毒蕈碱型胆碱能受体M3调控肝癌细胞侵袭转移的研究 被引量：6

1

作者 张亮 宦宏波 +3 位作者 温旭东 杨大鹏 吴黎雳 夏锋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期509-514,共6页

目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲... 目的探讨毒蕈碱型胆碱能受体M3(muscarinic cholinergic receptors 3,ChRM3)活化对人肝癌细胞侵袭、转移能力的影响及其分子机制。方法 Western blot检测两种人肝癌细胞株Hep G2和SMMC-7721中ChRM3受体的表达;采用氯贝胆碱(Beth)及达菲那新(UK88525)处理肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞,分为空白对照组、Beth组、Beth+UK88525组、UK88525组,经处理48 h后,Transwell实验检测两种肝癌细胞经不同分组处理后侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测各组细胞中上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达及下游信号通路PI3K/Akt的变化;采用shRNA干扰质粒经Lipofectamine 2000TM转染肝癌细胞Hep G2以沉默ChRM3,分为空白对照组、Beth组、Beth+sh ChRM3组、sh ChRM3组,分别检测细胞的侵袭、转移能力及EMT、下游PI3K/Akt的改变。结果 Hep G2和SMMC-7721两种肝癌细胞中均有ChRM3受体的表达;Transwell实验显示:Beth单独处理组对肝癌细胞的迁移和侵袭有明显的促进作用,而UK88525能够抑制Beth对肝癌细胞迁移侵袭能力的促进作用(P<0.05);Western blot结果显示:Beth单独处理组能够上调EMT标志蛋白N-Cadherin和Vimentin,下调E-Cadherin的表达,UK88525处理后能够明显抑制Beth促进Hep G2细胞EMT的过程(解除Beth对Hep G2细胞EMT的促进过程),同时也能够抑制PI3K/Akt的活化(P<0.05);干扰质粒沉默ChRM3受体同样能够抑制Beth促肝癌细胞迁移、侵袭的作用,并且抑制Beth诱导的EMT和下游PI3K/Akt的活化(P<0.05)。结论 ChRM3活化能够通过PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞的侵袭和转移。 展开更多

关键词 肝细胞癌 毒蕈碱型胆碱能受体m3 侵袭 转移 上皮-间质转化

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血清毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体水平对甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断价值 被引量：3

2

作者 亚库甫·托合提 张凯楠 +4 位作者 赵辉 吾布里塔里甫·达吾提 张蕊 林仁勇 吕国栋 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2022年第17期2110-2114,共5页

背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗... 背景肝细胞癌(HCC)是一种恶性程度较高的癌症。甲胎蛋白(AFP)是临床常用的HCC诊断标志物,但其灵敏度仅为41%~65%,漏诊率较高,因此亟须寻找新的诊断标志物和诊断方法以提升AFP阴性患者等的HCC检出率。目的评估毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体(m3AchR-Ab)对AFP阴性HCC患者的诊断效能,并探索m3AchR-Ab对HCC患者的诊断价值。方法选取2011年11月至2015年9月入库于新疆医科大学第一附属医院标本库的257例患者血清样本,其中90例已确诊为HCC患者的血清样本为HCC组,89例已确诊为良性肝病(肝硬化及肝血管瘤等肝病)患者的血清样本为良性肝病组,78例健康受试者的血清样本为对照组。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测并比较3组血清m3AchR-Ab水平,分析血清m3AchR-Ab水平与HCC患者性别、年龄、HCC肿瘤大小(最大直径)和数量、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、乙肝表面抗原(HBsAg)的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC的诊断价值。结果HCC组血清m3AchR-Ab水平高于良性肝病组和对照组血清(P<0.05)。m3AchR-Ab水平与HCC肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和HBsAg相关(P<0.05)。血清m3AchR-Ab水平诊断AFP阴性HCC的ROC曲线下面积为0.69〔95%CI(0.54,0.83)〕,最佳截断值为74.00 ng/ml,灵敏度为64.00%,特异度为91.02%。血清m3AchR-Ab联合AFP水平诊断HCC的ROC曲线下面积为0.90〔95%CI(0.85,0.95)〕,灵敏度为90.00%,特异度为88.02%。结论血清m3AchR-Ab水平对AFP阴性HCC具有一定的诊断价值,且使用m3AchR-Ab和AFP联合诊断可提高HCC诊断效能,这可为未来研究新型HCC诊断标志物提供更多参考。 展开更多

