期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到610篇文章
< 1 2 … 31 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组人类ZP3蛋白的研究
1
作者 卢慧 刁华 +3 位作者 肖玉芳 于合国 李铮 施惠娟 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期978-983,共6页
目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状... 目的：探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3（hZP3）蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法：构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Bacmid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的h ZP3全长蛋白（氨基酸1-424）和截短的hZP3蛋白（氨基酸23-348）。摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法。结果：成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72-96 h。重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知。纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合。结论：利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索。 展开更多
关键词 人ZP3 精子 重组蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统
在线阅读 下载PDF
不同区段HIV-1 env基因在Bac-to-Bac昆虫细胞杆状病毒表达系统中的表达及检测 被引量：1
2
作者 谢小燕 郭庆 +3 位作者 程通 李少伟 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-20,共6页
利用昆虫细胞杆状病毒表达系统 ,将从一株HIV - 1阳性克隆质粒中获得的几个HIV包膜蛋白基因片段 ,克隆入转移载体中得到重组病毒。用此重组病毒感染昆虫细胞后表达出 3种HIV包膜蛋白 ,即GP12 0 - 41P、GP41T、GP41P ,分别含有HIV - 1包... 利用昆虫细胞杆状病毒表达系统 ,将从一株HIV - 1阳性克隆质粒中获得的几个HIV包膜蛋白基因片段 ,克隆入转移载体中得到重组病毒。用此重组病毒感染昆虫细胞后表达出 3种HIV包膜蛋白 ,即GP12 0 - 41P、GP41T、GP41P ,分别含有HIV - 1包膜糖蛋白GP12 0及部分GP41,删除了N端 12个疏水氨基酸的GP41和仅有主要表位约 2 40个氨基酸的GP41。收获后分别以Western -blotting和EIA检测 ,有较好的免疫学活性 ,其中GP41T的活性最强。该实验为HIV包膜蛋白的结构研究提供了依据 ,加以改进后可能有免疫检测的价值。 展开更多
关键词 Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统 人免疫缺陷病毒 包膜蛋白 抗原 表达 HIV-1 ENV基因 检测
在线阅读 下载PDF
杆状病毒-昆虫表达系统(IBEVS)表达的动物病毒样颗粒及疫苗研究进展
3
作者 王炎 高婉宁 +3 位作者 范益阳 玉妹 张德荣 柏家林 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第1期203-208,共6页
杆状病毒-昆虫表达系统(IBEVS)是一种高效的外源蛋白表达平台,具有可以容纳较大的外源基因片段、蛋白质表达量较高、支持蛋白质翻译后修饰、操作简便且安全性较高等优势,已被广泛用于兽用疫苗生产。病毒样颗粒(VLP)是一种由病毒蛋白自... 杆状病毒-昆虫表达系统(IBEVS)是一种高效的外源蛋白表达平台,具有可以容纳较大的外源基因片段、蛋白质表达量较高、支持蛋白质翻译后修饰、操作简便且安全性较高等优势,已被广泛用于兽用疫苗生产。病毒样颗粒(VLP)是一种由病毒蛋白自组装形成的纳米颗粒,由于缺乏病毒遗传物质,其安全性较高。VLP表面抗原排列高度有序,可有效诱导免疫反应,是一种新型的亚单位疫苗。本文综述了IBEVS在动物VLP疫苗中的应用现状,分析了当前IBEVS存在的问题及其解决策略,为动物VLP疫苗的进一步开发提供参考。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 杆状病毒-昆虫表达系统(IBEVS) 动物病毒样颗粒疫苗
在线阅读 下载PDF
基于杆状病毒-昆虫细胞表达系统的猪脑心肌炎病毒样颗粒的表达及鉴定
4
作者 王运航 景伟 +3 位作者 穆素雨 孙世琪 郭慧琛 白满元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4571-4578,共8页
脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病... 脑心肌炎(encephalomyocarditis)是由脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)引起的以猪的脑炎、心肌炎为主要特征的病毒性人畜共患病,可感染多种哺乳动物,目前国内尚无有效疫苗。本研究旨在开发一款安全有效的疫苗以防控该病。采用P1、3CD共表达的构建策略,利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得EMCV病毒样颗粒(virus-like particals,VLPs)并将其免疫小鼠,初步评价其在小鼠体内的免疫应答效果。结果显示,免疫组小鼠特异性抗体滴度达到1∶192以上,中和抗体滴度达到1∶64以上,且与ISA206佐剂混合使用可诱导机体产生更高的抗体水平。IL-4、IFN-γ、IL-5、TNF-α细胞因子水平均可达到20 pg·mL^(-1),且明显高于PBS组。综上,本研究获得的EMCV病毒样颗粒疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答,还能诱导炎症细胞因子的产生,有助于激发机体的免疫反应,增强疫苗的保护效果,为EMCV的防控提供了理论依据和技术储备。 展开更多
