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流行性造血器官坏死病病毒抗原捕获ELISA建立 被引量：1
1
作者 刘宁 高志强 +5 位作者 谷强 张旻 景宏丽 江育林 张利峰 刘金华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期10-12,I0001,共4页
使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱... 使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱生腹水获得单抗3A4。以抗EHNV多克隆抗体为捕获抗体,单抗3A4为检测抗体,使用HRP标记的羊抗鼠IgG作为酶标二抗,建立了EHNV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出103TCID_(50)的病毒液上清和0.0056!g的MCP重组蛋白。对纯化的GCRV、IHNV、IPNV、VHSV及SVCV病毒液进行检测,结果均为阴性,未发现交叉反应。本研究建立的EHNV抗原捕获ELISA方法,具有敏感、特异和重复性好的特点。通过应用于人工感染样品和临床样品的检测进一步证实了本检测方法的实用性。 展开更多
关键词 流行性造血器官坏死病 抗原捕获ELISA
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流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序方法研究
2
作者 王娜 张旻 +4 位作者 张舟 景宏丽 任彤 张利峰 吴绍强 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期721-725,共5页
为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方... 为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方法。试验结果显示,该方法扩增基因片段长度为137 bp,焦磷酸测序长度为38 bp,能够特异性检测出流行性造血器官坏死病毒,最低核酸检测限为0.5 pg/μL,与常规PCR检测方法的符合率达100%。本研究建立的流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流行性造血器官坏死病毒的快速检测提供了一种可行方法。 展开更多
关键词 流行性造血器官坏死病毒 焦磷酸测序 PCR 检测
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流行性造血器官坏死病毒(EHNV)PCR快速检测试剂盒的研制 被引量：3
3
作者 黄辉三 李明玉 +2 位作者 母尹楠 敖敬群 陈新华 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期128-131,共4页
以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的... 以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的检测灵敏度相当于31个病毒粒子,模板制备时间约30 min,约4 h即可得到准确的结果;且无非特异性扩增带,适用于由EHNV病毒感染的鱼类苗种和水产品的检疫及水质环境的监测. 展开更多
关键词 生物技术 虹彩病毒 流行性造血器官坏死病毒(EHNV) PCR检测 试剂盒
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流行性造血器官坏死病病毒MCP蛋白表达
4
作者 刘宁 高志强 +7 位作者 高隆英 谷强 刘朋朋 江育林 景宏丽 张旻 张利峰 刘金华 《中国动物检疫》 CAS 2013年第9期72-76,共5页
采用RT-PCR方法克隆流行性造血器官坏死病病毒CH-1株MCP蛋白基因编码区,进而将膜外区编码基因片段,克隆于pET-32a,重组质粒pET-32a-MCP转化ROSETTA(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot试验证明表达产... 采用RT-PCR方法克隆流行性造血器官坏死病病毒CH-1株MCP蛋白基因编码区,进而将膜外区编码基因片段,克隆于pET-32a,重组质粒pET-32a-MCP转化ROSETTA(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot试验证明表达产物具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 流行性造血器官坏死 蛋白表达 RT-PCR
