牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA检测方法的标准化研究 被引量：6

1

作者 邓宇 王新华 +2 位作者 郭燕 钟发刚 沈敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期541-544,549,共5页

用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工... 用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工作浓度为1:800。通过引入牛病毒性腹泻病毒质控血清进行质控检验,该方法所得检测结果均在质量控制范围内,达到预定标准化要求。标准化的抗原捕获ELISA方法具有特异、灵敏、可靠、方便、快捷等特点,可广泛应用推广,为我国牛病毒性腹泻病毒监测提供了行之有效的技术手段。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 抗原捕获elisa 标准化

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抗Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测口蹄疫病毒的研究 被引量：6

2

作者 周国辉 李万 +1 位作者 赵磊 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期960-964,共5页

本研究用纯化的Asial型口蹄疫病毒（Footandmouthdiseasevirus，FMDV）免疫BALB／c小鼠，按常规单克隆抗体技术方法，经筛选获得6株能稳定分泌抗Asial型FMDV单抗的杂交瘤细胞株。以牛抗口蹄疫病毒IgG为捕获抗体，选择一株单抗（184）用... 本研究用纯化的Asial型口蹄疫病毒（Footandmouthdiseasevirus，FMDV）免疫BALB／c小鼠，按常规单克隆抗体技术方法，经筛选获得6株能稳定分泌抗Asial型FMDV单抗的杂交瘤细胞株。以牛抗口蹄疫病毒IgG为捕获抗体，选择一株单抗（184）用辣根过氧化物酶标记（HRP-184）作为检测抗体，建立了检测Asial型FMDV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出0．5859μg纯化Asial型FMDV抗原和2．5×10^3TCID50病毒，对O型FMDV、牛结核病、牛肺疫、牛流热、赤羽病、牛传染性鼻炎等病毒进行检测，均为阴性，无交叉反应发生。本研究建立的FMDV抗原捕获ELISA方法，具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点，可用于Asia1型FMDV的特异性检测。 展开更多

关键词 Asia1型 口蹄疫病毒 单克隆抗体 抗原捕获elisa

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抗原捕获ELISA对猪瘟的诊断效果 被引量：6

3

作者 高华峰 单于乃纯 +1 位作者 姚俊 解天珍 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第7期48-50,共3页

应用抗原捕获ELISA方法分别对现行猪瘟疫苗毒及接种疫苗后产生定型热的兔脾、不同地区可疑猪瘟组织样品进行检测。结果表明 ,ELISA方法对猪瘟强毒组织样品的检测效果良好 ,但对弱毒的检测并不敏感 。

关键词 抗原捕获elisa 猪瘟组织样品 诊断 单克隆抗体 猪瘟病毒

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牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原捕获ELISA检测方法的建立 被引量：6

4

作者 张丽颖 刘畅 +1 位作者 鲍永华 赵志辉 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第8期13-19,共7页

用牛病毒性腹泻病毒（BVDV）单克隆抗体包被酶标板，以兔多克隆抗体作为夹心抗体，建立BVDV抗原捕获ELISA（AC-ELISA）检测方法，优化反应条件并对该方法的稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明，单抗最佳包被质量浓度为5μg／mL，... 用牛病毒性腹泻病毒（BVDV）单克隆抗体包被酶标板，以兔多克隆抗体作为夹心抗体，建立BVDV抗原捕获ELISA（AC-ELISA）检测方法，优化反应条件并对该方法的稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明，单抗最佳包被质量浓度为5μg／mL，兔多抗血清最佳质量浓度为10μg／mL；单抗在4℃包被12～24h，多抗在37℃作用1h为双抗体的最佳反应条件；酶标抗体最适稀释度1：10000，最适作用时间为1h；采用1％BSA和1％明胶分别在抗体包被后和加入待检抗原反应后进行两次封闭效果好。用AC—ELISA方法检测临床采集的11份牛腹泻病料和12份健康牛组织样品，同时以病毒分离和RT-PCR检测方法做对比，3种方法符合率很高。研究表明AC—ELISA方法稳定性好，可用于BVDV的临床快速检测。 展开更多

关键词 抗原捕获elisa 单克隆抗体 牛病毒性腹泻病毒

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鸡传染性法氏囊病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立及应用 被引量：3

5

作者 陈志飞 杜军 +5 位作者 汪振兴 张强 王巧全 严亚贤 孙建和 李树清 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2009年第6期548-553,共6页

