊 王君伟 +2 位作者 李曦 杨志 何海娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第12期3-6,共4页
根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp,共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至... 根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp,共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至原核表达载体pGEX-6P的多克隆位点,经酶切鉴定后将含有NP基因的阳性亚克隆重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用诱导剂IPTG分别以不同的浓度进行诱导,并在不同的诱导时间进行采样,样品经处理后通过SDS-PAGE、Westernblot和Dot-ELISA进行分析。结果显示:以终浓度为1mmol/LIPTG进行诱导4h表达可达到高峰,表达的融合蛋白大小约为80kD,并具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 鹅副粘病毒 NP基因 克隆 原核表达 抗原性检测
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中国莱姆病螺旋体PD91重组OspC的鉴定和抗原性检测 被引量:4
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作者 陈建 万康林 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期917-919,共3页
目的 重组中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C(OspC)并在大肠埃希菌中表达 ,用于早期莱姆病诊断的研究。方法 用聚合酶链反应 (PCR)扩增出PD91外膜蛋白C基因 ,定向克隆到表达载体PET 11D ,构建重组质粒PET 11D ospC。用PCR、限制性内切酶... 目的 重组中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C(OspC)并在大肠埃希菌中表达 ,用于早期莱姆病诊断的研究。方法 用聚合酶链反应 (PCR)扩增出PD91外膜蛋白C基因 ,定向克隆到表达载体PET 11D ,构建重组质粒PET 11D ospC。用PCR、限制性内切酶分析及序列测定等方法鉴定重组质粒。用WesternBlot检测其抗原性。结果 OspC基因被正确克隆到表达载体PET 11D中。序列测定结果证实与国外已报道的序列存在一定的差异。OspC具有强抗原性。 展开更多
关键词 中国 莱姆病 螺旋体 PD91 OspC 鉴定 抗原性检测 大肠埃希菌 外膜蛋白C
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鹅副粘病毒M基因主要抗原位点片段的原核表达及鉴定
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作者 张萍 韩秀娥 +1 位作者 王占锋 魏萍 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期56-59,共4页
根据GenBank中发表的GPMV SF02株M基因核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/G0株M基因主要抗原位点片段M1,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明,所扩增的M1基因核苷酸长为444 bp,共编码148个氨基酸。将M1同载体PGEX... 根据GenBank中发表的GPMV SF02株M基因核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/G0株M基因主要抗原位点片段M1,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明,所扩增的M1基因核苷酸长为444 bp,共编码148个氨基酸。将M1同载体PGEX-6P-1连接后,转化入E.coliBL21(DE3)PlysS,经IPTG诱导表达出目标蛋白,与预计相符。对表达的M1蛋白进行Western blot鉴定,表明所表达的M1蛋白可以与GPMVSF02株阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 鹅副粘病毒M基因 原核表达 抗原性检测
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1050例非淋菌性尿道炎患者性病病原体检测及支原体药敏分析 被引量:3
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作者 詹素云 杨婧 周智兴 《宜春学院学报》 2002年第2期77-79,共3页
目的 :了解支原体的流行及药物敏感情况 .方法 :采用 10 5 0例患者的泌尿生殖道分泌物行支原体培养加药敏 ,沙眼衣原体采用抗原快速检测法 .结果 :支原体培养阳性者 35 6例 ( 33 9% ) .uu感染 2 4 6例 ( 2 3 4 % ) ,显著高于Mh感染 30例... 目的 :了解支原体的流行及药物敏感情况 .方法 :采用 10 5 0例患者的泌尿生殖道分泌物行支原体培养加药敏 ,沙眼衣原体采用抗原快速检测法 .结果 :支原体培养阳性者 35 6例 ( 33 9% ) .uu感染 2 4 6例 ( 2 3 4 % ) ,显著高于Mh感染 30例 ( 2 8% )和uu +Mh混合感染 80例 ( 7 6 % ) ,P<0 0 0 5 .在 35 6例支原体培养阳性患者中合并CT感染者 4 5例 (12 6 % ) .在测定 10种抗生素中 ,对支原体敏感度较高的 3种抗生素依次为交沙霉素、强力霉素、美满霉素 ,其敏感度分别为 80 3% ,70 2 % ,6 0 7% .而支原体耐药率较高的 3种抗生素依次为氧氟沙星、四环素、红霉素 ,耐药率分别为 70 2 %、5 5 %、4 3% .作者对上述病例不同性别、年龄的支原体感染。 展开更多
关键词 非淋菌性尿道炎 患者 性病 病原体检测 支原体药敏分析 药敏试验 抗原性快速检测
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丙型肝炎病毒NS3区基因的克隆、表达及产物的纯化和抗原性分析
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作者 王尊文 祁自柏 +4 位作者 于洋 谷金莲 杨振 张华远 李河民 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2004年第11期688-689,共2页