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流行性造血器官坏死病的传入风险分析
5
作者 江育林 王娜 +1 位作者 张旻 景宏丽 《中国动物检疫》 CAS 2016年第7期12-17,共6页
为确定导致流行性造血器官坏死病(EHN)进入我国的各种可能因素,通过病原学和流行病学分析,逐一评估可能产生的不同程度的风险。分析认为,EHN传入的主要威胁是来自疫区的活虹鳟和鲈鱼,其次是冰冻和冰鲜的虹鳟和鲈鱼。分析指出,只有根据... 为确定导致流行性造血器官坏死病(EHN)进入我国的各种可能因素,通过病原学和流行病学分析,逐一评估可能产生的不同程度的风险。分析认为,EHN传入的主要威胁是来自疫区的活虹鳟和鲈鱼,其次是冰冻和冰鲜的虹鳟和鲈鱼。分析指出,只有根据感染特点,采取不同的检疫措施,才能有效控制进口鱼携带病毒传入我国。 展开更多
关键词 流行性造血器官坏死病 传入风险分析 流行分布 检疫措施
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流行性造血器官坏死病 被引量：2
6
作者 陈爱平 江育林 +4 位作者 钱冬 陈昌福 李安兴 黄捷 杨冰 《中国水产》 北大核心 2010年第12期57-58,共2页
流行性造血器官坏死病（Epizootic haematopoietic necrosis,E H N）是由一种虹彩病毒感染所引起的全身性疾病,主要感染赤鲈（Perca fluviatilis,俗名河鲈）
关键词 造血器官 流行性 坏死 病毒感染 全身性疾病 赤鲈 俗名
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纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响
7
作者 李亚军 王建福 +6 位作者 海强 吕娜娜 罗志源 郸彩霞 李洁 刘哲 余海涛 《水产科学》 北大核心 2025年第1期47-55,共9页
为研究纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响,在水温17~18℃下,将体质量(20±2)g的虹鳟养殖在直径1.2 m、高0.6 m的圆形鱼池中,水深0.3 m,投喂纳米硒含量为0(对照)、1、2、5 mg/kg的饲料7 d,腹腔注射1×10^(5)pfu/mL... 为研究纳米硒对虹鳟传染性造血器官坏死病毒抗性的影响,在水温17~18℃下,将体质量(20±2)g的虹鳟养殖在直径1.2 m、高0.6 m的圆形鱼池中,水深0.3 m,投喂纳米硒含量为0(对照)、1、2、5 mg/kg的饲料7 d,腹腔注射1×10^(5)pfu/mL的传染性造血器官坏死病毒0.2 mL,放回原池继续饲养,分别在饲喂第7天和攻毒后的第1、2、3天,采集肝脏和尾静脉血液样品,比较各组虹鳟肝脏免疫和抗氧化相关酶活性、免疫相关基因表达量以及血清抗体水平差异。试验结果显示:攻毒前,添加1 mg/kg纳米硒可使虹鳟肝脏谷胱甘肽过氧化物酶和血清肿瘤坏死因子-α活性显著升高(P<0.05),添加5 mg/kg纳米硒可使MX-1和IL-1β基因表达量显著升高(P<0.05)。攻毒后,添加纳米硒各组虹鳟第1~3天血清肿瘤坏死因子-α、补体蛋白3和白介素-1β水平以及肝脏过氧化氢酶活性分别出现显著升高(P<0.05);而第3天肝脏丙二醛含量显著降低(P<0.05),添加2、5 mg/kg纳米硒可使虹鳟肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性,VIG-1、MX-1、TNF-α基因表达量均显著升高(P<0.05)。综上,饲料中添加纳米硒可提高虹鳟肝脏免疫和抗氧化能力以及血清抗体水平,增强对传染性造血器官坏死病毒的抗性。 展开更多
关键词 虹鳟 传染性造血器官坏死病病毒 纳米硒 抗病毒 酶活性 血清抗体
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我国传染性胰脏坏死病流行情况及防控措施
8
作者 潘勇 张文 +2 位作者 李英 梁金婷 徐立蒲 《中国水产》 2025年第3期31-33,共3页
我国的动物疫病名录中将虹鳟传染性胰脏坏死病列为三类动物疫病,其对养殖虹鳟危害极大。本文在连续4年调查监测我国养殖虹鳟传染性胰脏坏死病(IPN)发生情况基础上,结合我国引进虹鳟养殖后IPN发生情况,总结了IPN在我国流行情况、流行特点... 我国的动物疫病名录中将虹鳟传染性胰脏坏死病列为三类动物疫病,其对养殖虹鳟危害极大。本文在连续4年调查监测我国养殖虹鳟传染性胰脏坏死病(IPN)发生情况基础上,结合我国引进虹鳟养殖后IPN发生情况,总结了IPN在我国流行情况、流行特点,提出适合我国国情的防控措施,以供我国水产病害防控技术研究人员和广大虹鳟从业者开展防控工作做参考。 展开更多
关键词 传染性疾病 虹鳟 金鳟 防控措施 大量死亡 传染性造血器官坏死病 病毒病 IPN