为快速检测鸡传染性法氏囊病毒,使用纯化的鸡抗IBDV多克隆抗体和鼠抗IBDV单克隆抗体,建立了抗原捕获ELISA检测鸡传染性法氏囊病毒的方法。使用建立的方法可以检测到1∶160倍稀释的IBDV疫苗及阳性法氏囊组织中的病毒。检测禽流感、新城... 为快速检测鸡传染性法氏囊病毒,使用纯化的鸡抗IBDV多克隆抗体和鼠抗IBDV单克隆抗体,建立了抗原捕获ELISA检测鸡传染性法氏囊病毒的方法。使用建立的方法可以检测到1∶160倍稀释的IBDV疫苗及阳性法氏囊组织中的病毒。检测禽流感、新城疫、鸡传染性支气管炎病毒及沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌等结果均为阴性。检测IBDV超强毒和疫苗毒人工感染鸡的法氏囊、脾、肝及临床样品78份,检出阳性24份,与RT-PCR检测结果相符率为96%(75/78)。说明建立的方法敏感、特异,可用于法氏囊病的诊断和监测。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病毒 抗原捕获elisa 检测

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草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立 被引量：3

6

作者 景宏丽 曹欢 +4 位作者 张旻 王娜 林祥梅 张利峰 吴绍强 《中国动物检疫》 CAS 2014年第12期78-81,83,共5页

研究以纯化的羊抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体作为捕获抗体,抗草鱼呼肠孤病毒的单克隆抗体为检测抗体,建立草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法,其最佳反应条件是:羊多克隆抗体包埋浓度为2.5μg/m L,抗草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体工作浓度... 研究以纯化的羊抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体作为捕获抗体,抗草鱼呼肠孤病毒的单克隆抗体为检测抗体,建立草鱼呼肠孤病毒抗原捕获ELISA检测方法,其最佳反应条件是:羊多克隆抗体包埋浓度为2.5μg/m L,抗草鱼呼肠孤病毒单克隆抗体工作浓度为1:400稀释,以3%牛血清白蛋白作为封闭液。该方法的检测限为5×105 pfu/m L,且能够特异性检出发病草鱼内脏组织中的草鱼呼肠孤病毒。特异性试验结果表明该方法具有较高的特异性,与病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤春血症病毒等水产动物病毒株均不反应。该方法还具有较好的稳定性。 展开更多

关键词 草鱼呼肠孤病毒 抗原捕获elisa 单克隆抗体

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牛轮状病毒抗原捕获ELISA方法的建立与应用 被引量：3

7

作者 常继涛 张佳昕 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1142-1146,共5页

为建立牛轮状病毒(BRV)抗原检测方法,本研究以BRV VP6蛋白的多克隆抗体为捕获抗体、VP7蛋白的G6/G10共享型单克隆抗体(MAb)为检测抗体,建立了BRV抗原捕获ELISA方法。特异性试验结果显示,该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小... 为建立牛轮状病毒(BRV)抗原检测方法,本研究以BRV VP6蛋白的多克隆抗体为捕获抗体、VP7蛋白的G6/G10共享型单克隆抗体(MAb)为检测抗体,建立了BRV抗原捕获ELISA方法。特异性试验结果显示,该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒以及阿卡斑病毒无交叉反应。敏感性试验结果显示,本研究建立的ELISA方法最低可以检出10^(4.2) TCID_(50)病毒,而商品化ELISA试剂盒和RT-PCR方法的最低检出限分别为10^(4.86) TCID_(50)和10^(3.36) TCID_(50)病毒。该方法组内和组间的变异系数均小于10%,表明重复性良好。应用该ELISA方法对67份牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示BRV阳性率为18%,与商品化试剂盒和RT-PCR方法的符合率均为100%。本研究建立的抗原捕获ELISA方法可以用于BRV的规模化检测,为BRV的病原流行病学调查研究提供了有效的技术手段。 展开更多

关键词 牛轮状病毒 抗原捕获elisa 检测 单克隆抗体

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流行性造血器官坏死病病毒抗原捕获ELISA建立 被引量：1

8

作者 刘宁 高志强 +5 位作者 谷强 张旻 景宏丽 江育林 张利峰 刘金华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期10-12,I0001,共4页

使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱... 使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱生腹水获得单抗3A4。以抗EHNV多克隆抗体为捕获抗体,单抗3A4为检测抗体,使用HRP标记的羊抗鼠IgG作为酶标二抗,建立了EHNV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出103TCID_(50)的病毒液上清和0.0056!g的MCP重组蛋白。对纯化的GCRV、IHNV、IPNV、VHSV及SVCV病毒液进行检测,结果均为阴性,未发现交叉反应。本研究建立的EHNV抗原捕获ELISA方法,具有敏感、特异和重复性好的特点。通过应用于人工感染样品和临床样品的检测进一步证实了本检测方法的实用性。 展开更多

