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法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定 被引量：3
1
作者 王臣 郭香玲 +5 位作者 李小康 汪洋 张春杰 吴庭才 李德元 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期966-970,共5页
为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体... 为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆。测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM。通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2μg/m L^20μg/m L浓度下,P6-12肽在2μg/m L^20μg/m L浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20μg/m L浓度下抑制作用最为显著(p<0.01)。此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性。以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性。本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据。 展开更多
关键词 法氏囊 活性五肽 噬菌体随机肽库 抗肿瘤 结合肽
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法氏囊活性肽BP5免疫生物学功能研究进展 被引量：1
2
作者 张聪 王臣 +1 位作者 李德元 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1039-1042,共4页
法氏囊（Bursa of fabricius,BF）是禽类特有的中枢体液免疫器官,相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。三肽囊素（Bursin,BS）是从BF组织中分离的第一个活性肽。作为BF的重要活性组成成分,不仅... 法氏囊（Bursa of fabricius,BF）是禽类特有的中枢体液免疫器官,相当于哺乳动物的骨髓。B淋巴细胞在此发育分化成熟并且参与机体体液免疫应答。三肽囊素（Bursin,BS）是从BF组织中分离的第一个活性肽。作为BF的重要活性组成成分,不仅可以提高禽类免疫功能, 展开更多
关键词 bp5 生物学功能 法氏囊活性肽 研究进展
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重组免疫融合肽Tα1-BP5的表达及其免疫佐剂特性研究 被引量：2
3
作者 王臣 张巫凡 +3 位作者 杨静 郭香玲 李德元 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期326-330,共5页
胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进... 胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进行原核表达,并采用MTT法检测其体外活性。同时以rTα1-BP5联合H9N2型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、IgG抗体亚型和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过攻毒试验评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达;rTα1-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、平衡IgG1和IgG2a抗体、提高Th2型(IFN-γ)和Th1(IL-4)型细胞因子的分泌水平,表明rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除。以上结果提示,rTα1-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺素Tα1 法氏囊活性五肽bp5 融合表达 免疫佐剂
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抗BP5-KLH多克隆抗体的制备及鉴定
4
作者 王嘉伟 张巫凡 +1 位作者 张聪 王臣 《兽医导刊》 2016年第12期201-201,共1页
本研究设计将BP5与KLH偶联制备免成疫原.制定免疫程序,用此免疫原免疫家兔,收集兔抗BP5-KLH血清,并分离纯化动物血清,使之能大批量生产制备,用间接ELISA测定兔抗BP5-KLH多抗血清的抗体效价.用硫酸铵盐析法对多抗血清中的蛋白质进行粗提... 本研究设计将BP5与KLH偶联制备免成疫原.制定免疫程序,用此免疫原免疫家兔,收集兔抗BP5-KLH血清,并分离纯化动物血清,使之能大批量生产制备,用间接ELISA测定兔抗BP5-KLH多抗血清的抗体效价.用硫酸铵盐析法对多抗血清中的蛋白质进行粗提纯,并检测其含量,为进一步建立BP5-KLH的ELISA检测方法奠定实验基础. 展开更多
关键词 法氏囊 法氏囊活性五肽 多克隆抗体 ELISA 效价
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胸腺五肽和法氏囊活性五肽的融合表达及其对禽流感灭活疫苗的佐剂效应 被引量：1
5
作者 王臣 郭香玲 +3 位作者 李小康 吴庭才 李德元 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期648-658,共11页