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虹鳟传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病重组腺病毒载体的构建
9
作者 李守湖 张雪青 石建高 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2024年第1期86-95,共10页
传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,... 传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病是以感染鲑科鱼类为主的两种传染病。为克隆传染性造血器官坏死病病毒IHNVG基因和传染性胰腺坏死病病毒IPNVVP2基因,并构建其重组腺病毒载体。利用RT-PCR方法分别扩增出IHNVG基因和IPNVVP2基因,通过多基因片段同源重组技术将IHNVG基因和IPNVVP2基因克隆到pAdTrack-CMV载体上,经过线性化后与pAdEasy-1载体在BJ5183菌体内同源重组,构建出重组腺病毒质粒,经PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后,再经PacⅠ线性化后用于转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒。通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达来监控重组腺病毒的复制情况,用western blot法分别检测糖蛋白(G蛋白)和VP2蛋白的表达,并测定重组病毒的滴度。结果显示,克隆出的IHNVG基因和IPNVVP2基因总长度为3036 bp。该病毒在HEK-293细胞中分别表达出蛋白分子质量约为58 kD和54 kD的产物,其滴度为1.0×10^(9.5)mL^(-1)TCID_(50)。结果表明,研究成功获得IHNVG基因和IPNVVP2基因重组腺病毒,该病毒在HEK-293细胞中滴度较高,能够稳定表达。研究结果为下一步研发传染性造血器官坏死病-传染性胰腺坏死病二联疫苗奠定了基础,并为进一步防控传染性造血器官坏死病和传染性胰腺坏死病提供了参考。 展开更多
关键词 虹鳟 传染性造血器官坏死病 传染性胰腺坏死病 G基因 VP2基因 腺病毒载体
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四川成都地区鲑鳟鱼类传染性造血器官坏死病的流行情况
10
作者 刘家星 杨马 +3 位作者 魏文燕 李良玉 刘韬 余泽辉 《渔业致富指南》 2019年第19期51-53,共3页
1四川地区冷水鱼养殖概况近期,全国冷水性鱼类养殖模式现场观摩会在四川省雅安市天全县举行,冷水鱼作为四川省优质出口水产品的一张名片。据《四川日报》报道,2018年四川省冷水鱼鱼子酱产量达20吨,出口量达到18吨,产量占全球的7%,位居... 1四川地区冷水鱼养殖概况近期,全国冷水性鱼类养殖模式现场观摩会在四川省雅安市天全县举行,冷水鱼作为四川省优质出口水产品的一张名片。据《四川日报》报道,2018年四川省冷水鱼鱼子酱产量达20吨,出口量达到18吨,产量占全球的7%,位居全国第一,并有望在3~5年内占据全球产量20%~25%的份额。 展开更多
关键词 鲑鳟鱼类 病毒株 系统发育树 成都市 传染性造血器官坏死病
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虹鳟鱼传染性造血器官坏死病毒蛋白生物信息学分析
11
作者 李杰 张涛 《甘肃畜牧兽医》 2024年第4期132-136,共5页
传染性造血器官坏死病(infectious haematopoietic necrosis,IHN)是虹鳟鱼养殖过程中面临的主要病毒性疾病,目前针对该病尚无可行的治疗方法,研发相应疫苗十分必要。本研究通过生物信息学方法,在NCBI中获得基因登录号,使用ProParam软件... 传染性造血器官坏死病(infectious haematopoietic necrosis,IHN)是虹鳟鱼养殖过程中面临的主要病毒性疾病,目前针对该病尚无可行的治疗方法,研发相应疫苗十分必要。本研究通过生物信息学方法,在NCBI中获得基因登录号,使用ProParam软件分析传染性造血器官坏死病病毒N蛋白、P蛋白、M蛋白、G蛋白和NV蛋白的理化性质,并用SOMPA软件对5种蛋白的二级结构进行预测,使用ABCpred软件和SYFPEITHI软件预测5种蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位,并用VaxiJen 2.0软件评估抗原性。结果表明:N蛋白和G蛋白为稳定蛋白,5种蛋白均具有良好的亲水性,二级结构预测结果显示N蛋白、P蛋白和NV蛋白α螺旋占比较高,分别为59.34%、56.96%和40.54%,M蛋白和G蛋白无规则卷曲占比较高,分别为37.95%和55.51%;B细胞抗原表位预测结果表明N蛋白有11个、P蛋白有5个、M蛋白有3个、G蛋白有9个、NV蛋白有1个;T细胞抗原表位预测结果表明N蛋白有CTL表位9个、Th表位9个,P蛋白有CTL表位1个、Th表位5个,M蛋白有CTL表位1个、Th表位4个,G蛋白有CTL表位4个、Th表位5个,NV蛋白有CTL表位2个、Th表位3个。综上所述,N蛋白和G蛋白为稳定蛋白,具备良好的亲水性,抗原表位丰富,有良好的疫苗开发价值。 展开更多