关键词 流行性造血器官坏死病 抗原捕获elisa

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病毒分离结合荧光抗体技术与抗原捕获ELISA检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原的敏感性比较研究 被引量：7

9

作者 高志强 张鹤晓 +3 位作者 刘继红 郭晋优 吴丹 谷强 《检验检疫科学》 2005年第6期12-14,共3页

本研究通过体外增毒,再测定病毒的TCID50,然后将病毒培养物作系列稀释,比较了细胞传两代进行荧光抗体染色法与三种商品化的抗原捕获ELISA试剂盒(包括IDEXX公司生产的BVDV抗原检测试剂盒、POURQUIER生产的P80检测试剂盒及NSP2-3/E0检测... 本研究通过体外增毒,再测定病毒的TCID50,然后将病毒培养物作系列稀释,比较了细胞传两代进行荧光抗体染色法与三种商品化的抗原捕获ELISA试剂盒(包括IDEXX公司生产的BVDV抗原检测试剂盒、POURQUIER生产的P80检测试剂盒及NSP2-3/E0检测试剂盒)检测病毒抗原的敏感性。结果表明,传两代进行荧光抗体染色的方法可检出10-6稀释的50μL细胞毒(0.12个TCID50),而三种商品化进口ELISA试剂盒分别只能达到10-2(1.2×103个TCID50)和10-1(1.2×104个TCID50)稀释的50μL细胞毒。尽管传两代进行荧光抗体染色的方法相对繁琐,但这种方法的敏感性是抗原捕获ELISA难以比拟的,因而更适合于血清中BVDV病毒抗原的检测。 展开更多

关键词 荧光抗体技术 抗原捕获elisa 牛病毒性腹泻病毒 敏感性比较 elisa检测 病毒抗原 敏感性 比较研究 病毒分离 elisa试剂盒

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用抗原捕获ELISA方法及过氧化物酶染色法检测蓝舌病病毒

10

作者 鱼海琼 林志雄 +1 位作者 颜思通 黄生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第2期9-9,共1页

关键词 蓝舌病 蓝舌病病毒 抗原捕获elisa方法 过氧化物酶染色法 检测 进出境动物检疫.

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抗A型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立 被引量：4

11

作者 孙静 周国辉 +3 位作者 王幸 李超斯 魏萍 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期146-150,共5页

为建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原学诊断方法,本研究应用纯化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5F7。经IFA特异性鉴定,5F7为一株血清型特异性MAb。亚类为IgG1/κ。间... 为建立A型口蹄疫病毒(FMDV)病原学诊断方法,本研究应用纯化的A型FMDV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5F7。经IFA特异性鉴定,5F7为一株血清型特异性MAb。亚类为IgG1/κ。间接ELISA检测杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1∶12 800和1∶105。硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L。应用该A型特异性MAb及实验室已制备的MAb 3D9初步建立了检测A型FMDV的抗原捕获ELISA方法。该方法可以检出2.0 ng纯化FMDV和1.0×104TCID50病毒,与O型、Asia1型FMDV及牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,组内及组间重复性试验显示变异系数小于8%。本研究建立的抗原捕获ELISA方法为A型FMDV抗原检测提供了一种实用有效的技术手段。 展开更多

关键词 A型口蹄疫病毒 单克隆抗体 抗原捕获elisa

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猪流行性乙型脑炎病毒prM-E抗原捕获ELISA检测方法的建立 被引量：1

12

作者 王晓磊 霍红 +3 位作者 郭立平 李伟 步志高 华荣虹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期465-468,485,共5页

为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病... 为建立猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)的检测方法,本研究以pr M-E结构蛋白特异性单克隆抗体(MAb)5B10和5E7分别作为捕获抗体和辣根过氧化酶标记的检测抗体,对反应条件进行优化,建立了抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。该方法与其它常见猪病病原无交叉反应,特异性强。该方法可以检出1.25×105 pfu/m L的病毒和48.44 ng/m L pr M-E重组蛋白,最佳线性检测范围为0.05μg/m L^1.00μg/m L,线性相关系数(R2)为0.996。组装的试剂盒批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。试剂盒4℃保存12个月稳定。该研究为JEV亚单位疫苗的研制与生产提供了技术支持。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 prM-E 抗原捕获elisa 检测

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改良抗原捕获ELISA在血小板抗体检测及配型中的应用 被引量：4

13

作者 焦淑贤 朱建芳 +5 位作者 丛培芳 周洪 温振科 孙波 乔显森 尹凤媛 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2008年第7期519-521,共3页