关键词 肝肿瘤 甲胎蛋白类 毒蕈碱乙酰胆碱受体m3自身抗体 生物标志物 灵敏度 特异度 影响因素分析 诊断

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毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3在肝门部胆管癌中表达及临床意义

3

作者 张宏伟 王彩茹 +1 位作者 缪国东 张化玉 《河北医学》 CAS 2021年第4期546-551,共6页

目的:探究毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3(CHRM3)在肝门部胆管癌中表达及其与预后的关系。方法:选取2013年1月至2017年4月本院收集的手术切除的69例肝门部胆管癌组织及69例胆管癌癌旁正常胆管组织为研究对象。采用免疫组化法测定肝门部胆管癌... 目的:探究毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3(CHRM3)在肝门部胆管癌中表达及其与预后的关系。方法:选取2013年1月至2017年4月本院收集的手术切除的69例肝门部胆管癌组织及69例胆管癌癌旁正常胆管组织为研究对象。采用免疫组化法测定肝门部胆管癌组织和癌旁组织中CHRM3表达情况,分析CHRM3表达水平与肝门部胆管癌临床病理特征的关系,术后随访3年探究CHRM3表达水平与肝门部胆管癌患者预后的关系。结果:CHRM3在癌旁组织和肝门部胆管癌组织阳性率分别为7.25%和84.06%,差异具有统计学意义(P<0.05)。肝门部胆管癌组织中CHRM3表达水平与年龄、性别无关(P>0.05),与病理分期、病理分级、淋巴结转移、神经浸润有关(P<0.05)。Kaplan-Meier法显示CHRM3阴性肝门部胆管癌患者平均生存时间为(33.69±0.76)个月,显著长于CHRM3阳性肝门部胆管癌患者(23.37±1.02)个月(P<0.05)。多因素分析表明,神经浸润、CHRM3阳性是肝门部胆管癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:CHRM3在肝门部胆管癌中阳性表达率显著上升,与患者病理分期、病理分级、淋巴结转移、神经浸润有关,CHRM3阳性表达率升高是肝门部胆管癌患者不良预后的独立危险因素。 展开更多

关键词 肝门部胆管癌 毒蕈碱型乙酰胆碱受体m3 生存分析

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糖尿病大鼠精囊组织中神经生长因子和胆碱能M3受体的变化 被引量：3

4

作者 陈海娥 肖敦振 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1002-1006,共5页

目的:观察糖尿病大鼠精囊组织中神经生长因子(NGF)和胆碱能毒蕈碱M3受体含量的变化,以探讨糖尿病自主神经病变对精囊的影响,为糖尿病不育的临床防治提供理论依据。方法:成年雄性普通级SD大鼠15只,随机分为正常对照组5只和糖尿病模型组1... 目的:观察糖尿病大鼠精囊组织中神经生长因子(NGF)和胆碱能毒蕈碱M3受体含量的变化,以探讨糖尿病自主神经病变对精囊的影响,为糖尿病不育的临床防治提供理论依据。方法:成年雄性普通级SD大鼠15只,随机分为正常对照组5只和糖尿病模型组10只。链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型成功后饲养8周,取精囊组织进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组化染色。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组HE染色可见大鼠精囊平滑肌细胞减少,腺上皮胞质变薄,结构紊乱。免疫组织化学染色显示,糖尿病模型组NGF阳性强度明显增强,而M3受体则明显减弱,糖尿病模型组与正常对照两组间NGF和M3平均累积光密度(IA)[0.018 7±0.002 4 vs 0.010 0±0.001 5和0.020 9±0.008 5 vs 0.041 2±0.011 7]的差异均具有统计学意义(P均<0.01)。结论:NGF和M3受体在糖尿病鼠精囊中表达改变,提示糖尿病可致精囊自主神经病变。 展开更多