关键词 虹鳟鱼 传染性造血器官坏死病 生物信息学
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虹鳟鱼传染性造血器官坏死病的流行情况及防控策略 被引量：2
12
作者 何亚鹏 杜迎春 时晓 《江西农业》 2018年第18期111-111,共1页
传染性造血器官坏死病是严重危害鲑鳟鱼养殖业的急性病毒性传染病,是当前蓬勃发展的虹鳟鱼养殖业的灾难。基于此,介绍了虹鳟鱼传染性造血器官坏死病的临床症状、诊断方法及流行情况,并提出了相关防控措施,以供参考。
关键词 虹鳟鱼 传染性造血器官坏死病 流行情况 防控策略
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2020年上半年河北省虹鳟鱼传染性造血器官坏死病流行病学调查 被引量：1
13
作者 刘晓丽 《河北渔业》 2020年第10期38-40,共3页
近年来,河北省虹鳟鱼传染性造血器官坏死病发病率呈下降趋势,但2020年上半年又有所上升,给虹鳟鱼养殖业造成较大危害。为了解该病流行情况,对省内主要虹鳟鱼养殖场和发病场进行了监测与调查。结果显示,引种可能是传染性造血器官坏死病... 近年来,河北省虹鳟鱼传染性造血器官坏死病发病率呈下降趋势,但2020年上半年又有所上升,给虹鳟鱼养殖业造成较大危害。为了解该病流行情况,对省内主要虹鳟鱼养殖场和发病场进行了监测与调查。结果显示,引种可能是传染性造血器官坏死病病原的主要来源,滞销压塘造成的水质恶化成为发病的重要诱因,应引起关注。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病 虹鳟 调查
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江西省鲫鱼造血器官坏死病病毒(CyHV-2)感染流行病学研究 被引量：1
14
作者 田飞焱 欧阳敏 +7 位作者 谢世红 王龙 徐节华 刘文珍 花麒 孟霞 银旭红 刘彬 《江西水产科技》 2018年第1期33-37,共5页
为了解江西省鲫鱼造血器官坏死病的流行状况和特征,2015~2017年,从江西省22个区(县、市)的水产养殖(苗种)场采集80批鲫样品,使用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)进行病原鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的监... 为了解江西省鲫鱼造血器官坏死病的流行状况和特征,2015~2017年,从江西省22个区(县、市)的水产养殖(苗种)场采集80批鲫样品,使用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)进行病原鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的监测,扩增部分基因片段,进行测序和做进化树分析。结果显示,80批鲫样品检出CyHV-2型阳性样本6批,阳性检出率为7.5%,江西省存在CyHV-2散在性分布;系统进化分析显示江西省监测的所有CyHV-2毒株与YC110907、SY-C1、JS2012、H.Fukuda等CyHV-2病毒株属同一分支。鉴于目前江西省CyHV-2尚未成扩散的趋势,需加强苗种引种检疫,筑牢产业生物安全屏障。 展开更多
关键词 江西地区 鲫鱼造血器官坏死病 鲤疱疹病毒Ⅱ型 流行病学
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传染性造血器官坏死病病毒CJ-13株糖蛋白的原核表达及免疫原性 被引量：4
15
作者 吉尚雷 张培军 +2 位作者 卢玉婷 王建超 李月红 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2015年第7期1-6,14,共7页
