以邻苯二甲醛为衍生试剂,正缬氨酸为内标,采用柱前在线衍生高效液相色谱(HPLC)分离,荧光检测(FLD)的方法,建立了培养基中游离氨基酸(FAA)代谢消耗谱的定量分析方法。流动相A液为10mm o l/L N a2HPO4-N a2B4O7缓冲液(pH7.95),B液为乙腈-...以邻苯二甲醛为衍生试剂,正缬氨酸为内标,采用柱前在线衍生高效液相色谱(HPLC)分离,荧光检测(FLD)的方法,建立了培养基中游离氨基酸(FAA)代谢消耗谱的定量分析方法。流动相A液为10mm o l/L N a2HPO4-N a2B4O7缓冲液(pH7.95),B液为乙腈-甲醇-水(45∶45∶10,v/v/v);二元线性梯度洗脱,流动相B在35m in内由5%升至52%,33m in内17种FAA全部得到良好分离。应用该方法分别测定了H eLa细胞在紫杉醇和丝裂霉素干预24h后的培养基氨基酸代谢消耗谱(以正常培养组为对照)。以相对峰面积作为原始数据,通过M a tlab7.1软件平台,用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)得分图进行关联研究,结果表明:与对照组相比,培养基游离氨基酸代谢消耗谱能够区分两种不同机制的抗癌药物,为抗癌药物筛选过程中的药物作用机制预归类提供了一种新的技术方法。同时,这种以外观内的方法具有方便、经济的特点。展开更多
文摘以邻苯二甲醛为衍生试剂,正缬氨酸为内标,采用柱前在线衍生高效液相色谱(HPLC)分离,荧光检测(FLD)的方法,建立了培养基中游离氨基酸(FAA)代谢消耗谱的定量分析方法。流动相A液为10mm o l/L N a2HPO4-N a2B4O7缓冲液(pH7.95),B液为乙腈-甲醇-水(45∶45∶10,v/v/v);二元线性梯度洗脱,流动相B在35m in内由5%升至52%,33m in内17种FAA全部得到良好分离。应用该方法分别测定了H eLa细胞在紫杉醇和丝裂霉素干预24h后的培养基氨基酸代谢消耗谱(以正常培养组为对照)。以相对峰面积作为原始数据,通过M a tlab7.1软件平台,用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)得分图进行关联研究,结果表明:与对照组相比,培养基游离氨基酸代谢消耗谱能够区分两种不同机制的抗癌药物,为抗癌药物筛选过程中的药物作用机制预归类提供了一种新的技术方法。同时,这种以外观内的方法具有方便、经济的特点。