关键词 精囊 神经病变 糖尿病 神经生长因子 毒蕈碱m3受体 大鼠

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ChRM3对胆管癌神经浸润的影响 被引量：2

5

作者 范帅 赵伟 +3 位作者 王国磊 魏宗强 窦蓉蓉 张炳远 《精准医学杂志》 2018年第3期263-266,共4页

目的探讨毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3(ChRM3)对胆管癌神经浸润的影响。方法采用免疫组织化学方法检测60例胆管癌组织及30例正常胆管组织中ChRM3的表达水平;建立小鼠背根神经节(DRG)与胆管癌细胞RBE体外共培养模型,并加入ChRM3激动剂(匹罗卡... 目的探讨毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3(ChRM3)对胆管癌神经浸润的影响。方法采用免疫组织化学方法检测60例胆管癌组织及30例正常胆管组织中ChRM3的表达水平;建立小鼠背根神经节(DRG)与胆管癌细胞RBE体外共培养模型,并加入ChRM3激动剂(匹罗卡品)及其拮抗剂(阿托品),通过观察神经纤维的生长和胆管癌RBE细胞对DRG和周围神经纤维的黏附及浸润,检测ChRM3在匹罗卡品和阿托品作用下对胆管癌RBE细胞浸润DRG及周围神经纤维的影响。结果 ChRM3在胆管癌组织中的阳性表达率高于正常胆管组织,差异有统计学意义(P<0.01)。神经浸润在胆管癌中发生率为91.7%(55/60)。DRG-RBE细胞共培养模型中加入匹罗卡品后,RBE细胞浸润DRG及周围神经纤维的细胞数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),这种作用在加入阿托品后明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。而将阿托品单独作用于胆管癌组织,神经浸润结果与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论 ChRM3参与了胆管癌神经浸润过程,可能为抑制胆管癌的神经浸润提供了新治疗靶点。 展开更多

关键词 胆管肿瘤 受体 毒蕈碱m3 肿瘤浸润 神经系统 体外研究

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限制性内切酶策略鉴定CRISPR/Cas9介导的Chrm3基因敲除小鼠 被引量：3

6

作者 高旭 马宁 +7 位作者 王大勇 张赫 张艳芬 徐亚 贺军 徐书会 霍亚丽 杜智敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期404-409,共6页

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶... CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 毒蕈碱型乙酰胆碱受体m3亚型 遗传改变小鼠 纯合子

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M3受体遗传变异与血压钠钾反应性的关联研究

7

作者 张玺 胡桂霖 +21 位作者 牛泽家馨 杜鸣飞 邹婷 张晓玉 王兰 褚超 廖月圆 马琼 王丹 王科科 贾昊 陈晨 严瑜 孙月 郭统帅 张婕 高卫华 闫睿晨 高可 罗文婧 牟建军 汪洋 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期46-54,共9页

目的M3毒蕈碱乙酰胆碱受体(M3受体)由CHRM3基因编码,广泛分布于心血管系统并发挥重要的心脏调节作用。本研究旨在探讨M3受体遗传变异与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系。方法从中国陕西省农村地区招募来自124个家庭的333名受试者,经... 目的M3毒蕈碱乙酰胆碱受体(M3受体)由CHRM3基因编码,广泛分布于心血管系统并发挥重要的心脏调节作用。本研究旨在探讨M3受体遗传变异与钠钾饮食干预后血压反应性之间的关系。方法从中国陕西省农村地区招募来自124个家庭的333名受试者,经过3 d的基线观察后,依次进行7 d低盐饮食、7 d高盐饮食、7 d高盐补钾饮食。选取13个CHRM3基因单核苷酸多态性(SNP)位点进行相关分析。结果CHRM3基因SNP位点rs10802811与低盐期及高盐期舒张压及平均动脉压反应性显著相关,而rs6429147、rs373288072、rs114677844、rs663148与高盐期收缩压及平均动脉压反应性显著相关。此外,rs6692904与高盐补钾期收缩压、舒张压及平均动脉压反应性显著相关。结论M3受体基因多态性与血压钠钾反应性相关,提示M3受体基因可能参与血压盐敏感性及钾敏感性的形成。 展开更多