胸腺五肽(Thymopentin,TP5)和法氏囊活性五肽(Bursopentin,BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在基因水平上的联合应用尚未见报道。为研究TP5和BP5形成的重组融合肽TP5-BP5(TBP5)是否具有免疫佐剂活性,根据大肠杆菌偏嗜密码子设计并合... 胸腺五肽(Thymopentin,TP5)和法氏囊活性五肽(Bursopentin,BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在基因水平上的联合应用尚未见报道。为研究TP5和BP5形成的重组融合肽TP5-BP5(TBP5)是否具有免疫佐剂活性,根据大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽TBP5编码序列,将其克隆至p ET-32a表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达,并采用MTT法检测其表达产物的体外活性。同时以TBP5联合H9N2型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、HA抗体效价和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,TBP5在大肠杆菌中获得表达;TBP5能显著促进小鼠胸腺T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞的增殖,并能增强机体免疫后HI抗体和HA抗体效价、提高细胞因子IL-4和IFN-γ的分泌水平,表明TBP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示TBP5有助于小鼠肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。结果表明,重组融合肽TBP5具有良好的免疫佐剂的潜能,为进一步研究开发新型疫苗佐剂奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺五肽 法氏囊活性五肽 融合表达 免疫佐剂
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重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆、表达及其免疫佐剂特性 被引量：1
6
作者 王臣 郭香玲 +2 位作者 李小康 李德元 陈溥言 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1476-1482,共7页
胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21... 胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达。为进一步评价重组融合肽Tβ4-BP5的免疫佐剂特性,以Tβ4-BP5联合灭活H9N2型AIV疫苗免疫鸡,检测免疫后鸡的HI抗体效价、抗原特异性IgG抗体、AIV中和抗体效价及Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对鸡的免疫保护作用。结果显示,重组融合肽Tβ4-BP5在大肠杆菌中获得表达;Tβ4-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、特异性IgG抗体水平、促进AIV中和抗体的产生、提高Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,表明Tβ4-BP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示Tβ4-BP5有助于鸡肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。以上结果提示,重组融合肽Tβ4-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 展开更多
关键词 胸腺肽Tβ4 法氏囊活性五肽bp5 融合基因 克隆 表达 免疫佐剂特性
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法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞的功能研究
7
作者 张则 郑阳 +2 位作者 郝珊珊 蔡佳希 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第5期88-93,共6页
旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平... 旨在探索法氏囊活性肽BP7和BP9调节T细胞亚型的功能。采用禽流感灭活疫苗免疫小鼠,利用磁珠CD3阴选分选免疫小鼠T细胞,再用法氏囊多肽BP7和BP9刺激T细胞,检测T细胞活力及亚型变化情况。MTT结果表明,BP7和BP9均能提高活化T细胞的活力水平;流式分析图显示,法氏囊多肽BP7促进活化T细胞增殖分化成CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+) T细胞,而BP9在48 h促进CD3^(+)CD8^(+) T细胞比例增加,但未达到差异水平;细胞凋亡结果显示,BP7和BP9均能抑制T淋巴细胞早期凋亡。此外,ELISA检测表明,BP7促进T细胞分泌IL-4和IFN-γ。以上结果表明:法氏囊活性肽BP7和BP9均参与T细胞分化成熟反应,但其调节功能略有差异。 展开更多
关键词 法氏囊活性肽bp7 bp9 H9N2灭活疫苗 T细胞亚型
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法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的基因表达谱及功能分析
8
作者 李彤彤 张则 +4 位作者 陈佳静 李陈飞 卢安然 周广防 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第4期82-88,共7页
试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平... 试验旨在探索法氏囊活性肽BP7调节鸡未成熟B细胞的分子基础。利用BP7刺激禽前B淋巴细胞DT40细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测IgM的mRNA水平,并采用基因芯片分析基因表达谱及其生物学功能。结果显示,BP7刺激的DT40细胞产生IgM的mRNA水平明显升高。基因芯片分析发现,BP7处理的DT40细胞中共有1345个差异表达基因。通路分析发现,BP7诱导DT40细胞的差异表达基因涉及17条通路,包括受体互作、信号通路、代谢和蛋白质分解相关通路等。通路网络分析发现,细胞因子-细胞因子受体互作是BP7刺激后DT40细胞相关途径中的关键通路。基因本体论(GO)功能分析发现,BP7刺激DT40细胞中涉及的免疫相关功能主要包括免疫应答、免疫应答信号、Th1型免疫应答、细胞因子的产生和调节及其受体活性等方面。该研究阐述了法氏囊活性肽BP7调节禽未成熟B细胞的分子基础,为进一步研究法氏囊活性肽调控B细胞分化的分子机制提供了新的数据。 展开更多
关键词 法氏囊活性肽bp7 DT40细胞 基因表达谱 通路分析 生物学功能
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