关键词 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 脑心肌炎病毒 病毒样颗粒
在线阅读 下载PDF
鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量：4
5
作者 张兴晓 邹金峰 +4 位作者 相琪旺 王鑫 陈琳 谢之景 姜世金 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期7-11,共5页
通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表... 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 Cap基因 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 IFA
在线阅读 下载PDF
猪传染性胃肠炎病毒S基因杆状病毒/昆虫细胞表达系统重组质粒的构建 被引量：8
6
作者 任晓峰 李一经 +1 位作者 李广兴 刘宝全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期359-363,共5页
用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC... 用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC—S。用DH10BAC对BAC—S进行转位,获得重组质粒pBAC—S。根据S基因酶切位点分析结果及杆状病毒(Bac-ulovirus)转位区结构特点,用相应的限制性内切酶进行酶切鉴定,并用特异性和通用引物进行PCR分析,证明该重组质粒为含有TH-98株完整S基因的可直接在昆虫细胞进行表达的感染性重组质粒。 展开更多
关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 S基因 杆状病毒 昆虫细胞 表达系统 重组质粒
在线阅读 下载PDF
重组含有Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因的杆状病毒在昆虫细胞中的表达 被引量：4
7
作者 周玲 刘海鹰 +3 位作者 柯越海 王汉明 马林 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期210-214,共5页
用杆状病毒表达系统重组病毒，在昆虫细胞中表达了完整的含有ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因３个外显子开放读码框架的长２．３ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，用免疫荧光染色，结果表明：４８小时表达重组蛋白，７２小时细胞较... 用杆状病毒表达系统重组病毒，在昆虫细胞中表达了完整的含有ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因３个外显子开放读码框架的长２．３ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，用免疫荧光染色，结果表明：４８小时表达重组蛋白，７２小时细胞较完整，免疫荧光染色强阳性，９６小时后细胞出现破碎。我们采集７２小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液，分别采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＨＰＬＣ分子筛法，用免疫蛋白印迹法实验证明，表达的蛋白能被抗ＬＭＰ１的单克隆抗体所识别，测定表达蛋白的分子量为６０ｋＤ。经蛋白含量扫描图分析，采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ－７５柱初步纯化表达的ＬＭＰ１蛋白，将后者进行裸鼠体内致瘤实验，未见肿瘤生长。 展开更多
关键词 杆状病毒 昆虫细胞 潜伏感染膜蛋白 纯化
在线阅读 下载PDF
意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达 被引量：4
8
作者 沈立荣 邢丽苹 +1 位作者 张传溪 程家安 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期367-372,共6页
利用BactoBac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA。提... 利用BactoBac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA。提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2。用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2。SDS-PAGE电泳结果显示,与6×HisTag融合表达的产物蛋白分子量约为18kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5·35%。Westernblot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应。生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6·13μmol·min-1·mg-1。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 蜂毒 磷脂酶A2基因 杆状病毒-昆虫细胞系统 表达
在线阅读 下载PDF
用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36 被引量：5
9
作者 张应玖 金宁一 +2 位作者 金善荣 王宏伟 沈家骢 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期13-16,共4页