关键词 m3毒蕈碱乙酰胆碱受体 基因多态性 血压 盐 钾

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氢溴酸达非那新的合成 被引量：10

8

作者 刘长欢 俞雄 袁哲东 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期825-827,共3页

反式-4-羟基-L-脯氨酸经脱羧、N-保护、Mitsunobu反应、缩合、脱保护基、水解、与L-(+)-酒石酸成盐及碱化等8步反应制得3-(S)-(-)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)四氢吡咯,然后与5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃缩合、成盐制得氢溴酸达非那... 反式-4-羟基-L-脯氨酸经脱羧、N-保护、Mitsunobu反应、缩合、脱保护基、水解、与L-(+)-酒石酸成盐及碱化等8步反应制得3-(S)-(-)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)四氢吡咯,然后与5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃缩合、成盐制得氢溴酸达非那新,总收率约为2%。 展开更多

关键词 氢溴酸达非那新 毒蕈碱m3 受体拮抗剂 尿失禁 合成

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氢溴酸达非那新的合成 被引量：4

9

作者 靳磊 罗峰 +2 位作者 林蓉 黄文才 李子成 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期167-170,共4页

邻溴苯酚经O-烷基化、环合得2,3-二氢苯并呋喃,再经Friedel-Crafts酰化、Wilgerodt反应、水解、酯化、还原和取代反应得到5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃,然后与3-(S)-(?)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)吡咯烷反应、成盐得到氢溴酸达非那... 邻溴苯酚经O-烷基化、环合得2,3-二氢苯并呋喃,再经Friedel-Crafts酰化、Wilgerodt反应、水解、酯化、还原和取代反应得到5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃,然后与3-(S)-(?)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)吡咯烷反应、成盐得到氢溴酸达非那新,总收率约8%。 展开更多

关键词 达非那新 尿失禁 毒蕈碱m3 受体拮抗剂 合成

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CHRM3基因T-149C多态性与2型糖尿病患者体重和血脂水平的关联研究 被引量：1

10

作者 屠印芳 吴松华 +4 位作者 郑泰山 胡承 杨震 贾伟平 项坤三 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期287-290,共4页

目的探讨毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型3（CHRM3）基因T-149C多态性与2型糖尿病发病风险及代谢紊乱的相关性。方法用PCR—RFLP技术在573例上海地区汉族人中检测该基因位点的多态性，计算基因频率分布及比较不同基因型亚组间的各种临床代谢参... 目的探讨毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型3（CHRM3）基因T-149C多态性与2型糖尿病发病风险及代谢紊乱的相关性。方法用PCR—RFLP技术在573例上海地区汉族人中检测该基因位点的多态性，计算基因频率分布及比较不同基因型亚组间的各种临床代谢参数。结果（1）基因频率分布在2型糖尿病组和正常糖耐量组之间的差异无统计学意义。（2）在2型糖尿病组中，TT基因型人群体重指数显著高于TC＋CC基因型[（26．99±3．59vs25．34±3．48）kg／m^2，P=0．001]。（3）2型糖尿病组体重指数≥25kg／m^2亚组中TT基因型人群总胆固醇水平高于TC＋CC型[（5．75±1．26vs5．27±1．14）mmol／L，P=0．030]。结论CHRM3基因T-149C多态位点可能参与2型糖尿病患者体重和脂代谢调节。 展开更多

关键词 糖尿病 2型 受体 毒蕈碱m3 多态性 单核苷酸 体重

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前列腺癌和良性前列腺增生组织中M3受体表达及意义

11

作者 袁明振 赵升田 +2 位作者 孟彦 王洪伟 许纯孝 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期546-549,共4页

