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改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究 被引量：12
1
作者 张帅 徐锐 +3 位作者 张强 邓勇 刘阳 赖翼 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第35期42-46,共5页
目的观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响。方法改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间。使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞... 目的观察红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间对改良盐析法提取全血基因组DNA的影响。方法改良盐析法提取全血基因组DNA时,分别采用不同的红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间。使用流式细胞术检测红细胞裂解后的细胞总数及死细胞比例,紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。结果红细胞裂解时间从10 min延长至120 min,死细胞比例随时间延长而增加,但细胞总数、DNA产量与纯度无明显变化;采用异丙醇沉淀法纯化DNA得到的DNA产量与纯度均显著高于使用DNA分离柱纯化的DNA;DNA干燥时间从120 min缩短至30 min,既不影响DNA的产量与纯度,也不影响后续PCR扩增实验。结论改良盐析法提取全血基因组DNA时,红细胞裂解时间可延长至120 min,DNA干燥时间可缩短至30 min,异丙醇沉淀法优于DNA分离柱纯化的DNA。 展开更多
关键词 全血基因组DNA提取 改良盐析法 红细胞裂解时间 DNA纯化方式 DNA干燥时间
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改良盐析法和传统盐析法提取绵羊血清γ—球蛋白的比较试验
2
作者 张光天 杨满寿 +2 位作者 张才骏 方之励 程民学 《青海畜牧兽医学院学报》 1986年第1期27-28,21,共3页
动物血中的γ-球蛋白几乎都是免疫性抗体,具有抗菌、抗病毒、中和毒素和刺激生长等作用.医学界利用人胎盘血或人血浆提取γ-球蛋白并应用于临床取得较佳的效果.随着免疫学的发展,国内外兽医科学工作者也越来越重视提取和利用动物血液中... 动物血中的γ-球蛋白几乎都是免疫性抗体,具有抗菌、抗病毒、中和毒素和刺激生长等作用.医学界利用人胎盘血或人血浆提取γ-球蛋白并应用于临床取得较佳的效果.随着免疫学的发展,国内外兽医科学工作者也越来越重视提取和利用动物血液中的生物活性物质,其中包括γ-球蛋白的提取和利用.从动物血液中提取γ-球蛋白的方法很多,有低温乙醇沉淀法、利凡诺(Rivanol)法、硫酸铵盐析法等.但目前在国内,无论实验室提取,还是工厂化大生产,多仍采用硫酸铵盐析法这个较古老的提取方法.如何提高制剂中γ-球蛋白的含量、降低杂蛋白及其它杂质的含量、简化生产工艺、降低生产成本,是兽医生化制药工作者所关心的. 展开更多
关键词 γ-球蛋白 改良盐析法 绵羊血 免疫性抗体 动物血液 人胎盘 利凡诺 硫酸铵盐析法 中和毒素 兽医科学
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红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究 被引量：1
3
作者 行文珍 雷忻 +2 位作者 戚珍珠 田鹏飞 张静静 《延安大学学报（自然科学版）》 2014年第1期58-60,69,共4页
采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法。结果显示:酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获... 采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法。结果显示:酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果。上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法。 展开更多
关键词 遗鸥 DNA提取 酚-氯仿法 改良Miller盐析法
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7种肉类线粒体DNA的提取及鸭源性成分检测 被引量：7
4
作者 曲莉 李潇涵 +3 位作者 王雪松 高丽君 艾金霞 李明成 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2015年第20期107-110,共4页
探讨肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)提取方法,对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。应用改良盐析法和柱层析法提取肉类mt DNA,紫外分光光度计检测mt DNA的浓度和纯度,设计鸭肉cyt b特异性引物,采用PCR对7种生肉中的鸭肉成分进行... 探讨肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)提取方法,对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。应用改良盐析法和柱层析法提取肉类mt DNA,紫外分光光度计检测mt DNA的浓度和纯度,设计鸭肉cyt b特异性引物,采用PCR对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。结果:两种提取肉类mt DNA的方法均能保证DNA的浓度及纯度达到PCR的要求,柱层析法成本略高于改良盐析法;鸭引物可以从7种生肉中鉴别出鸭源性成分,经过多次重复试验证明了鸭肉引物的特异性,为肉制品质量监控的应用提供了实验基础。 展开更多
关键词 改良盐析法 柱层析法 线粒体DNA PCR 鸭肉
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急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病和急性运动性轴索型神经病易感性与HLA-DQ基因的关联性 被引量：1
5
作者 吴书玉 刘登会 +4 位作者 郭力 李春岩 刘瑞春 王桂荣 王维平 《河北医科大学学报》 CAS 2002年第5期260-262,共3页
目的研究格林 巴利综合征 (Guillain Barresyndrome)两种不同亚型急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病 (acuteinflammatorydemyelinating polyneuropathy ,AIDP)和急性运动性轴索型神经病 (acutemotoraxonalneuropathy ,AMAN)与人类白细胞... 目的研究格林 巴利综合征 (Guillain Barresyndrome)两种不同亚型急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病 (acuteinflammatorydemyelinating polyneuropathy ,AIDP)和急性运动性轴索型神经病 (acutemotoraxonalneuropathy ,AMAN)与人类白细胞抗原 Ⅱ (humanleucocyteantigen Ⅱ ,HLA Ⅱ )类基因DQ位点分型的关系 ,探讨AIDP和AMAN患者免疫遗传的特点。方法用改良快速盐析法抽提基因组DNA ,采用聚合酶链反应 顺序特异性引物法 (polymerasechainreaction sequencespecificprimer,PCR SSP)对 31例AIDP患者、33例AMAN患者和 132例健康人进行HLA Ⅱ类基因DQ位点分型。结果AIDP组中DQ5的频率较健康人升高 (Pc =0 .0 2 5 ) ;AMAN组中DQ8的频率较健康人升高 ,但无显著性意义 (Pc =0 .0 7)。结论DQ5与AIDP的易感性可能有关 ,未发现HLA 展开更多
关键词 急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病 急性运动性轴索型神经病 易感性 格林-巴利综合征 HLA抗原 DNA引物 聚合酶链反应 AIDP AMAN 改良快速盐析法
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全血基因组DNA的快速纯化 被引量：7
6
作者 朱德华 《洛阳医专学报》 2003年第1期7-8,共2页
目的 探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法 微量全血通过红细胞裂解后,得到白细胞,再通过白细胞裂解,高盐离子去除蛋白,异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果 该方法简单快速,得到的产品产率高(6.94μg/300μl全血),纯高... 目的 探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法 微量全血通过红细胞裂解后,得到白细胞,再通过白细胞裂解,高盐离子去除蛋白,异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果 该方法简单快速,得到的产品产率高(6.94μg/300μl全血),纯高度(A_(260)/A_(280)=1.82,A_(260)/A_(230)=2.08),完整性好(单一条带)。结论 该方法快速、高效,不仅缩短了实验时间,而且还提高了产品质量,可完全满足实验室快速分析的要求。 展开更多
关键词 全血基因组DNA 纯化 真核细胞 改良高盐盐析法 实验室医学
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