目的用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2外膜糖蛋白 gp10 5和跨膜糖蛋白 gp36 ,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法分别将 HIV- 2外膜蛋白 gp10 5和跨膜蛋白 gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载... 目的用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2外膜糖蛋白 gp10 5和跨膜糖蛋白 gp36 ,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法分别将 HIV- 2外膜蛋白 gp10 5和跨膜蛋白 gp36全基因序列克隆到杆状病毒转座载体 p Fast Bac HTa和 p Fast Bac HTb中多角体启动子下游 ,构建成重组转座载体 p Fast Bac HTa- gp10 5和 p FastBac HTb- gp36 ,利用细菌 /杆状病毒 (Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒 ,并在昆虫细胞 Sf9中表达 HIV- 2的 gp10 5和gp36。结果 SDS- PAGE分析结果表明 ,gp10 5基因表达产物为一 6 6 0 0 0 u糖蛋白 ,gp36基因则表达一 410 0 0 u糖蛋白 ,与天然产物一致。 Western blot结果显示 :两者均具有抗原特异性。结论 gp10 5和 gp36在昆虫细胞中得到了高效表达 ,并均被糖基化 ;gp10 5接近天然产物 。 展开更多
关键词 HIV-2 gp105 gp36 杆状病毒 昆虫细胞
在线阅读 下载PDF
ENO1蛋白及其相关活性位点缺失突变蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
10
作者 代鹏钰 杨蕊 +2 位作者 章婷婷 马昕芸 刘会玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期669-674,共6页
目的:利用昆虫杆状病毒表达系统(昆虫BEVS)表达糖酵解酶α-烯醇化酶(ENO1)及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法:利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM... 目的:利用昆虫杆状病毒表达系统(昆虫BEVS)表达糖酵解酶α-烯醇化酶(ENO1)及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法:利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体,获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点,进行优化后将其插入pFastBacTM1载体,获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3,利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结果:成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3,获得大小约2000 bp的基因片段,与预期大小相符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,其分子量约为52000,与预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论:通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,这些蛋白具有反应原性,为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。 展开更多
关键词 α-烯醇化酶 昆虫杆状病毒表达系统 蛋白表达 酶活性位点缺失
在线阅读 下载PDF
EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达 被引量：2
11
作者 林勇平 吴淑华 +2 位作者 杨英 汤郡 马桂璋 《热带医学杂志》 CAS 2003年第2期142-145,F002,共5页
目的　构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法　先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛... 目的　构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。方法　先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆 ,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒 ,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达 ,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。结果　获得了重组LMP1的杆状病毒 ,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白 ,分子量为 6 3kDa左右 ,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论　LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达 。 展开更多
关键词 LMP1 杆状病毒表达系统 昆虫细胞
在线阅读 下载PDF
鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫细胞/杆状病毒系统中的表达 被引量：2
12
作者 韩宗玺 刘胜旺 +1 位作者 孔宪刚 冉多良 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第4期59-62,共4页