目的探讨前列腺组织中胆碱能毒蕈碱受体M3亚型表达在前列腺肿瘤发生发展中的作用。方法收集正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌组织标本各36例。应用RT—PCR方法分别测定标本组织中M3受体、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况；蛋... 目的探讨前列腺组织中胆碱能毒蕈碱受体M3亚型表达在前列腺肿瘤发生发展中的作用。方法收集正常前列腺、良性前列腺增生、前列腺癌组织标本各36例。应用RT—PCR方法分别测定标本组织中M3受体、血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况；蛋白质印迹与免疫组织化学染色方法测定各组标本中M3、VEGF、人白细胞分化抗原34（CD34）的蛋白表达。图像分析系统检测数据，以相对表达强度（目的物质表达强度／β-actin表达强度）作为统计学分析参数。数据统计分析计数资料采用方差分析，分类变量资料采用Y。检验，相关性分析采用Pearson方法。结果前列腺癌组织标本M3受体基因相对表达强度0．8354±0．1897、VEGF基因表达0．7824±0．2047，明显高于良性前列腺增生组织（0．6735±0．1603、0．6021±0．1637）和正常前列腺组织（0．5425±0．1629、0．3436±0．1581），组间差异有统计学意义（P〈0．001），3种组织中M3受体与VEGF基因表达呈直线正相关关系（r=0．4999，P〈0．001）。前列腺癌组织标本M3受体蛋白表达0．4777±0．1638、VEGF蛋白表达0．5718±0．2245，明显高于良性前列腺增生组织（0．3655±0．1474、0．4342±0．1538）和正常前列腺组织（0．2659±0．1076、0．3380±0．1527），组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论M3受体表达与前列腺肿瘤的发生发展有关。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 前列腺增生 受体 毒蕈碱m3 微血管密度

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M3受体肽段免疫大鼠对其肺脏结构和功能的影响

12

作者 薛艳霞 刘学军 +1 位作者 李志刚 张小荣 《中国医师杂志》 CAS 2010年第12期1612-1615,共4页

目的 用M3受体合成肽段免疫大鼠建立主动免疫模型,探讨M3受体自身抗体在慢性阻塞性肺疾病发病中的机制.方法 （1）建立免疫组、对照组动物模型共12周.（2）采用SA-ELISA方法检测两组大鼠血清中的M3受体自身抗体.（3）测定大鼠肺功能及... 目的 用M3受体合成肽段免疫大鼠建立主动免疫模型,探讨M3受体自身抗体在慢性阻塞性肺疾病发病中的机制.方法 （1）建立免疫组、对照组动物模型共12周.（2）采用SA-ELISA方法检测两组大鼠血清中的M3受体自身抗体.（3）测定大鼠肺功能及动脉血气分析.（4）光镜观察大鼠肺组织病理变化.结果 （1）M3受体自身抗体测定：免疫组阳性率为100%,平均抗体滴度（G）为1∶152,与对照组（阳性率8.33%、抗体滴度1∶24）比较差异有统计学意义（x2=6.68、t=3.15,P＜0.01）.（2）肺功能测定：免疫组吸气阻力明显增高,为（1.77±0.22）cmH2O/ml.sec,与对照组[（1.39±0.21）cmH2O/ml. sec]比较差异有统计学意义,肺动态顺应性及第3秒用力呼气量与用力肺活量比值均降低,分别为（0.33±0.04）ml/cmH2O、（81.57±2.36）%,与对照组[（0.43±0.07）ml/cmH2O、（90.79±0.71）%]比较差异有统计学意义（t=3.1l、2.82、3.23,P＜0.01）.（3）动脉血气测定：免疫组PaO2下降为（52.106±5.269）mmHg,PaCO2上升为（66.248±3.321）mmHg,与对照组[（93.407±3.298）mmHg、（39.125±4.091）mmHg]比较差异均有统计学意义（t=3.86、3.47,P＜0.01）.（4）肺组织病理学检查：对照组大鼠支气管、细支气管黏膜上皮结构完整,肺泡结构正常连续.免疫组大鼠支气管、细支气管黏膜上皮脱落,周围腺体增生伴大量炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,肺间隔增厚,肺泡壁变薄或断裂,肺泡腔扩大,部分融合成肺大泡.（5））M3受体自身抗体滴度与肺功能、动脉血气的相关性：M3受体抗体滴度与肺功能、动脉血气均呈正相关（r=0.84、0.79,P＜0.05）.结论 M3受体抗体可以损害大鼠肺脏的结构和功能,促进COPD的发生、发展. 展开更多

关键词 受体 毒蕈碱m3/免疫学 自身抗体/代谢 肽类/免疫学 肺/免疫学/病理生理学

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M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用 被引量：1