目的探讨改良抗原捕获ELISA(MACE)在血小板抗体检测及配型中的应用。方法采用MACE分别检测青岛地区医院送检48例血小板输注无效(PTR)患者血清中的血小板同种抗体和32例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中的血小板自身抗体,并为PTR... 目的探讨改良抗原捕获ELISA(MACE)在血小板抗体检测及配型中的应用。方法采用MACE分别检测青岛地区医院送检48例血小板输注无效(PTR)患者血清中的血小板同种抗体和32例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆中的血小板自身抗体,并为PTR患者进行血小板配型。结果PTR患者血小板同种抗体检出率为50%(24/48),其中同种HPA抗体阳性率为29.2%(14/48),同种HLA抗体阳性率为39.6%(19/48),抗-HLA占所有免疫性抗体的70.4%(19/24)。ITP患者血浆游离抗体检出率62.5%,其中抗体阳性者全部检出自身抗体,而且全部有抗自身HPA抗体。选择配合性血小板52个治疗量输注,输注后24小时CCI值为(11.35±2.78)×109/L,总有效率82.3%。结论MACE法可以常规应用于PTR患者的血小板抗体检测及配型;MACE法检测血浆中游离的血小板自身抗体可做为辅助诊断ITP的一种方法。 展开更多

关键词 改良抗原捕获elisa(MACE) 血小板抗体 血小板输注无效 血小板减少性紫癜 特发性 配型

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兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立 被引量：5

14

作者 秦海斌 刘怀然 +5 位作者 曲连东 刘家森 韩凌霞 姜骞 李亚明 杨增岐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-31,44,共5页

用兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔... 用兔出血症病毒(RHDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立RHDV抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为1mg/L,兔多抗血清最佳质量浓度为4mg/L。本方法可特异性地检测出兔肝脏病料中的RHDV,纯化病毒的最低检出量为26μg/L。对已知阳性样品的检测显示,捕获ELISA检测的病毒滴度是HA试验的3～13倍。对67份可疑病料,捕获ELISA阳性检出率为62.7%,HA试验阳性检出率为55.2%。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。本方法敏感性、特异性、稳定性良好,可应用于RHDV的快速、批量、特异检测。 展开更多

关键词 抗原捕获:elisa 单克隆抗体 兔出血症

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猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立 被引量：5

15

作者 赵传博 王丽 +4 位作者 董波 陆慧君 赵魁 贺文琦 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期526-531,共6页

采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定。用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方... 采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定。用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1∶2 000稀释,单抗1∶4 000稀释,酶标抗体为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75mg/L。与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致。上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪血凝性脑脊髓炎病毒 单克隆抗体 抗原捕获elisa

原文传递

猪流行性腹泻病毒抗原捕获ELISA抗体检测方法的建立与应用 被引量：3

16

作者 时晓丽 谈晨 +3 位作者 赵攀登 白娟 李玉峰 姜平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1262-1267,共6页

用猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体IgG包被酶标板,以纯化的PEDV作为捕获抗原,建立了PEDV抗原捕获ELISA抗体检测方法。优化后该方法的反应条件为:单克隆抗体包被浓度为2μg/mL,37℃包被2h加4℃过夜;含50g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲... 用猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体IgG包被酶标板,以纯化的PEDV作为捕获抗原,建立了PEDV抗原捕获ELISA抗体检测方法。优化后该方法的反应条件为:单克隆抗体包被浓度为2μg/mL,37℃包被2h加4℃过夜;含50g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液作为封闭液,37℃封闭3h;捕获抗原的质量浓度为5μg/mL,37℃作用3h;被检猪血清做1∶50稀释,37℃作用1h;山羊抗猪IgG-HRP稀释度为1∶2 000,37℃作用45min;底物最佳作用时间为37℃10min。设定阴阳性血清抗体对照,计算血清样品的S/P值,S/P值≥0.37判为阳性,S/P值<0.323判为阴性,介于两者之间为可疑。用建立的ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒等阳性血清,结果均无交叉反应性。该方法的批间和批内变异系数均小于10%。相对国产商品化抗体检测试剂盒,其敏感性、特异性和符合率分别为94.6%、91.3%和93.3%。应用本方法检测山东、浙江和江苏省的308份猪血清样品,结果 PEDV抗体阳性率达89.29%。结果表明,建立的抗原捕获ELISA敏感性、特异性和重复性良好,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 抗原捕获elisa 抗体

原文传递

流行性出血病病毒抗原捕获ELISA方法的建立 被引量：2

17

作者 杨振兴 朱建波 +6 位作者 肖雷 高林 苗海生 何于雯 孟锦昕 杨恒 李华春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-7,共7页