将编码鸡的白细胞介素 1 8(chickeninterleukine 1 8,ChIL 1 8)成熟蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上 ,构建真核转移载体pMelBacBChIL 1 8,经限制性内切酶消化、ChIL 1 8特异引物PCR鉴定和确证性序列测定 ,证明目的基因正... 将编码鸡的白细胞介素 1 8(chickeninterleukine 1 8,ChIL 1 8)成熟蛋白的基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB上 ,构建真核转移载体pMelBacBChIL 1 8,经限制性内切酶消化、ChIL 1 8特异引物PCR鉴定和确证性序列测定 ,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pMelBacBChIL 1 8质粒与杆状病毒DNA(Bac N BlueTM DNA)共转染sf9昆虫细胞 ,经四轮蓝斑筛选纯化 ,获得了重组杆状病毒 ,命名为rBaculovirusChIL 1 8。提取病毒染色体DNA ,经ChIL 1 8特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定 ,证明获得了纯化的重组杆状病毒。用该重组病毒接种sf9昆虫细胞 ,收获接种后不同时间的细胞进行SDS PAGE电泳。结果表明ChIL 1 8基因在昆虫细胞中获得了表达 ,表达的重组蛋白分子量约为 2 3kDa。应用在大肠杆菌原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIL 1 8多克隆抗体进行Westernblot分析 ,表明本研究真核系统表达的ChIL 1 8成熟蛋白和前期原核系统表达的ChIL 1 8成熟蛋白均具有生物学活性。 展开更多
关键词 ChIL-18 鸡白细胞介素18 成熟蛋白 昆虫细胞/杆状病毒系统 表达 生物学活性
在线阅读 下载PDF
利用昆虫细胞杆状病毒表达载体系统研制疫苗的研究进展 被引量：6
13
作者 思越 朱一超 +2 位作者 宋曦玉 罗亚妮 程林峰 《热带医学杂志》 CAS 2020年第8期1117-1120,F0003,共5页
灵活、快速和低成本的疫苗开发制造技术可以预防疾病的流行,满足广泛的疫苗接种需要。目前多种疫苗开发平台技术正在涌现,其中昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(IC-BEVS)可兼具真核表达系统和原核表达系统的优势,不仅能够大量表达外源蛋白... 灵活、快速和低成本的疫苗开发制造技术可以预防疾病的流行,满足广泛的疫苗接种需要。目前多种疫苗开发平台技术正在涌现,其中昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(IC-BEVS)可兼具真核表达系统和原核表达系统的优势,不仅能够大量表达外源蛋白还能对其进行较为完善的翻译后加工修饰。昆虫细胞易于大规模培养,可有效降低生产成本。同时昆虫细胞不能被人类病原体所感染,安全性好。以上这些优点使得IC-BEVS在疫苗研制中被广泛应用。本文就近年来国内外利用IC-BEVS研制疫苗的相关进展做简要综述。 展开更多
关键词 昆虫细胞杆状病毒表达载体系统 疫苗 研制
原文传递
利用昆虫杆状病毒载体表达人碱性成纤维细胞生长因子 被引量：2
14
作者 王雅梅 孙丽翠 +3 位作者 闫豫东 司杨 张静宜 祁雅慧 《首都医科大学学报》 CAS 2007年第2期229-233,共5页
目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,hbFGF)基因进行表达,并检测重组蛋白的特异性及生物学活性。方法将人bFGF的cDNA克隆至杆状病毒转座载体pFastBacHTb中,并转化到... 目的利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,hbFGF)基因进行表达,并检测重组蛋白的特异性及生物学活性。方法将人bFGF的cDNA克隆至杆状病毒转座载体pFastBacHTb中,并转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细菌DH10Bac中,获得重组Bacmid/bFGF;纯化DNA后,转染昆虫细胞Sf21,PCR鉴定重组病毒;进一步将重组病毒感染Sf21细胞,在Sf21细胞中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western bloting分析;MTT法检测表达产物的生物活性。结果重组Bacmid/bFGFDNA直接转染昆虫细胞得到重组病毒rAcV-Bac-bFGF,病毒滴度MOI值≈8。重组病毒在感染后48h开始出现一相对分子质量为23000大小的特异带,感染后72h蛋白量明显增加,96h蛋白量达到最大,120h蛋白量开始减少。在正常昆虫Sf21细胞的对照中未见该蛋白带。Western bloting显示目的蛋白条带与人bFGF抗体发生特异反应。MTT结果显示重组蛋白能明显促进3T3细胞的分裂增殖。结论利用杆状病毒表达系统可成功表达具有生物学活性的bFGF蛋白。 展开更多
关键词 人碱性成纤维细胞生长因子 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 昆虫细胞 基因表达
在线阅读 下载PDF
猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达 被引量：1
15
作者 段博芳 张利仙 +5 位作者 段纲 董俊 叶玲玲 周晓黎 徐志斌 艾军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1118-1122,共5页
目的获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质。方法根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载... 目的获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质。方法根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFast-BacHTB-NP。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bac-mid-NP。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。结果通过SDS-PAGE和Westernblotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD。结论实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达。 展开更多
关键词 H1N1 NP基因 杆状病毒表达载体 昆虫细胞
在线阅读 下载PDF
在Sf9昆虫细胞-杆状病毒系统中表达毒蕈碱型M_2及M_5受体重组突变体 被引量：1
16
作者 牟男 孙洪良 +1 位作者 郑建全 王丽韫 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期320-326,共7页