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作者 刘强胜 颜学滔 +7 位作者 刘安鹏 袁清红 沈石文 郑菲 张宗泽 陈凯 王焱林 詹佳 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期996-1000,共5页

目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个∕ml的密度接种于6孔板(2 ml∕孔)或培养瓶(4 ml∕瓶)中,采用随... 目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个∕ml的密度接种于6孔板(2 ml∕孔)或培养瓶(4 ml∕瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=5):对照组(C组)、LPS组、PHC+LPS组(P+LPS组)、LPS+M3 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和PHC+LPS+M3 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).C组不给予药物处理;余各组均加入终浓度为0.1μg∕ml LPS;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2μg∕ml;LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol∕L M3受体shRNA的质粒转染细胞.加入LPS后1 h时,采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量;免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达;Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达;ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量;实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M3受体mRNA表达水平.结果 与C组比较,LPS组和P+LPS组F-actin含量降低,VE-cadherin和IκB表达下调,TNF-α和IL-6含量升高,MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05);与C组比较,LPS组M3受体mRNA表达上调(P<0.05),P+LPS组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组和LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05).结论 PHC可通过干扰M3受体,抑制NF-κB介导炎性反应,减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤. 展开更多

关键词 受体 毒蕈碱m3 胆碱能拮抗剂 内毒素类 内皮细胞

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M3胆碱能受体在大鼠脊髓Ⅱ板层甘氨酸能神经元递质释放中的作用

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作者 董蕊 王秀丽 +3 位作者 郭跃先 刘彦涛 王秋筠 霍树平 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期715-717,共3页

目的 探讨M3胆碱能受体在大鼠脊髓Ⅱ板层甘氨酸能神经元递质释放中的作用.方法 健康雄性清洁级SD大鼠,周龄3～4周,体重160～180g,取鞘内置管成功的大鼠20只,随机分为2组（n=10）：生理盐水组（NS组）鞘内注射生理盐水10μl;PTX组鞘内注... 目的 探讨M3胆碱能受体在大鼠脊髓Ⅱ板层甘氨酸能神经元递质释放中的作用.方法 健康雄性清洁级SD大鼠,周龄3～4周,体重160～180g,取鞘内置管成功的大鼠20只,随机分为2组（n=10）：生理盐水组（NS组）鞘内注射生理盐水10μl;PTX组鞘内注射百日咳毒素1.5μg/10μl.于鞘内注射后第7天,制备脊髓薄片,采用全细胞膜片钳技术,于细胞封接后稳定5 min,灌流液中加入终浓度为3 μmol/L的M胆碱能受体激动剂Oxo-M,3 min后洗脱,稳定5 min后加入终浓度为25 nmol/L的特异性M3胆碱能受体阻断剂4-DAMP,3 min后加入于终浓度为3 μmol/L的Oxo-M.于加入Oxo-M前（T1）、加入Oxo-M后3 min（T2）、加入4-DAMP后3 min（T3）、再次加入Oxo-M后3 min（T4）时记录甘氨酸能神经元自发抑制性突触后电流（sIPSCs）的频率和波幅.结果 与T1时比较,两组T2时甘氨酸能神经元sIPSCs频率升高（P＜0.01）,其余时点差异无统计学意义,T2～4时甘氨酸能神经元sIPSCs波幅差异无统计学意义（P＞0.05）;与T2时比较,两组T4时甘氨酸能神经元sIPSCs频率降低（P＜0.05或0.01）;两组甘氨酸能神经元sIPSCs频率和波幅比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 M3胆碱能受体在大鼠脊髓Ⅱ板层甘氨酸能神经元递质释放中发挥主要作用. 展开更多

关键词 受体 毒蕈碱m3 甘氨酸 神经元 神经递质药 脊髓

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M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用：与MAPK信号通路的关系

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作者 沈石文 刘强胜 +6 位作者 郑菲 袁清红 王轶芃 张宗泽 陈凯 王焱林 詹佳 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期1529-1532,共4页