【目的】克隆传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)CJ-13株糖蛋白(G蛋白)基因,构建原核表达载体,并检测其在大肠杆菌BL21中的表达情况,为IHNV诊断试剂盒和疫苗的研制奠定基础。【方法】设计1对G基因特异引物对G基因进行RT-PCR扩增,将扩增产... 【目的】克隆传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)CJ-13株糖蛋白(G蛋白)基因,构建原核表达载体,并检测其在大肠杆菌BL21中的表达情况,为IHNV诊断试剂盒和疫苗的研制奠定基础。【方法】设计1对G基因特异引物对G基因进行RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到pGEM-T Easy载体上,构建重组质粒pGEM-T Easy-G,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将G基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,构建传染性造血器官坏死病病毒G基因原核表达质粒pET-32a-G,转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,采用SDS-PAGE、Western blot和ELISA等方法对表达产物进行分析。【结果】成功克隆了IHNV G蛋白基因,该基因长度为1 527bp。成功构建了原核表达质粒pET-32a-G,诱导表达出约76ku的产物,与预期分子质量大小相符。Western blot分析结果显示,所表达的G蛋白能够被小鼠抗IHNV血清识别。间接ELISA结果显示,小鼠抗G蛋白血清能够识别IHNV全病毒。【结论】成功构建了IHNV G蛋白原核表达系统,重组G蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病病毒 G蛋白 原核表达 免疫原性
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鱼类造血器官坏死病病毒检测及其防控研究进展 被引量：5
16
作者 孙红岩 刘文青 赵宝华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期90-94,共5页
造血器官坏死病病毒(IHNV)为线性单链RNA病毒,是鱼类病毒性病原体的一种,能引起野生及养殖鲑鱼或鳟鱼的急性系统病。鱼类感染该病毒后会造成内脏器官的坏死,引起死亡。造血器官坏死病(IHV)是鱼类病害中较为难治的一种病毒病,截止到目前... 造血器官坏死病病毒(IHNV)为线性单链RNA病毒,是鱼类病毒性病原体的一种,能引起野生及养殖鲑鱼或鳟鱼的急性系统病。鱼类感染该病毒后会造成内脏器官的坏死,引起死亡。造血器官坏死病(IHV)是鱼类病害中较为难治的一种病毒病,截止到目前为止还没有有效的治疗方法。对IHN的防控,主要集中在预防及对IHNV的分子生物学特性研究方面;根据病毒生物学特性开发出有效的防控方法成为目前主要的研究重点。论文主要阐述了IHNV的分子生物学特征以及传染性造血器官坏死(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)的临床症状等,综合近几年国内外对IHNV的研究现状,介绍了几种包括细胞培养、PCR、LAMP等技术在内的几种快速有效的IHNV检测技术,以及病毒疫苗、免疫佐剂、病毒干扰物等在内的主要防控方法。 展开更多
关键词 造血器官坏死病病毒 检测 预防
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鱼类传染性造血器官坏死病毒糖蛋白的酵母表面展示 被引量：2
17
作者 赵景壮 徐黎明 +4 位作者 刘淼 曹永生 尹家胜 刘红柏 卢彤岩 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1106-1113,共8页
糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因... 糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体p YD1,构建重组质粒p YD1-G。将p YD1-G转化酿酒酵母EBY100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达。利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况。细胞免疫荧光结果显示,转化了p YD1-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值。以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病病毒 糖蛋白 真核表达 酵母表面展示
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传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白的研制 被引量：2
18
作者 王树云 高志强 +5 位作者 张旻 谷强 任彤 刘艳华 江育林 张利峰 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期388-395,共8页