目的为乙酰胆碱毒蕈碱(M)受体亚型特异性的变构调节剂及基因工程的研究提供实验平台。方法用PCR及搭桥PCR法对乙酰胆碱M2及M5受体作以下突变:①将N-糖基化位点Asp突变为Asn;②删除对蛋白酶敏感的M受体的第三个细胞内环;③在C端添加凝血... 目的为乙酰胆碱毒蕈碱(M)受体亚型特异性的变构调节剂及基因工程的研究提供实验平台。方法用PCR及搭桥PCR法对乙酰胆碱M2及M5受体作以下突变:①将N-糖基化位点Asp突变为Asn;②删除对蛋白酶敏感的M受体的第三个细胞内环;③在C端添加凝血酶识别位点(CMV)和6-His标记。将PCR扩增出重组嵌合蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞表达M2/M5受体蛋白。Western印迹及放射性配体受体结合实验验证受体的正确表达及功能。结果通过搭桥PCR,成功扩增出1018 bp的重组M2受体和1041 bp重组M5受体核酸序列;使用pUC/M13的扩增引物成功构建M2/M5重组转移载体。将重组载体质粒与线性化病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒并感染昆虫细胞,见细胞空泡样病变。Western印迹分析确定重组杆状病毒感染昆虫细胞M2/M5蛋白表达,放射性配体受体饱和实验结果表明,表达的重组受体蛋白与[3H]N-甲基-东莨菪碱具有特异性结合能力。结论 Sf9昆虫细胞能够表达M2及M5重组受体蛋白,M2及M5重组受体蛋白的病毒样颗粒可用于M受体的新药研究。 展开更多
关键词 乙酰胆碱 毒蕈碱受体 昆虫细胞 杆状病毒 基因克隆 基因表达
在线阅读 下载PDF
山羊IL-18成熟蛋白在昆虫细胞／杆状病毒中的表达及其活性分析 被引量：1
17
作者 王婷婷 王希辉 +5 位作者 范忠玲 陈金龙 曹丙蕾 孔娜 胡敬东 赵宏坤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期173-176,共4页
目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化... 目的:在昆虫细胞/杆状病毒中表达山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白,并对其生物学活性进行分析。方法:将编码山羊白介素18(gIL-18)成熟蛋白的基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual上,构建重组质粒pFastBac Dual-gIL18,将该重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-gIL18,在Cellfectin作用下,将Bacmid-gIL18转染昆虫细胞sf9,收获感染后不同时间段的细胞,进行SDS-PAGE、Western blot检测和生物学活性分析。结果:重组蛋白获得正确表达具有良好的免疫原性;生物学活性分析表明,重组蛋白能够促进淋巴细胞增殖、诱导淋巴细胞分泌IFN-γ。结论:用昆虫细胞/杆状病毒系统成功表达了gIL-18成熟蛋白,且具有良好的免疫原性和生物学活性,从而为进一步研究gIL-18作为免疫调节剂和免疫佐剂在生产上的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊IL-18 杆状病毒 昆虫细胞 生物学活性
在线阅读 下载PDF
日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因的杆状病毒表达载体构建和在昆虫细胞中的表达 被引量：1
18
作者 王海 胡少敏 +3 位作者 黄艳 吕刚 吴忠道 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期656-659,共4页
目的构建日本血吸虫的翻译控制肿瘤蛋白(SjTCTP)基因的杆状病毒重组供体质粒pFASTA-TCTP,用该重组转移质粒转化含有杆状病毒表达载体以构建BacmidGFP-TCTP,感染昆虫细胞进行表达。方法将已克隆的SjTCTP基因与线性化的pFASTA进行连接为pF... 目的构建日本血吸虫的翻译控制肿瘤蛋白(SjTCTP)基因的杆状病毒重组供体质粒pFASTA-TCTP,用该重组转移质粒转化含有杆状病毒表达载体以构建BacmidGFP-TCTP,感染昆虫细胞进行表达。方法将已克隆的SjTCTP基因与线性化的pFASTA进行连接为pFASTA-TCTP,使pFASTA-TCTP与DH10BAC感受菌进行转座重组,利用抗性及蓝白斑筛选重组BacmidGFP-TCTP克隆,提取BacmidGFP-TCTP转染昆虫细胞Sf9获得有感染力的病毒,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达,通过荧光镜观察、RT-PCR、SDS-PAGE和Western-Blotting检测表达情况。结果获得了重组SjTCTP的杆状病毒,细胞能表达出与SjTCTP单抗结合的、分子量为23kDa左右的融合有组氨酸标签的目的蛋白。结论SjTCTP能在昆虫细胞中获得良好表达,为其的分子生物学活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SjTCTP 杆状病毒表达载体 SF9细胞
在线阅读 下载PDF
重组杆状病毒/昆虫细胞表达体系在肿瘤研究中的应用 被引量：2
19
作者 魏海明 田志刚 《国外医学（肿瘤学分册）》 北大核心 1997年第4期193-195,共3页
杆状病毒/昆虫细胞表达体系是一套新的真核表达体系,本文介绍了该体系的技术原理,以及利用该体系表达癌基因蛋白产物、肿瘤病毒抗原的应用情况,为肿瘤的基础和临床研究提供有用的分子生物学新技术。
关键词 重组体 杆状病毒 昆虫细胞 表达体系 肿瘤研究
在线阅读 下载PDF
杆状病毒载体及其在昆虫细胞中表达外源基因的研究进展 被引量：3
20
作者 聂子林 俞永新 《微生物学免疫学进展》 1991年第1期12-17,共6页
本文介绍了杆状病毒载体在昆虫细胞中表达外源基因的基本策略和发展趋势。杆状病毒载体系统近年来已被人们广泛用来表达人类、动物和植物等的一些重要蛋白质分子,在医学、农业等领域的基因工程研究中发挥了越来越大的作用。杆状病毒载... 本文介绍了杆状病毒载体在昆虫细胞中表达外源基因的基本策略和发展趋势。杆状病毒载体系统近年来已被人们广泛用来表达人类、动物和植物等的一些重要蛋白质分子,在医学、农业等领域的基因工程研究中发挥了越来越大的作用。杆状病毒载体系统表达外源基因的效率高,表达产物的结构和活性与天然产物一致,为当今基因工程研究中最有发展前途的病毒载体表达系统。 展开更多
关键词 杆状病毒载体 基因表达载体 昆虫
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 31 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部