目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中，... 目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中，采用随机数字表法分为6组（n＝5）：空白对照组（C组）、M3受体shRNA转染组（shRNA组）、脂多糖组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋脂多糖组（P＋LPS组）、脂多糖＋M3受体shRNA转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋脂多糖＋M3受体shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。shRNA组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shRNA的质粒转染细胞。LPS组和LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1 h。采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性，采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）的表达水平，采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27（HSP27）的表达水平，采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达。结果与C组比较，shRNA组M3受体mRNA表达下调，LPS组细胞通透性增高，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调（P〈0.05）；与LPS组比较，P＋LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）；与LPS＋shRNA组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）。结论盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关。 展开更多

关键词 受体 毒蕈碱m3 胆碱能药 内皮细胞 毛细血管 肺 内毒素血症 P38丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外信号调节mAP激酶类

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氢溴酸达非那新合成方法研究 被引量：1

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作者 高娟 臧恒昌 《齐鲁药事》 2012年第2期68-69,77,共3页

目的合成氢溴酸达非那新。方法以R-(+)-3-羟基吡咯烷盐酸盐为原料,经氯代、氨基保护、缩合、脱N-保护基、氰基水解,与L-(+)-酒石酸成盐,再经皂化游离等反应,制得3-(S)-(-)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)四氢吡咯,与5-(2-溴乙基)-2,3-二... 目的合成氢溴酸达非那新。方法以R-(+)-3-羟基吡咯烷盐酸盐为原料,经氯代、氨基保护、缩合、脱N-保护基、氰基水解,与L-(+)-酒石酸成盐,再经皂化游离等反应,制得3-(S)-(-)-(1-氨甲酰基-1,1-二苯基甲基)四氢吡咯,与5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃缩合、成盐,制得氢溴酸达非那新。结果与结论氢溴酸达非那新的总收率为23%,产物结构经1H-NMR和MS进行了确认。 展开更多

关键词 氢溴酸达非那新 尿失禁 毒蕈碱m3受体拮抗剂 合成

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消化系统及泌尿生殖系统药物：04028 膀胱过动症药物Vesicare在美上市

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作者 黄敏燕 《国外药讯》 2005年第4期14-14,共1页

日本山之内制药公司的毒蕈碱M3受体拮抗剂，Vesicare(solifenacin succinate)(I)在美国上市，用于治疗有尿急、尿频和急迫性失禁症状的膀胱过动症。紧随其后的其他下一代产品是Novartis公司的产品，Emselex／Enablex(darifenacin，达非... 日本山之内制药公司的毒蕈碱M3受体拮抗剂，Vesicare(solifenacin succinate)(I)在美国上市，用于治疗有尿急、尿频和急迫性失禁症状的膀胱过动症。紧随其后的其他下一代产品是Novartis公司的产品，Emselex／Enablex(darifenacin，达非那新)。于12月下旬在美国批准(欧洲是在10月)，预计近期药品将上市。山之内公司称，在美国，由于怕感到尴尬或者使用其他解决方法，只有有限人数的患者寻求治疗，但是实际上大约有1700万到2000万人深受膀胱过动症之苦。 展开更多

关键词 膀胱过动症药物 Vesicare 美国 上市 毒蕈碱m3受体拮抗剂

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5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃的制备

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作者 唐田 王彦青 彭江华 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期254-255,共2页

2,3-二氢苯并呋喃-5-乙酸与氯甲酸乙酯反应得混酐后,再经硼氢化钠还原制得5-羟乙基-2,3-二氢苯并呋喃,在三苯膦作用下经N-溴代琥珀酰亚胺溴代,制得达非那新中间体5-(2-溴乙基)-2,3-二氢苯并呋喃,总收率约83%。

关键词 5-(2-溴乙基)-2 3-二氢苯并呋喃 达非那新 尿失禁 毒蕈碱m3受体拮抗剂 中间体 合成

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津血源增加口干症模型鼠唾液分泌机制的实验研究 被引量：13

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作者 刘燕 汪红仪 钱先 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2112-2116,共5页