目前,我国阻断丙型肝炎传播的主要方法是用抗丙型肝炎病毒(HCV)酶联免疫吸附法(ELISA)试剂筛选供血员,国产试剂盒所用NS3抗原质量不太理想,使得国产试剂对NS3抗体漏检较多,提高该试剂盒质量的当务之急是开发更好的HCV抗原,特别是非结构... 目前,我国阻断丙型肝炎传播的主要方法是用抗丙型肝炎病毒(HCV)酶联免疫吸附法(ELISA)试剂筛选供血员,国产试剂盒所用NS3抗原质量不太理想,使得国产试剂对NS3抗体漏检较多,提高该试剂盒质量的当务之急是开发更好的HCV抗原,特别是非结构区抗原[1,2].为分析和比较不同长度和型别的NS3片段的抗原性,我们在大肠杆菌中表达了5个不同长度和型别的HCV NS3抗原,并作为包被抗原,按间接ELISA原理检测抗HCV国家参考品血清及部分临床样本,比较其抗原性. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3区 基因克隆 基因表达 抗原性检测 酶联免疫吸附法
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垂体腺瘤分类的研究进展 被引量:6
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作者 魏梁锋 岳志健 王守森 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期475-476,共2页
关键词 垂体腺瘤 原发性肿瘤 组织学分类 神经外科医师 形态学分类 抗原性检测 分泌活性 内分泌学 分类方法 侵犯程度
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阿昔洛韦治疗婴幼儿轮状病毒肠炎疗效观察
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作者 杨胜国 刘金芳 《现代医药卫生》 2008年第17期2624-2625,共2页
我科运用阿昔洛韦对55例轮状病毒肠炎患儿进行治疗.取得了较好的疗效.报道如下。 1资料与方法 1.1病例选择:本组110例.为2006-2007年住我科的秋季腹泻患儿,所选资料均符合以下条件:(1)年龄10-24月;(2)入院以前未用过抗生... 我科运用阿昔洛韦对55例轮状病毒肠炎患儿进行治疗.取得了较好的疗效.报道如下。 1资料与方法 1.1病例选择:本组110例.为2006-2007年住我科的秋季腹泻患儿,所选资料均符合以下条件:(1)年龄10-24月;(2)入院以前未用过抗生素及微生态制剂;(3)轮状病毒抗原性检测(ELISA)阳性;(4)病程小于4天,大便次数增多,呈蛋花样或水样便。 展开更多
关键词 婴幼儿轮状病毒肠炎 疗效观察 阿昔洛韦 治疗 微生态制剂 抗原性检测 秋季腹泻 病例选择
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《中国兽医科学》2006年(总第341~352期)索引
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《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期I0001-I0005,I0010-I0016,共12页
关键词 口蹄疫病毒 鼻病毒 猪生殖与呼吸综合征病毒 灭活疫苗 猪传染性胃肠炎病毒 日冕形病毒 抗原性检测 朊蛋白基因 程安春 乳牛 崔恒敏 禽流感病毒 流感病毒群 牛病毒性腹泻 柔嫩艾美球虫 兽医科学 李云章 羊痘病毒 圆环病毒 刘国文 索引 通检 检索工具 中华人民共和国
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Study of serum Helicobacter pylori soluble antigen
11
作者 吴勤动 朱永良 《Journal of Zhejiang University Science》 CSCD 2002年第4期484-488,共5页
Objective: to explore a new serological method for detecting Helicobacter pylori ( H. pylori ) infection. Methods: Serum soluble antigen of H. pylori was detected by using avidin-biotin ELISA technique to evaluate t... Objective: to explore a new serological method for detecting Helicobacter pylori ( H. pylori ) infection. Methods: Serum soluble antigen of H. pylori was detected by using avidin-biotin ELISA technique to evaluate the status of H. pylori infection and for comparison with rapid urease test ( RUT ), histologic examination and serology. Results: The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were 77.46%, 91.07%, 91.67% and 76.12 %, respectively. The prevalence rate of serum H. pylori soluble antigen in 138 patients undergoing endoscopy was similar to the rate obtained by 14C-UBT methods ( P> 0.05 ). Conclusions: The detection of serum H. pylori soluble antigen(HpSAg) could be used as a new serological method which is accurate, and convenient, not affected by the memorizing reaction of serum antibody; is more sensitive, more specific and suitable for clinical diagnosis, and evaluation of eradication and for follow-up of H. pylori as well as for detection in children and pregnant women. 展开更多
关键词 Helicobacter pylori ANTIGEN SEROLOGY
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