为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV... 为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质。本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据Gen Bank中IHNV全基因序列设计特异性引物,以IHNV-uk株病毒核酸为模板,通过RT-PCR获得糖蛋白基因片段,将其克隆至真核表达载体p PICZαA,转入毕赤酵母感受态细胞GS115中,使外源基因与酵母基因融合,通过1%甲醇诱导表达外源蛋白,SDS-PAGE分析显示获得可溶性表达蛋白,分子量大于70 ku。经Western Blot和ELISA分析,该表达产物可以被IHNV多抗特异性识别。0.1531 mg的重组蛋白与0.3125TCID50 IHNV在ELISA实验中反应原性相当,–20°C可稳定保存2个月,说明其在一定程度上可替代病毒作为参考物质。该研究为IHNV ELISA检测试剂盒的开发奠定基础。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病病毒 参考蛋白 毕赤酵母
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进境鱼传播传染性造血器官坏死病风险分析模型的建立 被引量：3
19
作者 吴斌 孙铭英 +1 位作者 于畅 蔡晓萍 《水产学杂志》 CAS 2014年第4期56-59,共4页
世界动物卫生组织(OIE)将传染性造血器官坏死病(IHN)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。本文运用风险分析理论,从危害确定(流行地区、传播方式和传染源、临床症状和潜伏期、发病机理及病理变化等)、传入概率、社会经济... 世界动物卫生组织(OIE)将传染性造血器官坏死病(IHN)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。本文运用风险分析理论,从危害确定(流行地区、传播方式和传染源、临床症状和潜伏期、发病机理及病理变化等)、传入概率、社会经济危害、风险管理(产地选择、时间限制、预防免疫、实验室检疫等)和风险交流(主要为检疫系统评价)等角度切入,建立了进境鱼传播IHN的风险分析模型。风险分析结果:从IHN流行地区进口一尾鲑传入IHN的概率为4.2×10-3。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病 鱼苗 风险分析模型
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金鱼造血器官坏死病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3
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作者 张旻 王姝 +3 位作者 王娜 景宏丽 徐立蒲 吴绍 《中国动物检疫》 CAS 2017年第11期99-103,共5页
金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,... 金鱼造血器官坏死病毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus,GFHNV)是一种可感染金鱼等鲤科鱼类,并可导致其死亡的疱疹病毒。为了快速检测病原,本研究根据GFHNV的主要衣壳蛋白(Major captor protein,MCP)序列中的一段保守基因序列,设计引物和Taq Man探针,建立了GFHNV特异性的实时荧光定量PCR检测方法 ;并利用PCR反应扩增出的MCP基因,制备了p UC-GFHNV重组质粒作为阳性对照。经试验,该方法检测限最低可达10个拷贝数的目的基因,而且与锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)、甲鱼虹彩病毒(Softshell turtle iridovirus,STIV)、流行性造血器官坏死病毒(Epizootic haematopoietic necrosis,EHNV)、斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)以及白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)等5种水生动物病毒无交叉反应。该方法具有简便、快速、敏感、特异等优点,为该病的诊断与病原检测提供了一个重要手段。 展开更多
关键词 鱼类病毒病 金鱼造血器官坏死病毒 主要衣壳蛋白 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
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