为建立流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,本试验用纯化处理的4种血清型病毒(EHDV-2、5、6和8)混合免疫兔和豚鼠,制备高免血清。以兔抗EHDV为捕获抗体,豚鼠抗EHDV为检测抗体,羊抗豚鼠IgG-HRP为酶标抗体,建立了EHDV抗原捕获ELISA(ant... 为建立流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,本试验用纯化处理的4种血清型病毒(EHDV-2、5、6和8)混合免疫兔和豚鼠,制备高免血清。以兔抗EHDV为捕获抗体,豚鼠抗EHDV为检测抗体,羊抗豚鼠IgG-HRP为酶标抗体,建立了EHDV抗原捕获ELISA(antigen capture ELISA,AC-ELISA)方法。通过反应条件优化,获得最佳工作条件:5%马血清为稀释液,包被抗体1∶15 000稀释,检测抗体1∶20 000稀释,酶标抗体1∶15 000稀释。通过检测60份阴性样品确定临界值,P/N值≥2为阳性、P/N值<1.5为阴性;特异性试验表明该方法仅能检测出各血清型EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、赤羽病病毒(AKAV)及中山病毒(CHUV)无交叉反应;敏感性试验表明该方法可以检出102.47±0.07 TCID50的病毒;批内和批间变异系数均<10%;用RT-PCR与该方法同时对70份参考样品进行检测,符合率为92.86%。表明本试验建立的AC-ELISA方法为EHDV抗原检测提供了一种可靠实用的技术手段。 展开更多

关键词 流行性出血病病毒 抗原捕获elisa 多克隆抗体

原文传递

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体捕获ELISA方法的建立 被引量：8

18

作者 钟发刚 程安春 +2 位作者 王新华 邓宇 郭燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1004-1007,共4页

以纯化的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为抗原免疫BALB/C系小鼠,通过细胞融合和克隆筛选出稳定分泌BVDV抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞接种于BALB/C系小鼠的腹腔内诱生腹水,腹水单抗与BVDV均呈阳性反应。将5A9、2G3和5C2(分别结合不同的... 以纯化的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作为抗原免疫BALB/C系小鼠,通过细胞融合和克隆筛选出稳定分泌BVDV抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞接种于BALB/C系小鼠的腹腔内诱生腹水,腹水单抗与BVDV均呈阳性反应。将5A9、2G3和5C2(分别结合不同的抗原结合位点)诱生的BVDV单抗纯化后等量混合包被酶标板,与鸡抗BVDV IgY(检测抗体)联合应用,建立BVDV抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法。采用方阵滴定法确定单抗、鸡抗BVDV IgY的最适工作浓度,用阴性组织样品作为判定检测结果的D490临界值,最后以建立的AC-ELISA检测临床粪样棉拭子27份,结果表明:该方法敏感性、特异性高,与全血病毒分离结果的符合率达86.36%;与全血和粪样RT-PCR检测结果的符合率分别为89.47%和94.74%。阴性对照RT-PCR、病毒分离和AC-ELISA检测均为阴性。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 单克隆抗体 IGY 抗原捕获elisa

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犬瘟热病毒捕获ELISA试剂盒的研究 被引量：1

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作者 张力 李宏 +1 位作者 李香 张玥 《畜牧兽医杂志》 2013年第6期107-109,112,共4页

建立犬瘟热病毒捕获ELISA，用于该病的快速诊断。方法采用犬抗CDV抗体包被96孔反应板，用以捕获样品中的CDV，再用CDV单克隆抗体和酶标羊抗鼠IgG检测被捕获的CDV抗原，经方阵试验，确立了抗原捕获ELISA的反应条件，并组装ELISA试剂盒。... 建立犬瘟热病毒捕获ELISA，用于该病的快速诊断。方法采用犬抗CDV抗体包被96孔反应板，用以捕获样品中的CDV，再用CDV单克隆抗体和酶标羊抗鼠IgG检测被捕获的CDV抗原，经方阵试验，确立了抗原捕获ELISA的反应条件，并组装ELISA试剂盒。结果用建立的ELISA方法，检测REOV、CPV2、USCCV、CAV-1、CAV-2病毒，均不发生交叉反应；检测犬的临床样本110份。 展开更多

关键词 抗原捕获elisa elisa试剂盒 犬瘟热病毒 elisa方法 单克隆抗体 CDV 快速诊断 反应条件

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牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用 被引量：16

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作者 陈祥 牛中伟 +5 位作者 徐正中 孟闯 孙林 黄金林 潘志明 焦新安 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期54-59,共6页

以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓... 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 牛 Γ-干扰素 抗原捕获elisa 单克隆抗体

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