为分析津血源的具体作用机制,该实验对津血源增加口干症模型SD大鼠唾液分泌与激动受体之间的关系进行了研究。研究通过使用M受体阻滞剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶(4-DAMP)和阿托品,或肾上腺受体阻滞剂酚妥拉明,制作3组口干症模型大鼠;... 为分析津血源的具体作用机制,该实验对津血源增加口干症模型SD大鼠唾液分泌与激动受体之间的关系进行了研究。研究通过使用M受体阻滞剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌啶(4-DAMP)和阿托品,或肾上腺受体阻滞剂酚妥拉明,制作3组口干症模型大鼠;造模成功后,予中药津血源灌胃,根据临床常用剂量及SD大鼠体表面积换算,阿托品组将实验动物分为津血源低、中、高剂量组,4-DAMP及酚妥拉明组灌胃中剂量津血源。所有动物给药后,连续测定150 min的唾液分泌量,观察津血源增加唾液分泌的作用特点及与受体之间的关系;并分离大鼠的颌下腺组织,通过Western blot分析津血源对颌下腺细胞水分子通道蛋白5(AQP5)表达的影响。结果发现,比较各组唾液分泌量,与生理盐水组、酚妥拉明组、4-DAMP组及阿托品组相比,津血源组的唾液分泌明显增加,并存在明显差异,P<0.05。在阿托品组中,津血源低剂量组与生理盐水组疗效相当,而津血源中剂量组与生理盐水组相比,存在统计学差异(P<0.05)。唾液分泌量增加的时间曲线图中,发现津血源组与生理盐水组之间存在统计学差异(P<0.05)。与各阻断剂组相比,津血源治疗组颌下腺细胞AQP5蛋白量的表达较前增加,P<0.05;除阿托品组外,津血源对其余2组阻断剂的疗效与生理盐水组无明显差异。对津血源给药后的3种阻断剂AQP5的表达量进行比较,发现津血源对阿托品组的疗效比4-DAMP、酚妥拉明组更明显(P<0.05),后两者之间并不存在统计学差异。因此,研究认为津血源增加唾液分泌(养阴生津作用)的机制可能是通过毒蕈碱M受体(尤其是M3受体)、肾上腺素受体介导的作用途径,增加唾液腺细胞膜AQP5的表达,促进唾液分泌。 展开更多

关键词 津血源 干燥综合征(SS) 唾液分泌 肾上腺素受体 毒蕈碱m3受体 AQP5

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琥珀酸索利那新片联合替勃龙治疗绝经后女性膀胱过度活动症的有效性和安全性研究 被引量：5

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作者 黄余良 张群锋 +3 位作者 刘珏 欧琼 龚美英 董红健 《中国医师杂志》 CAS 2016年第5期724-726,共3页

目的 评价琥珀酸索利那新加替勃龙治疗绝经后女性膀胱过度活动症的有效性和安全性.方法 80例绝经后女性膀胱过度活动症患者采用分层随机化分组方法分为研究组和对照组各40例.研究组：给予琥珀酸索利那新片5 mg,每晚一次口服;替勃龙2.5 ... 目的 评价琥珀酸索利那新加替勃龙治疗绝经后女性膀胱过度活动症的有效性和安全性.方法 80例绝经后女性膀胱过度活动症患者采用分层随机化分组方法分为研究组和对照组各40例.研究组：给予琥珀酸索利那新片5 mg,每晚一次口服;替勃龙2.5 mg,每晚一次口服,疗程为12周.对照组：琥珀酸索利那新片5 mg,每晚一次口服,疗程为12周.记录用药前和用药4周、8周、12周前一日的排尿日记和膀胱过度活动症状评分（OBASS）,比较最大尿流率（MFR）、平均尿流率（AFR）、残余尿量（RUV）的情况.结果 与对照组比较,治疗8周后,研究组患者24 h排尿次数、24h尿急次数、OABSS评分以及MFR、AFR显著改善,残余尿量显著减少（P＜0.05）.研究组患者不良反应发生率为25％,而对照组发生率为20％,两组患者各种不良反应发生率比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 琥珀酸索利那新联合替勃龙治疗绝经后女性膀胱过度活动症有确切的临床疗效,效果优于单用琥珀酸索利那新. 展开更多

关键词 受体 毒蕈碱m3/投药和剂量/拮抗剂和抑制剂 去甲孕甾烯类/投药和剂量 膀胱 过度活动性/药物疗法 绝经后期

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